- •1.1.2.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
- •1.2. Выявление Legionella pneumophila в объектах окружающей среды
- •2.1. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха
- •1. Общее содержание микроорганизмов в 1 м3 воздуха
- •2. Содержание золотистого стафилококка (s.Aureus) в 1 м3 воздуха
- •3.1. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •II. Прямые санитарно-микробиологические показатели эпидемической опасности почвы — возбудители кишечных инфекций (патогенные энтеробактерии и энтеровирусы).
- •III. Для углубленной оценки санитарного состояния почвы и способности ее к самоочищению исследуют показатели биологической активности почвы.
- •3.1.2. Выявление косвенных показателей
- •3.1.2.1. Определение общих колиформных бактерий (бгкп)
- •3.1.2.2. Определение энтерококков.
- •4.1. Основные методы определения санитарно-показательных микробов в пищевых продуктах:
- •4.1.1. Определение мафам (мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы).
- •4.1.2. Определение бгкп (бактерии группы кишечной палочки).
- •4.1.3. Определение бактерий рода Salmonella.
- •4.1.4. Определение бактерий рода Proteus.
- •4.1.5. Определение коагулазоположительных стафилококков.
- •4.2. Микрофлора молока и молочных продуктов
- •4.3. Исследование кисломолочных продуктов
- •4.4. Микрофлора мяса и мясных продуктов
- •4.4.2. Исследование мяса по СанПин
- •4.4.4. Санитарно-микробиологическое исследование
- •4.5. Санитарно-бактериологическое исследование рыбы
- •4.6. Санитарно-микробиологическое исследование напитков
- •4.6.1. Санитарно-микробиологическое исследование воды для изготовления безалкогольных напитков.
- •4.6.1.1. Определение мафам и бгкп проводят по мук «Вода питьевая».
- •4.6.2. Санитарно -микробиологическое исследование кваса
- •4.6.3. Санитарно-микробиологическое исследование пива
- •4.7. Санитарно-микробиологическое исследование консервов
- •4.7.2. Определение промышленной стерильности консервов:
- •5. Санитарно-микробиологические исследования в лечебно-профилактических организациях (лпо)
- •5.1. Санитарно-микробиологические исследования в стационарах (отделениях) хирургического профиля
- •5.1.1. Плановые исследования:
- •5.2. Санитарно-микробиологические исследования в стационарах (отделениях) акушерского профиля и перинатальных центров
- •5.2.1. В плановом порядке проводят:
- •5.3. Санитарно-гигиенические требования к стоматологическим медицинским организациям
- •5.4. Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и эксплуатации фельдшерско-акушерских пунктов (фап), амбулаторий
- •5.5. Лабораторные исследования объектов окружающей среды в лпо
- •5.5.1. Определение микробиологической чистоты воздуха
- •Раздел 2.1. «Санитарно-микробиологическое исследование воздуха в лпо»
- •5.5.2. Контроль качества дезинфекции объектов больничной среды
- •5.5.3. Контроль качества стерилизации шовного, перевязочного материалов, хирургических инструментов и т.Д.
- •5.5.4. Бактериологический контроль эффективности обработки рук медицинского персонала
- •5.5.5. Микробиологический мониторинг на наличие легионелл в воде
- •Микробиологические показатели безопасности материалов и изделий медицинского назначения1)
1.2. Выявление Legionella pneumophila в объектах окружающей среды
В настоящее время род Legionella включает около 50 видов бактерий, обитающих в пресноводных водоемах в ассоциациях с сине-зелеными водорослями и в организмах свободноживущих простейших. Большинство видов не представляет опасности для человека.
В воде легионеллы размножаются происходит в диапазоне температур, равных 25-45 оС. Условия для размножения легионелл в искусственных водных системах (системы охлаждения и кондиционирования, градирни, компрессорные устройства, джакузи, медицинское оборудование и др.) более благоприятны, чем в естественные, что и приводит к накоплению высоких концентраций бактерий. Основной фактор передачи – водный мелкодисперсный аэрозоль, образуемый системами водных коммуникаций.
Болезнь легионеров (острая пневмония с токсическим синдромом) вызывает L. pneumophila. Поражения респираторного тракта также спорадически вызывают L. micdadei и L. bozemanii. Оппортунистические заболевания могут вызывать L.micdadei, L.longbeachae, L.dumoffii и L.bozemanii, особенно при нарушениях клеточного иммунитета. Остальные виды не патогенны для человека.
