3 курс / Патологическая физиология / Патофизиология_крови,_Фред_Дж_Шиффман

I

Образование и кинетика тромбоцитов

|

Клеточная биология мегакариоцитопоэза

;

Тромбоциты, наименьшие по размеру форменные элементы крови, образуются! из самых крупных костномозговых клеток — мегакариоцитов. Обнаружено, что} мегакариоциты в свою очередь являются производными той же полипотентш) гемопоэтической стволовой клетки, из которой образуются эритроциты, нейтро-j филы и моноциты (глава 1). Стволовая клетка, формирование которой сфокуси-[ ровалось исключительно на одном из ростков кроветворения (например, мегака-| риоцитарном), называется коммитированной. Для развития коммитированно»;. мегакариоцитарной стволовой клетки характерны четыре почти последователь-; ные стадии: 1) экспоненциальное увеличение числа коммитированных стволовых клеток за счет митотического деления; 2) серийная репликация ядра без де-i ления клеток (т. е. эндоредупликация, или полиплоидизация); 3) созреванщ цитоплазмы мегакариоцита; 4) отделение тромбоцитов от мегакариоцита. |

Любой из этих четырех процессов может влиять на скорость образованш| тромбоцитов и выведения их из костного мозга в периферическую кровь. Поэтому каждый из них —- потенциальное место приложения гомеостатической регу-. ляторной системы, контролирующей количество тромбоцитов. От степени мито' тическои экспансии коммитированной стволовой клетки зависит, сколько из нее) образуется мегакариоцитов. Поскольку количество коммитированных мегака-риоцитарных стволовых клеток существенно не меняется с изменением потребности крови в тромбоцитах, то число митотических делений стволовой клещ; по всей вероятности, определяет количество сформировавшихся зрелых мега-i кариоцитов в костном мозге. Эндоредупликация инициируется только в та случае, когда развивающийся мегакариоцит утрачивает свою способность к делению клетки. В ядре продолжается редупликация без деления клетки, и поскольку это происходит на протяжении нескольких циклов, то окончательна! популяция мегакариоцитов имеет гетерогенный индекс плоидности. Общее число эндомитотических циклов обычно варьируется между 3 и 6, что соответствуй индексам плоидности мегакариоцита от 8 до 64 п. Хотя целесообразность эндо-редупликации кариоцитов неясна, вполне очевидно, что существует пряма! зависимость между плоидностью мегакариоцита и количеством тромбоцитов, которое он может продуцировать. Поэтому при повышении степени эндоредуп ликации мегакариоцитов быстро увеличивается продукция тромбоцитов. Кая у экспериментальных животных, так и у человека было обнаружено, что при значительно повышенной потребности в тромбоцитах происходит сдвиг в сторону увеличения плоидности мегакариоцитов (составляющий обычно один дополнительный эндомитотический цикл). Увеличение плоидности представляет собой раннюю реакцию адаптации к повышенной потребности в тромбоцитах, та; как дополнительный цикл эндоредупликации, возникающий относительно поздно в процессе формирования мегакариоцита, может усилить образование тромбоцитов быстрее, чем активация митозов стволовой клетки.

Хотя развивающиеся мегакариоциты приобретают некоторые характерные мембранные гликопротеины и начинают синтезировать небольшое количеств белков а-гранул во время эндоредупликации, созревание цитоплазмы происходит в основном после завершения эндомитоза. На самой ранней постэндомитоти-

Образование и кинетика тромбоцитов

ческойстадииприсветовоймикроскопиинезрелыймегакариоцитвиденкакклетка 6-24 мкм в диаметре с плотным многодолевым ядром, окруженным тонким кольцом темно-синей цитоплазмы. С помощью электронной микроскопии выявляется аппарат Гольджи с рудиментарной системой демаркационной мембраны и редкими а-гранулами (см. далее). Последующее созревание характеризуется прогрессивно возрастающими ацидофилией, гранулярностью и объемом цитоплазмы, что можно наблюдать под световым микроскопом. Увеличиваясь в объеме, цитоплазма заполняется а-гранулами, плотными гранулами, а также обширной сетью переплетенных мембранных каналов и тубул, которая называется демаркационной мембранной системой (ДМС). Полностью созревшие мегакариоциты, размер которых колеблется от 20 до 50 мкм, составляют приблизительно 0,04 % ядросодержащих костномозговых клеток. Для них характерны объемная розовая цитоплазма с большим количеством гранул и эксцентрично расположенноекомпактноеядроснесколькимидолями.

