Андреева, СД методы исследования печени

91

ня сахара в крови, но этот диагностический тест очень не специфичен. Поэтому более целесообразно проводить пробу нагрузкой галактозой.

Галактоза вводится внутривенно по 0,25 г на 1кг живого веса в 40%- ном растворе. Кровь у животных берут до введения галактозы, а затем через 5, 10, 120 минут после введения. При внутривенном введении галактоза в печени превращается в декстрозу, а затем полимеризуется в гликоген. При заболеваниях печени нарушается процесс превращения галактозы в декстрозу. В этом случае галактоза не усваивается.

Галактозная проба положительна, если уровень сахара в крови после второго часа с момента введения галактозы остается выше уровня сахара до введения. Постгипергликемический коэффициент - отношение количества сахара, содержащегося в крови через 120 минут после введения к его исходному количеству. У здоровых животных он равен 0,81-1,0. При заболеваниях печени превышает 1,0.

Галактозная проба положительна при острых и подострых диффузных поражениях печени (дистрофиях, гепатитах), отрицательна - при очаговых поражениях.

Недостатком галактозной пробы является ее малая специфичность. Она может быть положительной при различных эндокринных заболеваниях (сахарный диабет, гипотиреоз).

4. Определение уробилина в моче (см. выше) В. Тесты на холестаз

Холестаз развивается в результате закупорки (обтурации) желчевыводящих путей и сопровождается нарушением выделения билирубина и желчных кислот с желчью в кишечник.

1.Определение билирубина в сыворотке (см. выше)

2.Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке

Щелочная фосфатаза - фермент катализирует отщепление фосфорной

кислоты от её органических соединений. Максимальную активность проявляет при щелочных рН (8,6-10,0). Фермент, обнаруживаемый в сыворотке крови, происходит, в основном, из костной ткани и печени (табл. 7). У беременных животных находят повышенное содержание щелочной фосфатазы, что обусловлено синтезом фермента плацентой. Значительное увеличение (в 2-5 раз) бывает при остеодистрофии, рахите, остеосаркоме, механической желтухе. При рахите отмечают увеличение активности ЩФ при одновременном снижении уровня кальция в крови. Наиболее высокая активность встречается при остеосаркомах. Кроме того, повышение активности фермента отмечают при заживлении переломов. У собак высокая активность ЩФ при незначительной активности трансаминаз наблюдается при лейкозах, с вовлечением в патологический процесс печени. У кошек определение только одной ЩФ для обнаружения застойных явлений в печени недоста-

92

точно информативно, т.к. данный фермент у этих животных выделяется почками. Щелочная фосфатаза не является строго органоспецифическим ферментом, повышение активности фермента может наблюдаться при нарушении фосфорно-кальциевого обмена. Но наиболее значительное повышение её активности происходит при наличии механических препятствий для оттока желчи, внутрипеченочном холестазе.

Таблица 7 - Содержание щелочной фосфатазы в сыворотке крови разных животных

3.Определение уробилина в моче (см. выше)

4.Определение желчных кислот в моче (см. выше)

5.Определение стеркобилина в кале

Для определения наличия стеркобилина в кале чаще всего используются качественные реакции (сулемовая проба, реакция с цинка ацетатом). Количественное содержание стеркобилина можно определить колориметрическим методом. В норме у крупного рогатого скота содержание стеркобилина в кале

0,3-2,4 мг%.

Определение стеркобилина в кале проводят с целью дифференциальной диагностики желтух. Уменьшение содержания стеркобилина в кале наблюдается при паренхиматозной желтухе. Полное отсутствие стеркобилина отмечается при механической желтухе. Клинически отсутствие и уменьшение количества стеркобилина проявляется как ахолия (кал серого или даже белого цвета, глинистой консистенции). Увеличение количества стеркобилина происходит при гемолитической желтухе.

К дополнительным методам исследования можно отнести проведение различных функциональных тестов.

3.3.2 Оценка функциональной способности печени 3.3.2.1 Исследование выделительной и обезвреживающей функ-

ции печени

93

Для исследования выделительной функции печени, дающей представление об общей функциональной активности гепатоцитов, используют в основном две пробы.