Санитарно-микробиологическому исследованию на обнаружение возбудителя болезни легионеров (L. pneumophila) подлежат в порядке надзора:
1. Системы кондиционирования и вентиляции, водонагревательные и охладительные системы
2. Медицинское оборудование и инструментарий
3. Бассейны
4. Аквапарки
5. Джакузи
6. Фонтаны
Выявление L. pneumophila проводят также в ходе проведения противоэпидемических мероприятий и при эпидемиологическом расследовании вспышек болезни легионеров.
Отбор проб. Пробы воды объемом 0,5-1,0 дм3 отбирают в стерильные емкости. Для дехлорирования воды используют кристаллы гипосульфита натрия.
Поверхностные и глубинные пробы отбирают специальными батометрами.
Смывы с объектов (оборудования для кондиционирования и вентиляции, водонагревательных и охладительных систем, медицинского инструментария) забирают тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором и помещают в ту же пробирку.
Поскольку легионеллы способны к образованию биопленок на синтетической и резиновой поверхности водопроводного, промышленного, лабораторного и иного оборудования, связанного с циркуляцией и хранением воды, биопленки также забирают для исследования. Соскобы влажных биопленок с поверхности, находящейся под водой или на границе воды и воздуха, берут сухими тампонами и помещают во флакон или в пробирку. С высохшей поверхности биопленки забирают тампонами, увлажненными стерильным физиологическим раствором и помещают в пробирку со стерильным физиологическим раствором. Доставку проб осуществляют при температуре 6-24 оС.
Подготовка проб к исследованию. В случае сильной загрязненности образцы воды фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр с помощью стеклянной воронки. Затем воду пропускают через мембранный фильтр, который переносят после фильтрации в стерильный флакон с 10 см3 физиологического раствора. Содержимое флакон 1-2 мин перемешивают на встряхивателе или 10 мин на качалке и затем центрифугируют 30 мин при 6000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют. К осадку добавляют 1 см3 стерильного физиологического раствора и переносят в стерильную пробирку.
Для снижения уровня загрязненности сконцентрированной пробы посторонней микрофлорой одну её часть прогревают 30 мин при 50 оС, а другую обрабатывают кислотным буфером КСl-HCl (рН 2,2) в течение 4 мин.
Образцы биопленок, смывы с поверхностей концентрируют с помощью центрифугирования, кислотной и термической обработок.
Проведение анализа. Концентрированные, обработанные кислотным буфером и прогретые образцы засевают по 0,1 см3 на чашки с буферным угольно-дрожжевым агаром (БУДРАГ) с ростовой и селективной добавкой. Помещают в термостат при 37 оС до 10 дней во влажной атмосфере в присутствии СО2. Исследование посевов начинают с 2 суток. Колонии легионелл на селективной среде имеют вросший центр, зернистую или блестящую поверхность; окрашены в серовато-голубоватый или зеленоватый цвет. Идентифицируют легионеллы по морфологическим, тинкториальным (грамотрицательные палочки), антигенным свойствам (реакция латекс-агглютинации с моновалентными и групповыми сыворотками, иммунофлуоресцентная микроскопия с мечеными антителами), а также идентификацией ДНК бактерий в полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Определение количества легионелл в исследуемом материале. Для определения количества легионелл проводят посев исследуемой концентрированной пробы без тепловой и кислотной обработки. Подсчитывают число колоний легионелл, выросших на чашке. Количество легионелл определяют по формуле
Х cа х b s х 1000 см3
где
Х — количество легионелл на литр в исследуемой пробе
a — количество колоний легионелл, выросших на чашке
b — объем концентрата пробы (по завершении этапов фильтрации и центрифугирования) в см3
c — объем, высеянный на чашку, в см3мл
s — объем исходной пробы в дм3
Рекомендуемые значения для оценки уровня контаминации Legionella pneumophila объектов окружающей среды.
1. Присутствие L. pneumophila в воде различных объектов окружающей среды, воде бассейнов, аквапарков, джакуззи, систем кондиционирования воздуха и др. в концентрации менее 1 х 102 микробных клеток на дм3 является допустимым и не требует проведения профилактических мероприятий.
2. Концентрация легионелл в диапазоне от 1 х 102 до 9 х 103 микробных клеток на дм3 не представляет эпидемической опасности, но требует ежемесячного микробиологического контроля и проведения профилактических мероприятий.
3. При обнаружении легионелл в концентрации 1 х 104 микробных клеток на дм3 и выше делают вывод о колонизации данного объекта легионеллами в концентрации, представляющей эпидемическую опасность и требующей дезинфекционных и профилактических мероприятий.