Процесс терминальной стадии тромбоцитопоэза недостаточно изучен. Согласно одной из гипотез, зрелая ДМС расщепляет цитоплазму мегакариоцита на тром-боцитарные поля и отдельные тромбоциты образуются за счет растворения цитоплазмы мегакариоцита в определенных плоскостях демаркации. Позже было доказано, что формирование тромбоцитов из мегакариоцитов представляет собой более динамичный процесс. В ответ на некий сигнал мегакариоциты трансформируются в паукообразные клетки, от которых отходит множество длинных нитевидных отростков с равномерно расположеннымиочагамиконстрикции. Полагают, чтоэтиотростки, называемые протромбоцитами, входят в костномозговые синусоиды (рис. 1-3) и там фрагментируются на тромбоциты, возможно, благодаря сдвигающей силе кровотока. Хотя терминальная стадия тромбоцитопоэза затрагивает только наиболеезрелыемегакариоциты, онапредставляетсобойрегулируемыйпроцесс. После резкого повышения периферической потребности в тромбоцитах незамедлительно выявляется увеличение объема этих клеток, что отражает изменения вмеханизме образования тромбоцитов.

Гуморальная регуляция продукции тромбоцитов

Встабильныхусловияхколичество циркулирующихтромбоцитовподдерживается в определенном контролируемом узком диапазоне. Но при патологических состояниях, вызывающих ускоренное потребление тромбоцитов, продукция последних костным мозгом может в 8 раз превышать норму, что происходит за счет стимуляции образования мегакариоцитов и увеличения их плоидности, размера и скорости созревания. Ключевые патогенетические факторы тромбоцитопении обычно связаны с функционированием костного мозга. При возрастании количества костномозговых мегакариоцитов можно полагать, что тромбоцитопения вызвана потреблением тромбоцитов в периферической крови или ретикулоэндотелиальной системе (или секвестрацией селезенкой), соответственно, нет необходимости в проведении дополнительных клинических исследований.

Давноустановлено, чтопроцессобразованиятромбоцитовстрогорегулируется, но специфический механизм этой регуляции был неясен. Более 30 лет назад было предположено, что продукция тромбоцитов контролируется циркулирующим в плазме фактором, концентрация которого увеличивается в ответ на тром-боцитопению. Впоследствии он получил название тромбопоэтин. Однако как

специфический цитокин, регулирующий гемопоэз, тромбопоэтин идентифицировали только в 1994 г., когда была определена его аминокислотная последовательность и его ген был клонирован одновременно исследователями четырех разнш групп. Клонирование существенно облегчилось после того, как обнаружили, чтс тромбопоэтин является лигандом для гемопоэтического рецептора c-Mpl, гомологичным белку, кодируемому вирусным онкогеном, который индуцирует мне-лопролиферативное лейкемическое состояние у мышей.

Известно, что тромбопоэтин является стимулятором (специфическим в отношении линии дифференцировки) развития мегакариоцитов и образования тромбоцитов. Ондействует как науровне коммитированноймегакариоцитарной стволовой клетки, так и на уровне развивающегося мегакариоцита (рис. 1-1), Тромбопоэтин (другие обозначения: тромбопоэтина, Mpl-лиганд, фактор роста! развития мегакариоцита, мегапоэтин) продуцируется в основном печенью, и только незначительное количество его мРНК определяется в почках. Впротивоположность другим гемопоэтическим цитокинам тромбопоэтин, вероятно, не регулируется на уровне генной транскрипции. Даже при тяжелой тромбоцитопенш, вызываемой в эксперименте ускоренным потреблением тромбоцитов или ингиби-рованием их образования, уровеньмРНК тромбопоэтина в печени почтине отличаетсяотнормы. Полагают, что тромбопоэтин продуцируется печенью с постоянной скоростью и его стимулирующий эффект зависит от количества молекул, ш связанных с рецепторами тромбопоэтина циркулирующих тромбоцитов. Такая модель требует подтверждения, однако с ее помощью можно объяснить, почему тром-боцитопения, вызванная депонированием тромбоцитов в селезенке при стабиль! ном их содержании, не приводит к компенсаторной стимуляции тромбоцитопоэз!;