Бромсульфалеиновая проба относится к числу наиболее информативных и чувствительных методов исследования поглотительновыделительной функции печени. Проба с бромсульфалеином основана на способности гепатоцитов улавливать из крови и выделять в желчь бромсульфолеин (БСФ). При наличии патологических изменений в гепатоцитах процесс экскреции замедляется и БСФ удерживается в крови долгое время. Для проведения теста животному вводят в/в 5% раствор БСФ 5 мг/кг. Затем берут кровь из вены через 3 и 45 минут и получают сыворотку. К 1мл сыворотки добавляют 2,39 мл р-ра NaСI и 0,1 мл 5%-го КОН. При наличии БСФ

– фиолетовый цвет. В норме через 45 минут после введения красителя в крови остается не более 5% введенной дозы. Остальная часть бромсульфалеина захватывается клетками печени и выделяется в желчь. Проба считается положительной, если через 45 мин содержание красителя превышает 6–12% от первоначального уровня в крови, взятой через 3 минуты.

Бромсульфалеиновая проба является одним из самых чувствительных методов оценки функции печени. Она становится положительной при любых поражениях паренхимы органа (острые и хронические гепатиты, жировой гепатоз, цирроз печени, доброкачественная гипербилирубинемия и др.) даже на самых ранних стадиях развития заболевания и хорошо коррелирует с тяжестью патологического процесса. Следует помнить, что проба бывает положительной также при внутрипеченочном холестазе и механической желтухе, что связано с нарушением оттока желчи, а также при застойной сердечной недостаточности. Однако высокая стоимость и возможные побочные эффекты, а также неудобства, присущие этому исследованию, обусловливают редкое его применение в настоящее время.

Индоцианиновая проба основана на том же принципе, что и бромсульфалеиновая. Раствор индоцианина вводят внутривенно из расчета 0,5 мг на 1 кг массы тела. Индоцианин зеленый удаляется из сосудистого русла только печенью в не конъюгированном виде. Внепеченочного пути экскреции препарата не существует. Индоцианин зелёный не участвует также в энтерогепатической циркуляции. По сравнению с бромсульфалеиновой пробой метод исследования с индоцианином зелёным более безопасный и специфичный, хотя и более дорогой. Его применяют для оценки печёночного кровотока.

В норме через 20 мин в крови остается не более 4% введенного красителя. При нарушении функции печени количество красителя, определяемого в плазме через 20 мин после введения, увеличивается. Оценка

94

результатов индоцианиновой пробы проводится так же, как и бромсульфалеиновой. Положительные результаты выявляются при минимальном снижении функции гепатоцитов.

Проба нагрузкой аммонием

Пробу используют для оценки детоксицирующей функции печени в основном у мелких животных. Она основана на способности печени синтезировать из высокотоксичного аммиака менее токсичную мочевину. При постановке этой пробы собаке после 12 ч голодной диеты при помощи ротопищеводного зонда вводят в желудок раствор хлористого аммония из расчета 0,1 г сухого вещества на 1 кг массы тела (но не более 3 г). Перед введением и через 30 мин после введения берут кровь из вены и определяют содержание аммиака. При наличии патологии печени, сопровождающейся снижением ее детоксицирующей функции, содержание аммиака в сыворотке крови собаки через 30 мин увеличивается в 2-10 раз по сравнению с исходными значениями.

3.3.2.2 Оценка гликогенсинтезирующей функции печени

При заболеваниях печени снижается ее способность превращать глюкозу в гликоген. В результате чего вначале может быть выражена гипергликемия (повышение уровня глюкозы в крови), вследствие нарушения утилизации глюкозы. В дальнейшем развивается гипогликемия (снижение уровня глюкозы в крови) вследствие уменьшения печеночного депо углеводов.

Для оценки функции углеводного обмена проводят определение уровня глюкозы в крови, но этот диагностический тест очень не специфичен. Поэтому более целесообразно проводить пробу нагрузкой галактозой.

Галактоза вводится внутривенно по 0,25 г на 1кг живого веса в 40%- ном растворе. Кровь у животных берут до введения галактозы, а затем через 5, 10, 120 минут после введения. При внутривенном введении галактоза в печени превращается в декстрозу, а затем полимеризуется в гликоген. При заболеваниях печени нарушается процесс превращения галактозы в декстрозу. В этом случае галактоза не усваивается.

Галактозная проба положительна, если уровень сахара в крови после второго часа с момента введения галактозы остается выше уровня сахара до введения. Постгипергликемический коэффициент - отношение количества сахара, содержащегося в крови через 120 минут после введения к его исходному количеству. У здоровых животных он равен 0,81-1,0. При заболеваниях печени превышает 1,0.

Галактозная проба положительна при острых и подострых диффузных поражениях печени (дистрофиях, гепатитах), отрицательна - при очаговых поражениях.

Недостатком галактозной пробы является ее низкая специфичность.

95

Она может быть положительной при различных эндокринных заболеваниях (сахарный диабет, гипотиреоз).

