- •Оглавление
- •Введение
- •3. Применение хроматографических методов для контроля качества водорастворимых витаминов
- •3.1. Использование хроматографических методов для идентификации
- •3.1.1 Применение тонкослойной хроматографии
- •3.1.2 Определение водорастворимых витаминов в биологически-активных веществах и фармацевтических препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
- •3.1.3 Индентификация отдельных водорастворимых витаминов
- •3.2 Применение хроматографии для определения сопутствующих примесей водорастворимых витаминов
- •3.2.1 Тиамин
- •3.2.2 Рибофлавин
- •3.2.3 Аскорбиновая кислота
- •3.2.4 Фолиевая кислота
- •3.2.5 Рутин
- •3.2.6 Никотиновая кислота
- •3.2.7 Цианокобаламин
- •Заключение
- •Литература
3.2.5 Рутин
Для установления в рутине примеси кверцетина (не более 5%) используют радиальную бумажную хроматографию. Хроматографируют в чашке Петри в 60%-ном растворе уксусной кислоты. При опрыскивании 10%-ым раствором сульфата аммония хроматограммы сушат и просматривают в УФ-свете при 360 нм. Должно быть только одно пятно кверцетина. Устанавливают также отсутствие в рутине алкалоидов, хлорофилла и пигментов, растворимых в эфире, а также других примесей, нерастворимых в этаноле [1].
3.2.6 Никотиновая кислота
Применяют в качестве лекарственного средства кислоту никотиновую. Для определения сопутствующих примесей никотиновой кислоты применяют тонкослойную хроматографию. Готовят:
испытуемый раствор: 0,5 г испытуемого образца растворяют в воде, при необходимости при нагревании, и доводят до объема 25 мл этим же растворителем
раствор сравнения: 0,5 мл испытуемого раствора доводят водой до объема 100 мл.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля GF254P.
Подвижная фаза: вода – кислота муравьиная безводная – пропанол (5:10:85)
Наносимый объем пробы: 5 мкл
Фронт подвижной фазы: не менее 15 от линии старта.
Высушивание: при температуре от 100º С до 105º С в течении 10 минут.
Проявление: пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм.
Предельное содержание примесей:
любая примесь (не более 0,5%): на хроматограмме испытуемого растворалюбое пятно, кроме основного, должно быть не интенсивнее пятна на хроматограмме раствора сравнения [14].
3.2.7 Цианокобаламин
Применяют в качестве лекарственного средства цианокобаламин. Для определения сопутствующих примесей применяют жидкостную хроматографию. Готовят:
испытуемый раствор: 10,0 мг испытуемого образца растворяют в подвижной фазе и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем. Используют раствор в течение 1 часа;
раствор сравнения (а): 3,0 мл испытуемого раствора доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл. Используют в течение 1 часа;
раствор сравнения (в): 5 мл испытуемого раствора доводят подвижной фазой до объема 50,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл. Используют в течение 1 часа;
раствор сравнения (с): 25 мг испытуемого образца растворяют в 10 мл воды, при необходимости нагревая. Охлаждают, прибавляют 5 мл раствора 1,0 г/л хлорамина и 0,5 мл 0,05 М хлористоводородной кислоты, доводят водой до объема 25,0 мл, перемешивают, выдерживают 5 минут. 1 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 10 мл и используют немедленно.
Условия хроматографирования:
колонка, заполненная силикагелем октилсилильным для хроматографии;
подвижная фаза: смесь из 26,5 объемов метанола и 73,5 объемов раствора 10 г/л динатриягидрофосфата, доведенного до рН 3,5 кислотой фосфорной (раствор годен в течение 2 дней);
скорость подвижной фазы: 0,8 мл/мин;
спектрофотометрический детектор, длина волны 361 нм;
объем вводимой пробы: 20 мкл;
время хроматографирования: 3-кратное удерживание цианокобаламина.
Пригодность хроматографической системы:
на хроматограмме раствора сравнения (с) должны обнаруживаться два основных пика;
разрешение: не 2,5 между двумя основными пиками на хроматограмме раствора сравнения (с);
отношение сигнал/шум: не менее 5 для основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с).
Предельное содержание примесей:
сумма примесей (не более 3%): на хроматограмме испытуемого раствора сумма площадей всех пиков, кроме основного, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а).
На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с пики с площадью менее площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (в) (0,1%) [14].
Также при испытании на посторонние примеси (допускается не более 4%) применяется метод тонкослойной хроматографии. Его выполняют на пластинках Силуфол УФ-254. Хроматографируют восходящим методом различные количества цианкоболамина в системе растворителей: хлороформ-метанол – 10% раствор аммиака (15:10:3). Сравнивая величину пятен и интенсивность их красной окраски, делают заключение о наличии посторонних примесей [1].