Было обнаружено, что многие другие гемопоэтические цитокины стимулируют образование тромбоцитов, но не в той степени или не с той строгой специфичностью, как тромбопоэтин. Интерлейкин-3 (ИЛ-3), мультилинейный гемопоэти-ческий фактор роста, стимулирует митотическую экспансию и начальное развитие мегакариоцитарной коммитированной стволовой клетки, но незначительно влияет на мегакариоцитарную эндоредупликацию и созревание цитоплазмы. И наоборот, ИЛ-би ИЛ-11 оказывают тромбоцитопоэтическое действие, сти-j мулируя в умеренной степени постмитотические фазы развития мегакариоцита Согласно предварительным данным, ИЛ-6 может опосредовать реактивный тромбоцитоз, связанный in vivo с отдельными системными воспалительными за-. болеваниями (например, ревматоидным артритом). Все три указанные выше ци-токина проявляют некоторую активность в стимулировании образования тромбоцитов, что наблюдалось в эксперименте. Однако степень максимальной тромбоцитостимулирующей активности этих цитокинов in vivo умеренная (количество тромбоцитов возрастает только в 2-3 раза). Кроме того, они обладают определенной токсичностью. В литературе нет сведений, которые бы свидетель-, ствовали о физиологической роли ИЛ-3, ИЛ-6 или ИЛ-11 в регуляции мегакариоцитопоэза и количества циркулирующих тромбоцитов. Лишь активность тромбопоэтина плазмы может меняться обратно пропорционально числу тромбоцитов (по механизму биологической обратной связи).

Благодаря своей значительно большей активности, высокой специфичности и, по предварительным данным, низкой токсичности, вполне вероятно, что только тромобопоэтин может использоваться в клинической практике при лечении тромбоцитопении.

Структура тромбоцитов

В состоянии покоя тромбоцит представляет собой дискообразную клетку с гладкой цитоплазматической мембраной, поддерживаемой микротубулиновым кольцом. Мембрана клетки инвагинирует и соединяется с сетью многочисленных каналов, так называемой открытой канальцевой системой (ОКС), которые тесно переплетены внутри тромбоцита. Обнаружено, что центральные каналы этой системы соединяются с внеклеточным пространством и ОКС экспрессирует те же гликопротеины, что и клеточная мембрана. Вторая система внутренней оболочки (плотная тубуляр-ная система), которая, как полагают, образуется из эндоплазматического ретикулу-ма мегакариоцита, не зависит от ОКС и не соединяется с внеклеточным пространством. Сократительные микрофиламенты распространяются от субмембранного пространства по всей цитоплазме тромбоцита и обусловливают изменения его формы, происходящие во время активации клетки. В цитоплазме неактивированных тромбоцитов можно обнаружить 4 вида гранул: сс-гранулы, плотные гранулы, лизо-сомы и пероксисомы (рис. 5-1). Наиболее многочисленные а-гранулы содержат тромбоцитоспецифические и тромбоцитонеспецифические пептиды, участвующие . в механизмах коагуляции, воспаления, иммунитета и репарации и модулирующие эти процессы. Плотные гранулы, названные так сообразно их внешнему виду под электронным микроскопом, представляют собой богатое хранилище АДФ и серо-тонина — веществ, способствующих агрегации тромбоцитов, а также антиагреганта АТФ и основного кофактора коагуляции Са2+. Лизосомальные гранулы содержат гидролитические ферменты, а пероксисомы — каталазу (табл. 5-1).

