- •Оглавление
- •Введение
- •3. Применение хроматографических методов для контроля качества водорастворимых витаминов
- •3.1. Использование хроматографических методов для идентификации
- •3.1.1 Применение тонкослойной хроматографии
- •3.1.2 Определение водорастворимых витаминов в биологически-активных веществах и фармацевтических препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
- •3.1.3 Индентификация отдельных водорастворимых витаминов
- •3.2 Применение хроматографии для определения сопутствующих примесей водорастворимых витаминов
- •3.2.1 Тиамин
- •3.2.2 Рибофлавин
- •3.2.3 Аскорбиновая кислота
- •3.2.4 Фолиевая кислота
- •3.2.5 Рутин
- •3.2.6 Никотиновая кислота
- •3.2.7 Цианокобаламин
- •Заключение
- •Литература
3.2.4 Фолиевая кислота
В медицинских целях применяется кислота фолиевая. Для определения сопутствующих примесей фолиевой кислоты применяют жидкостную хроматографию. Готовят:
испытуемый раствор: 0,1 г испытуемого образца растворяют в 5 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната и доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл. 2,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 10,0 мл;
раствор сравнения (а): 0,1 г фолиевой кислоты растворяют в 5 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната и доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл. 2,0 мл полученного раствора доводят плдвижной фазой до объема 10,0 мл;
раствор сравнения (в): к 20 мг птероевой кислоты прибавляют 5 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната, доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл и перемешивают до полного растворения. 1,0 мл полученного раствора смешивают с 1,0 мл раствора сравнения (а) и доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл;
раствор сравнения (с): 2,0 мл испытуемого раствора доводят подвижной фазой до объема 20,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 20,0 мл;
раствор сравнения (d): 10,0 мг N-(4-аминобензоил)-L-глутаминовой кислоты растворяют в 1 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната и доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл;
раствор сравнения (е): к 12 мг птероевой кислоты прибавляют 1 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната, доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл и перемешивают до полного растворения. 1,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл.
Условия хроматографирования:
колонка, заполненная силикагелем октилсилильным для хроматографии;
подвижная фаза: 12 объемов метанола смешивают с 88 объемами раствора, содержащего 11,16 г/л калия дигидрофосфата и 5,5 г/л дикалиягидрофосфата;
скорость подвижной фазы: 0,6 мл/мин;
спектрофотометрический детектор, длина волны 280 нм;
объем вводимой пробы: по 5 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (в), (с), (d), (е);
время хроматографирования: 3-кратное время удерживания фолиевой кислоты.
Относительное удерживание (по отношению к фолиевой кислоте, время удерживания – около 8,5 мин): примесь А – около 0,5; примесь D – около 1,33.
Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (в):
разрешение: не менее 4,0 между пиками аскорбиновой кислоты и примеси D (птероевая кислота).
Предельное содержание примесей:
примесь А - N-(4-аминобензоил)-L-глутаминовая кислота (рисунок 18) (не более 0,5%): на хроматограмме испытуемого раствора площадь пика, соответствующего примеси N-(4-аминобензоил)-L-глутаминовой кислоты, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (d);
Рисунок 18 - N-(4-аминобензоил)-L-глутаминовая кислота
примесь D - птероевая кислота (рисунок 19) (не более 0,6%): на хроматограмме испытуемого раствора площадь пика, соответствующего примеси птероевой кислоты, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (е);
Рисунок 19 –Птероевая кислота
любая другая примесь (не более 0,5%): на хроматограмме испытуемого раствора площадь любого пика, кроме основного и пиков примесей A и D, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с);
сумма других примесей (не более 1,0%): на хроматограмме испытуемого раствора площадь всех пика, кроме основного и пиков примесей A и D, не должна превышать 2-кратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с).
На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с площадью менее 0,1 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с).
Данный метод хроматограммы также применяется для количественного определения фолиевой кислоты [14].