Раздел II. Витамины Лабораторная работа №4

КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ВИТАМИНЫ

Цель работы – приобрести умения качественного определения витаминов, необходимые для проведения анализов биологических материалов.

Витаминами называют преимущественно незаменимые низкомолекулярные органические вещества, имеющие разнообразную химическую природу и участвующие в регуляции биохимических процессов на уровне ферментов (как составная их часть). Витамины не являются пластическим материалом и не расходуются в качестве источников энергии.

Классификация витаминов основана на их растворимости в воде и жирах. Для обнаружения витаминов в различных веществах или биологических жидкостях и определения их количества существуют качественные реакции, основанные на цветных реакциях, характерных для той или иной группировки, входящей в витамин.

Исследуемый материал: рыбий жир; 0,05% раствор викасола; порошок тиамина; 0,025% раствор рибофлавина; никотинамид или никотиновая кислота; 1% раствор пиридоксина, 1% раствор аскорбиновой кислоты, черный или зеленый чай.

Реактивы: концентрированная серная кислота; хлороформ; раствор брома в хлороформе 1:60; концентрированная азотная кислота; 0,025% раствор цистеина; 10% раствор NaOH; 1% раствор сульфаниловой кислоты; 5% свежеприготовленный раствор нитрита натрия; 10% раствор карбоната натрия; концентрированная соляная кислота; цинк металлический; 10% раствор CuSO₄; 5% раствор NH₄CNS; 1% раствор FeCl₃; 10% раствор HCl; 5% раствор K₃Fe(CN)₆; FeCl₃ кристаллический.

Оборудование: штатив с пробирками; пипетки; песчаная баня или спиртовка.

1. Проба Друммонда на ретинол (витамин А).

Метод основан на способности концентрированной серной кислоты отнимать воду от ретинола с образованием окрашенных продуктов.

Ход работы: В пробирку вносят 2 капли рыбьего жира, 5 капель хлороформа и 1-2 капли концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, переходящее в буро-красное.

2. Обнаружение кальциферола (витамин Д).

Метод основан на взаимодействии кальциферола с бромом с образованием окрашенных продуктов.

Ход работы: В сухую пробирку помещают 2 капли рыбьего жира и 5 капель раствора брома в хлороформе, перемешивают. Через некоторое время наблюдают зеленоватое окрашивание.

3. Качественная реакция на нафтохинон (витамин К).

Метод основан на способности нафтохинона в присутствии цистеина окрашиваться в лимонно-желтый цвет в щелочной среде.

Ход работы: К 5 каплям раствора викасола (синтетического витамина К) добавляют 5 капель раствора цистеина и 1 каплю 10% раствора NaOH. Развивается лимонно-желтое окрашивание.

4. Обнаружение тиамина (витамин В₁).

Метод основан на способности тиамина образовывать с диазофенилсульфоновой кислотой комплекс оранжево-красного цвета в щелочной среде.

Ход работы: В пробирку вносят 5 капель раствора сульфаниловой кислоты и прибавляют 5 капель раствора нитрита натрия. К полученному диазореактиву добавляют на кончике скальпеля порошок тиамина и 5 капель раствора Na₂CO₃. Встряхивают. Появляется оранжево-красное окрашивание.