Работа 8. Определение общей бактериальной обсемененности.

Требования к качеству и биологической безвредности продукции, получаемой на основе микробиологического синтеза, сочетают условия высокой питательности, биологической активности и безупречного санитарно-токсикологического состояния.

Например, одним из основных требований к товарным кормовым дрожжам является отсутствие в них живых клеток продуцента или продуцентов и незначительная бактериальная обсемененность (не более 150000 клеток в 1 грамме товарного продукта).

Оборудование, материалы и реактивы.

1. Термостат суховоздушный;

2. Колбы конические на 250 мл;

3. Цилиндры на 100 мл;

4. Пипетки с расширенным концом на 1 мл;

5. Пипетки на 10 мл;

6. Чашки Петри;

7. Пробирки стеклянные;

8. Раствор физиологический рН-7,0 или вода водопроводная стерильная;

9. Шпатель металлический;

10. Агар-агар;

11. Пептон.

Проведение испытания

В стерильную пробирку берут навеску дрожжей (после определения влажности) массой 1 г, взвешенную с погрешностью не более 0,0002 г. К навеске добавляют 9 мл физ. раствора (рН-7,0) или стерильной водопроводной воды и тщательно перемешивают стерильной стеклянной палочкой до получения однородной суспензии. После первого разведения 1:10 готовят следующие 1:100, 1:1000 и т.д.

Порядок разведения выбирают в зависимости от предполагаемой обсемененности продукта с тем, чтобы на чашках развивалось 30—300 колоний бактерий. Для приготовления каждого разведения используют стерильную пипетку с расширенным концом.

Посев производят из двух-трех разведений. Каждое разведение высевают на 2—3 чашки Петри. По 1 мл суспензии вносят в чашку Петри и заливают 12—15 мл расплавленного и охлажденного до 45 ^оС МПА. Содержимое чашки тщательно перемешивают осторожными вращательными движениями для равномерного распределения посевного материала.

После застывания агара чашки Петри перевертывают крышками вниз и инкубируют в термостате при 37 ^оС в течение 48 часов.

Обработка результатов.

Количество выросших колоний (КОЕ) подсчитывают в каждой чашке. Оценку результатов производят по посеву того разведения, в котором количество выросших колоний составляет от 30 до 300. По результатам подсчета вычисляют среднее арифметическое значение числа колоний во всех посевах этого разведения. Если в двух следующих друг за другом разведениях количество колоний на чашках находилось в пределах 30—300, то подсчитывают количество колоний в каждом из этих разведений при условии, что полученные результаты не отличаются друг от друга более чем в два раза. В противном случае результаты посева оценивают по наибольшему разведению.

Количество бактерий в 1 г продукта вычисляют умножением среднего арифметического значения на соответствующее разведение навески.

Контрольные вопросы

1. Как определить доминирование производственного штамма микроорганизмов в культуральной жидкости?

2. Какие требования соблюдаются при выполнении микробиологических исследований?

3. Охарактеризуйте структуру микробиологического контроля биотехнологических производств.

4. Назовите основные методы, используемые при микробиологическом контроле биотехнологических производств.

5. Как обрабатываются отработанный материал и посуда после проведения микробиологических работ?

6. Объясните порядок проведения разведений при посеве микроорганизмов на твердые среды.