Обработка результатов

Содержание общего азота (Х) в пересчете на абсолютно сухое вещество в процентах вычисляют по формуле:

,

где V₁— объем 0,1 н. раствора гидроокиси натрия, израсходованный на титрование 50 мл 0,1 н. раствора серной кислоты в контрольном опыте, мл;

V₂— объем 0,1 н. раствора гидроокиси натрия, израсходованный на титрование остатка серной кислоты, не связанной с выделившимся аммиаком при его отгонке, мл;

К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидроокиси натрия;

0,0014 — количество азота, эквивалентное 1 мл точно 0,05 моль/л (0,1 н.) раствора серной кислоты;

m— масса навески дрожжей, г;

W— влажность дрожжей, %.

Для пересчета на протеин количества определенного азота умножают на 6,25, условно принимая, что в белках в среднем содержится 16 % азота (100/16=6,25).

Работа 4. Определение массовой доли белка по Барнштейну

Метод определения истинного белка по Барнштейну основан на отделении белковой фракции от других азотсодержащих веществ путем осаждения его сульфатом меди в щелочной среде. При таком разделении веществ в осадке остаются аминокислоты биомассы микроорганизмов, количество которых определяется методом Кьельдаля.

Оборудование, материалы и реактивы

1. Весы аналитические ВЛР-200;

2. Ступка фарфоровая;

3. Стаканчик для взвешивания;

4. Фильтр обеззоленный бумажный;

5. Термостат;

6. Стакан на 100 мл;

7. Колба Кьельдаля на 1 литр;

8. Воронка стеклянная;

9. Электроплитка;

10. Медь сернокислая 5-водная, 6 % раствор;

11. Натрия гидрооксид 1,25 % раствор;

12. Кислота серная концентрированная и 0,1 н. раствор;

13. Перекись водорода , 30 % раствор.

Проведение испытания

Навеску дрожжей определенной влажности массой 0,5—0,8 г, взвешивают в стаканчике с крышкой на аналитических весах с погрешностью не более 0,0002 г и осторожно переносят в лабораторный стакан вместимостью 100 мл. Стаканчик снова взвешивают и по разности между первым и вторым взвешиваниями определяют массу навески, взятой для анализа.

В стакан при перемешивании вносят 30—50 мл нагретой до кипения дистиллированной воды, после чего прибавляют 25 мл 6 % раствора 5-водной сернокислой меди и затем при помешивании приливают 25 мл 1,25 % раствора гидроокиси натрия.

После отстаивания осадка жидкость сливают через фильтр, осадок промывают горячей водой до тех пор, пока фильтрат, стекающий с воронки, не будет бесцветным. Осадок с фильтром подсушивают в термостате при 105 ^оС около 20 мин., затем помещают в колбу Кьельдаля, добавляют около 20 мл концентрированной серной кислоты, тщательно перемешивают, добавляют 10 мл перекиси водорода и перемешивают до полного растворения дрожжей.

Сжигание пробы, отгонку аммиака и обработку результатов проводят как при определении содержания сырого протеина.

Контрольные вопросы

1. Какова структурная формула белка?

2. Какие азотсодержащие вещества присутствуют в составе биомассы микроорганизмов?

3. Что значит незаменимые аминокислоты?

4. Объясните, в чем разница значений определения протеина по методу Кьельдаля и Барнштейна.

5. Каков коэффициент пересчета азота в белок?

6. Возможно ли определение белка в сырой биомассе?

7. Какую предобработку необходимо провести при определении азота в жидком продукте методом Кьельдаля?