Работа 3. Определение содержания общего азота (сырого протеина)

Содержание общего азота, сырого протеина (общего белка) в кормовых продуктах, в том числе и дрожжах, определяют по методу Кьельдаля или по одной из многих его модификаций. Этот метод позволяет определить амидный и аммонийный азот.

Оборудование, материалы и реактивы

1. Весы аналитические ВЛР-200;

2. Ступка фарфоровая;

3. Колба Кьельдаля на 1 литр;

4. Пробирки стеклянные;

5. Воронки стеклянные диаметром 4-5 см;

6. Бюретка на 50мл;

7. Колбонагреватель или электроплитка;

8. Цилиндры мерные;

9. Холодильник стеклянный;

10. Воронки капельные;

11. Пипетка на 10 мл;

12. Каплеуловитель;

13. Промывалка стеклянная лабораторная;

14. Бюкс стеклянный или металлический;

15. Бумага лакмусовая;

16. Кислота серная концентрированная и 0,1н. раствор;

17. Гидроокись натрия 33% раствор и 0,1н. раствор;

18. Перекись водорода 30% раствор;

19. Индикатор смешанный.

Проведение испытания

Для определения влажности берут навеску дрожжей массой около 15 г. растирают в фарфоровой ступке. В предварительно высушенный до постоянной массы и взвешенный с погрешностью не более 0,001 г бюкс помещают навеску массой 5 г, взвешенную на аналитических весах с погрешностью не более 0,001г. Бюкс с крышкой и навеской дрожжей помещают в сушильный шкаф, предварительно прогретый до 105 ^оС, и высушивают в течении 40 мин. при этой температуре. Затем бюкс вынимают из сушильного шкафа, закрывают крышкой и ставят в эксикатор для охлаждения. После охлаждения бюкс с навеской взвешивают.

Содержание влаги (W) в процентах вычисляют по формуле:

,

где m — масса навески до высушивания, г;

m₁— масса навески после высушивания, г.

После определения влажности отвешивают около 0,5 г дрожжей с погрешностью не более 0,0002 г в длинную сухую пробирку, свободно входящую в горлышко колбы Кьельдаля. В сухую колбу Кьельдаля осторожно высыпают навеску дрожжей, по возможности глубже опуская пробирку в горлышко колбы. Пробирку вновь взвешивают. По разнице между первым и вторым взвешиваниями определяют массу навески, взятой для анализа. В колбу с навеской вливают цилиндром около 15 мл концентрированной серной кислоты, смывая прилипшие к горлышку колбы частицы дрожжей. Колбу с содержимым ставят в наклонном положении в колбонагреватель, закрепив горло колбы в штативе.

Сжигание продукта производят под тягой, так как при сжигании происходит выделение сернистого ангидрида. Для уменьшения испарения жидкости горло колбы закрывают воронкой. При сжигании необходимо следить, чтобы содержимое колбы сильно не вспенивалось. Сжигание дрожжей с кислотой проводят в течение 40 минут. По истечении этого времени, отключив нагрев, в колбу Кьельдаля пипеткой осторожно по каплям по стенке колбы приливают 10 мл перекиси водорода, по мере уменьшения выделение белых паров скорость приливания увеличивают. Перекись водорода приливают до полного обесцвечивания раствора или приобретения им синевато-зеленоватого оттенка. Общий расход перекиси составляет 10—20 мл. После окончания приливания перекиси водорода сжигание продолжают еще 20 мин. Общее время сжигания продолжается около 1 ч 10 мин.

По окончании сжигания колбу охлаждают и, добавив дистиллированную воду, доводят общий объем раствора до 200—250мл.

Образовавшуюся соль сернокислого аммония разрушают гидратом окиси натрия и отгонку аммиака производят в специальном приборе. Колбу Кьельдаля соединяют через каплеуловитель с шариковым холодильником. Нижний конец трубки холодильника, удлиненный до 16—17 см, погружают в 0,1 н. раствор серной кислоты, налитый в приемную коническую колбу вместимостью 250 мл в количестве 50 мл. В раствор серной кислоты добавляют 5—6 капель смешанного индикатора. После окончания подготовки установки для проведения анализа включают нагрев и осторожно приливают из капельной воронки 100 мл 33 % раствора гидроокиси натрия. Капельную воронку промывают два-три раза 10—15 мл дистиллированной воды, оставляя небольшое количество жидкости в воронке для создания гидрозатвора.

В процессе отгонки аммиака следят за тем, чтобы конец трубки холодильника был погружен в раствор, находящийся в приемной колбе, на глубине не более 1см.

Отгонку ведут до тех пор, пока объем раствора в приемной колбе увеличится примерно в три раза. Окончание отгонки аммиака проверяют по лакмусовой бумаге, смачивая ее жидкостью стекающей из трубки холодильника. Если лакмусовая бумага не изменяет окраску, отгонку аммиака считают законченной, если посинеет — отгонку следует продолжать.

По окончании отгонки аммиака приемную коническую колбу опускают с таким расчетом, чтобы конец трубки холодильника не касался раствора. Колбу Кьельдаля отсоединяют от холодильника, а затем через воронку промывают дистиллированной водой внутреннюю поверхность трубки холодильника и наружную часть трубки, которая опускалась в кислоту. Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н. раствором гидроокиси натрия до обесцвечивания (одна капля избытка гидроокиси натрия дает зеленое окрашивание раствора).

Контрольный опыт в аналогичных условиях, но без навески дрожжей проводят при использовании заново приготовленных реактивов.