3.3.2.3 Оценка белоксинтезирующей функции печени

Для оценки функции печени используют белково-осадочные пробы, с помощью которых устанавливают изменения в составе белков сыворотки крови (диспротеинемию). В основе осадочных проб лежит взаимодействие глобулинов с веществами-осадителями. Осадочные пробы не являются специфическими, но, однако они позволяют установить степень нарушения соотношений между глобулинами сыворотки и альбуминами, синтезирующимися преимущественно в печени.

Сулемовая проба. Сулема в присутствии белков крови образует коллоидный раствор солей ртути. Нарушение дисперсности белковых фракций сыворотки крови вызывает осаждение грубодисперсных частиц. В пробирку берут 0,5 мл сыворотки крови, 1,0 мл 0,85 %-ного раствора хлористого натрия, перемешивают и добавляют по каплям 0,1%-ный раствор сулемы до появления стойкого помутнения. В норме у здоровых коров на титрование сыворотки расходуется 1,6-2,6 мл раствора сулемы. Чем тяжелее дистрофия печени, тем меньше расходуется раствора сулемы.

4. ОСНОВНЫЕ СИНДРОМЫ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ Основные синдромы болезней печени и желчных путей. К ним от-

носятся: синдром желтух, синдром печеночной недостаточности, синдром портальной гипертензии, синдром холестаза, гепаторенальный синдром, синдром печеночной энцефалопатии и комы.

Синдром желтух (icterus) – клинико-лабораторный синдром, характеризующийся гипербилирубинемией и желтушностью, общей слабостью и подавленностью (астенией), кожным зудом, брадикардией, нарушением кишечного пищеварения, расстройством функций нервной системы, билирубин- и уробилирубинурией и некоторыми другими показателями. Гипербилирубинемия наступает при снижении способности гепатоцитов связывать (конъюгировать) билирубин и экскретировать его. При высоких концентрациях билирубина угнетаются процессы окислительного фосфорилирования

иснижается потребление кислорода, что приводит к повреждению тканей. Токсическое действие проявляется также поражением центральной нервной системы, возникновением очагов некроза в паренхиматозных органах, подавлением клеточного иммунного ответа, развитием гемолитической анемии.

Желтушность (иктеричность) является типичным, но довольно редким

ипоздним клиническим симптомом болезней печени. У коров она может развиться при концентрации общего билирубина в сыворотке крови более 30-35, а у свиней – более 60 мкмоль/л, что в 5 и более раз превышает верхнюю границу нормы. При этом должен присутствовать конъюгированный

96

(проведенный через печень, прямой) билирубин, который легко проникает в ткани.

В зависимости от того, на каком этапе нарушается обмен билирубина, различают три формы желтухи: гемолитическая (надпеченочная); паренхиматозная (печеночная) и механическая (подпеченочная).

Гемолитическая желтуха развивается вследствие избыточного гемолиза эритроцитов. В начальную стадию гемолитического процесса гипербилирубинемии может не быть, поскольку печень способна метаболизировать и выделять в желчь билирубин в количестве, превышающем его продукцию в физиологических условиях. Билирубинемия развивается в случаях, когда исчерпаны резервные возможности органа.

При средней степени гемолиза патология обусловлена, главным образом, неконъюгированным (непрямым, несвязанным) билирубином, а при массивном гемолизе – неконъюгированным и конъюгированным пигментом (прямым, связанным). Последний может вызвать гипербилирубинурию. Неконъюгированная фракция не проникает через неповрежденный почечный фильтр и в моче не появляется.

Основными проявлениями надпеченочной желтухи являются: повышение концентрации непрямого билирубина; гиперхромная анемия с цветовым показателем более 1,15 и ретикулоцитозом; высокая уробилинурия; окрашивание мочи в темно-желтый, а фекалий - в коричневый цвет. У лошадей поздним симптомом является спленомегалия.

Синдром развивается при введении гипотонических растворов, отравлении гемолитическими ядами, гемолитической болезни новорожденных, В12-дефицитной анемии, обширных гематомах, переливании несовместимых групп крови, кровопаразитарных болезнях.

Паренхиматозная желтуха (печеночная желтуха) развивается вследствие воспалительного или токсического гепатоцеллюлярного поражения. Гепатоциты не способны при этом полностью улавливать из крови билирубин, связывать с глюкуроновой кислотой и выделять его в желчные пути. В результате в сыворотке крови увеличивается концентрация непрямого билирубина. Кроме того, при дистрофии печеночных клеток наблюдается обратная диффузия прямого билирубина из желчных канальцев в кровеносные капилляры. Этот механизм обусловливает повышение в сыворотке крови уровня прямого билирубина, а также билирубинурию и уменьшение выделения стеркобилина с калом.

