5.5. Лабораторные исследования объектов окружающей среды в лпо

1. Определение микробиологической чистоты воздуха

2. Контроль оценки качества дезинфекции объектов больничной среды

3. Контроль качества стерилизации

4. Бактериологический контроль эффективности обработки рук медицинского персонала

5. Микробиологический мониторинг на наличие легионелл

5.5.1. Определение микробиологической чистоты воздуха

Раздел 2.1. «Санитарно-микробиологическое исследование воздуха в лпо»

5.5.2. Контроль качества дезинфекции объектов больничной среды

При бактериологическом исследовании микробной обсемененности поверхности предметов и изделий медицинского назначения (приборы и аппараты медицинские, оборудование санитарно-гигиеническое, средства перемещения и перевозки, установки стоматологические, оборудование стоматологическое, зубопротезное, оториноларингологическое и т.д.) определяют наличие:

1. Стафилококков

2. БГКП

3. Синегнойной палочи (Ps.аeruginosa)

4. Сальмонеллы

Отбор проб с поверхности различных объектов осуществляется методом смывов. Взятие смывов производят стерильными ватными тампонами на палочках, помещенными в стерильные пробирки. Для увлажнения тампонов в пробирки наливают по 2,0 см³ стерильной 0,1% пептонной воды. Тампоны увлажняют непосредственно перед использованием, берут смыв с объекта и погружают в раствор в той же пробирке.

При контроле мелких предметов смывы проводят с поверхности всего предмета. При контроле предметов с большой поверхностью смывы производят в нескольких местах исследуемого предмета с площади примерно 100 cм².

5.5.2.1. Выявление стафилококков. Из каждой отобранной пробы производят посев 0,2-0,3 см³ смывной жидкости в пробирку, содержащую 5,0 см³ 6,5 % солевого бульона. Засеянные пробирки инкубируют 24 часа при 37 ^оС, после чего производят высев на ЖСА или МЖСА.

Посевы инкубируют 48 часов при 37 ºС. Отбирают подозрительные колонии (круглые, блестящие, выпуклые, пигментированные, с положительной и отрицательной лецитовителлазной реакцией). Подозрительные колонии (не менее 2-х) микроскопируют и пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром и инкубируют 24 часа при 37 ºС. Идентификацию проводят по морфологическим, тинкториальным свойствам и наличию (отсутствию) плазмокоагулирующей активности. По Граму стафилококки окрашиваются положительно (фиолетово-синие кокки, располагающиеся гроздьями). Плазмокоагулирующую активность выявляют в реакции коагуляции плазмы (РКП). При выявлении только плазмокоагулирующей или только лецитовителлазной активности выделенной культуры, определяют ферментацию маннита и мальтозы в анаэробных условиях, гемолитическую активность, хлопьеобразование, образование ацетоина. При необходимости проводят фаготипирование выделенных культур, определяют чувствительность к антибиотикам, бактериофагам и дезинфектантам.

5.5.2.2. Выявление бактерий группы кишечной палочки (БГКП). Производят посев 0,2-0,3 см³ в пробирку с 5,0 см³ среды Кесслера. Через 24часа инкубирования при 37 ºС делают пересев на среду Эндо. На среде Эндо колонии БГКР — красных с металлическим блеском или без него, розовых с тёмным центром, розовых, слизистых, бледно-розовых готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. Пересевают на среду Гисса с лактозой, инкубируют 24 часа при 37 ºС. Лактозаотрицательные колонии изучают для установления их возможной принадлежности к патогенным энтеробактериям.

5.5.2.3. Выявление синегнойной палочки.Производят высев на среду Эндо. Подозрительные колонии (с ровными, слегка волнистыми краями, гладкой блестящей поверхностью с характерным приятным запахом и пигментом (или непигментированные) пересевают на скошенный агар. Идентификацию Ps.аeruginosa производят по следующим свойствам: грамотрицательные, подвижные палочки, оксидазаположительные, растущие при 42  ^оС градусах, не ферментирующие глюкозу.

5.5.2.4. Обнаружение сальмонелл. По 0,2-0,3 см³ смывной жидкости засевают в пробирку с 5,0 см³ одной из сред обогащения (магниевой, селенитовой или среды Раппапорта-Вассилиадиса). После инкубирования в течение 18-20 часов при 37 ºС делают пересев на среду Эндо и висмут-сульфит агар. Затем отбирают подозрительные колонии и идентифицируют.

Норматив: в 1г (см³) образца должны отсутствовать стафилококки, бактерии семейства Enterobacteriaceae и Ps.аeruginosa .