Печеночная форма желтухи проявляется повышением концентрации в крови всех разновидностей билирубина, билирубинурией, уробилиногенурией, увеличением в моче количества желчных кислот, моча приобретает желто-бурый цвет, иногда с зеленоватым оттенком, фекалии обесцвечиваются (ахоличный кал). Желтушность развивается при многократном увеличении в крови концентрации билирубина.

97

Синдром развивается при инфекционном, незаразном, токсическом гепатитах, сопровождающихся внутриклеточной инфильтрацией и некрозом значительной части гепатоцитов у всех видов животных.

Механическая (подпеченочная, холестатическая, обтурационная) желтуха возникает вследствие нарушения оттока желчи из печени. Наблюдается при желчекаменной болезни, закупорке желчных ходов гельминтами, опухолях поджелудочной железы, при использовании медикаментозных средств, вызывающих задержку оттока желчи в печени (холестаз) – эритромицина, сульфаниламидных препаратов, эстрогенов. Желчный пигмент при этом диффундирует через стенки расширенных желчных капилляров, которые нередко разрываются. Гепатоциты наполняются желчью, которая поступает в лимфатические щели и кровь. При затруднении оттока желчи в крови повышается концентрация желчных кислот, что оказывает повреждающее действие на печеночные клетки с развитием некроза. Высокая концентрация желчных кислот в крови вызывает кожный зуд, брадикардию и гипотензию, гемолиз эритроцитов, нарушает процессы свертывания крови, замедляет СОЭ. Желчные кислоты, выделяясь через почки, могут способствовать развитию печеночной недостаточности, а также развитию нервных явлений у животных.

При механической желтухе резко уменьшается содержание стеркобилиногена и других продуктов метаболизма билирубина в кале, что сопровождается его обесцвечиванием.

Таблица 8 - Схема дифференциальной диагностики желтух

Синдром включает следующие симптомы: гипербилирубинемия преимущественно за счет прямого билирубина; гиперхромная анемия с замедлением СОЭ; билирубин- и холеурия; желтушность темно-зеленоватого и землистого оттенков, кожный зуд, брадикардия; моча темных оттенков со стойкой желтой пеной при взбалтывании.

В клинической практике для дифференциации желтух проводится

98

определение как билирубина, так и продуктов его метаболизма (табл. 8).

Синдром печеночной недостаточности – патологическое состояние,

обусловленное глубокими нарушениями многочисленных и важных для жизнедеятельности организма функций печени, проявляющееся преимущественно цитолизом и некрозом гепатоцитов, а также ренальными, гемопатическими и нервными расстройствами различной степени выраженности, вплоть до развития печеночной комы.

При развившейся недостаточности вследствие гепатита, цирроза, амилоидоза печени, отравлении гемолитическими ядами и др. заболеваниях, основными симптомами и лабораторными показателями являются: диарея с тонкокишечной недостаточностью, рвотой у плотоядных и всеядных, обесцвечиванием фекалий и быстрым снижением массы тела; геморрагический синдром с кровоизлияниями в слизистые и кожу, с гематомами при незначительных травмах, после инъекции и пункции; печеночная энцефалопатия с угнетением, атаксией, гипоэстезией, с ослаблением кожных рефлексов; иногда – желтушность, гепатомегалия, болезненность печени; гипербилирубинемия, билирубин- и уробилинурия; гипопротеинемия с гипоальбуминемией, иногда гамма-глобулинемия.

Синдром портальной гипертензии – повышение венозного давления в системе воротной вены, связанное с циррозом печени, при котором происходит сдавливание венозных сосудов разросшейся соединительной тканью. Это ведет к развитию застойной гиперемии в системе портальной вены, увеличению в пять-семь раз венозного кровяного давления, что обусловливает выпотевание плазмы и развитие брюшной водянки (асцита).

Синдром холестаза – синдром, обусловленный нарушением образования и особенно оттока желчи, вследствие чего происходит интоксикация организма желчными кислотами и билирубином. Холемия может развиваться внутри печени и за ее пределами. Механизм развития внутрипеченочного холестаза связан с нарушением образования желчных мицелл, которые формируются из холестерина, фосфолипидов, желчных кислот и билирубина. Развитие холемии за пределами печени связано с нарушением оттока желчи и клинически проявляется признаками, характерными для механической желтухи.

Гепаторенальный синдром связан с возникновением функциональной недостаточности почек вследствие нарушения обезвреживающей функции печени. Это ведет к развитию в почках альтеративно-воспалительных изменений с повышением образования ренина, который соединяется в крови с 2- глобулином, образуя ангиотензин, повышающий кровяное давление. Одновременно возрастает уровень простагландинов. У животных одновременно диагностируются изменения, характерные для поражения печени (гепатомегалия, болезненность печени, печеночная недостаточность и др.) и почек (почечные отеки, болезненность органа, протеинурия, гематурия, увеличенная

99

концентрация креатинина в крови и т.д.). Синдром часто выявляют у высокопродуктивных коров и собак служебных пород.

Синдром печеночной энцефалопатии и комы характеризуется нару-

шением функции центральной нервной системы в результате накопления в крови токсических продуктов (аммиака, индола, фенола и др.), низкомолекулярных жирных кислот, кетоновых тел, неконъюгированного билирубина и других веществ, которые негативно влияют на мозговую ткань, обусловливая развитие печеночной энцефалопатии, а в тяжелых случаях и при длительном действии – возникновением печеночной комы. При тяжелых дистрофических и некробиотических процессах в печени начинает функционировать коллатеральное кровообращение (дополнительный шунт, т. е. проток), и продукты кишечного метаболизма поступают в общий кровоток, вызывая интоксикацию организма.

Синдром у плотоядных животных проявляется угнетением, атаксией, залеживанием, эпилептиформными судорогами, гепатомегалией, нарушением всех основных функций печени, обмороками и коматозным состоянием.

При коматозном состоянии основными симптомами являются: потеря сознания; анестезия и выпадение соматических рефлексов; желтушность слизистых оболочек и склеры, петехиальные кровоизлияния; расширение зрачков; чрезмерная напряженность мышц; сухая холодная кожа; тахикардия. Исчезновение корнеального рефлекса является угрожающим симптомом, расширение зрачков – безнадежным.

У лошадей синдром характеризуется депрессией, частым зеванием, манежными движениями, лошадь упирается головой в стену, появляются судороги и кома. При хронических заболеваниях печени обнаруживают повышенную чувствительность к ультрафиолету. Фотосенсибилизирующие вещества могут быть как эндогенного происхождения, так и экзогенного (производные фенотиазина, а также вещества, содержащиеся в зверобое продырявленном, горце гречишном). Недостаточная детоксикация различных фотосенсибилизирующих веществ, в том числе филлоэритрина (продукт превращения хлорофилла под влиянием микрофлоры кишечника) вызывает их накопление в крови. Затем они поступают в кожу и под влиянием ультрафиолетового облучения активизируются, что, в свою очередь, приводит к высвобождению большого количества медиаторов воспаления. Фотосенсибилизация характеризуется развитием отёков, эритем, точечных кровоизлияний с образованием струпьев, наличием болезненности (но не зуда).

100

5 МАТЕРИАЛ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ

5.1Вопросы для самоконтроля

1.Когда и из каких зачатков возникает закладка печени в эмбрио-

генезе животных?

2. Динамика структуры и функции печени в эмбриогенезе живот-

ных.

3. Динамика структуры и функции печени в постнатальном онтоге-

незе.

4.Функции печени.

5.Ультраструктурная организация и цитохимическая характеристика гепатоцитов.

6.Структурно-функциональная единица печени.

7.Кровеносный и желчный капилляры печени. «Триада» печени.

8.Ультраструктурная организация клеток синусоидного капилляра, их функциональное значение.

9.Кровоснабжение печени.

10.Желчевыводящие пути, отделы, строение стенки.

11.Механизм сокращения желчного пузыря.

12.Билирубиновый обмен у здоровых животных.

13.Каковы границы печени при перкуссии у крупного рогатого ско-

та?

14.По каким лабораторным тестам можно диагностировать цитолиз гепатоцитов?

15.Какими изменениями в крови, моче и кале характеризуется холе-

стаз?

16.Какие изменения в печени можно диагностировать при ультразвуковом исследовании?

17.Что такое портография и каковы её диагностические возможности? 18.Что такое биопсия печени и как она выполняется?

19.Чем характеризуется синдром портальной гипертензии?

20.Какие признаки наблюдаются при синдроме печёночной энцефалопатии?

5.2 Ситуационные задачи Задача 1. Кровь больного животного медленно свертывается. Какая

функция печени возможно нарушена? С какими клетками печени связано это нарушение?

Задача 2. В крови больного животного обнаружено снижение содержания протромбина. Какая функция печени нарушена? К каким последствиям это может привести?