Наружная клеточная оболочка и ОКС усеяны гликопротеинами, играющими важную роль в адгезии и агрегации тромбоцитов (табл. 5-2). Эти молекулы состоят из наружных доменов, действующих в качестве рецепторов, которые связываются с внеклеточными адгезивными гликопротеинами (фибриногеном, коллагеном, фактором Вилленбранда), и трансмембранных пептидов, которые фиксируют гликопротеины и опосредуют процессы активации тромбоцитов и изменения их формы (см. далее). Большинство тромбоцитарных гликопротеинов, за исклю-

Микротрубочки

Плотное тельце (6-гранула)

Связанная с поверхностью канальцевая система

Митохондрия

а-гранула

Гликоген

Плотная тубулярная система

Пероксисома

Лизосома (А-гранула) Плазматическая мембрана

Рис. 5-1. Схематическое изображениетромбоцитачеловека(справа— поперечныйразрез). (Из: Bentfeld-Barker M. E., Bainton D. F. Identification of primary lysosomes in human megakaryocytes and platelets. Blood, 59: 472-481, 1982.)

чением гликопротеинового комплекса Ib—IX, кодируется генами интегринового'; семейства. На тромбоцитарных мембранах имеются рецепторы для физиологи-! ческих медиаторов активации тромбоцитов (АДФ, адреналина, серотонина и: тромбоксана А2) и для Fc-фрагмента иммуноглобулинов. Кроме того, на мембране тромбоцита экспрессированы антигены системы HLA класса I (но не класса II),

Функции тромбоцитов

Тромбоциты выполняют различные функции in vivo: 1) запуск немедленного гемостаза за счет адгезии и агрегации тромбоцитов, что приводит к формированию; тромбоцитарной пробки; 2) местное выделение вазоконстрикторов для уменьшения кровотока в пораженном участке; 3) катализ реакций гуморальной системы свертывания с образованием в конечном счете фибринового сгустка; 4) инициирование репарации тканей; 5) регулирование местной воспалительной реакции и иммунитета. Нестимулированные тромбоциты циркулируют в виде гладких дис-коидных клеток с незначительной метаболической активностью. Такие тромбоциты не вступают в физиологически значимое взаимодействие с другими фор-; менными элементами периферической крови или монослоем эндотелиальнъп клеток, который выстилает эндоваскулярное пространство.

ТАБЛИЦА 5-2. Тромбоцитарные гликопротеины и ихлиганды

Функциитромбоцитов

______________________________________________________________ 15 5

Физиологическая активация тромбоцитов начинается только тогда, когда поврежден сосудистый эндотелий и обнажен субэндотелиальный внеклеточный мат-рикс. При поражении эндотелия воздействию подвергается коллаген, другие белки внеклеточного матрикса, а также микрофибриллы, фиксирующие большие муль-тимеры фактора Виллебранда (которые синтезируются и секретируются эндотели-альными клетками). Рецептор гликопротеина Ib (ГП Ib) тромбоцитарной мембраны связывается специфически с фактором Виллебранда (ФВ), который вторично (другим участком) связывается с ГП Ilb-IIIa тромбоцитарной мембраны. Субэндотелиальныйколлагенсвязывается срецептороммембранногоГП1а. Адгезия тромбоцитов сама по себе, а также посредством участия в запуске гемостаза, инициирует процесс активации тромбоцитов, который выражается в существенном изменении их формы, необратимой секреции содержимого плотных и а-гранул, агрегации тромбоцитов с образованием гемостатической тромбоцитарной пробки.

Изменение формы представляет собой раннее и обратимое проявление активации тромбоцитов, которое опосредовано внутриклеточной системой сократительных микрофиламентов. В тромбоцитарной мембране возникают волны возбуждения и формируется большое количество коротких нитевидных псевдоподий или филоподий, продвигающихся по открытой канальцевой системе. В результате этого процесса значительно увеличивается площадь поверхности тромбоцитарной мембраны, что необходимо для катализа реакций гуморальной системы свертывания крови и, возможно, для стабилизации тромбоцитарных агрегатов (рис. 6-2, 6-4, 6-6, 6-11). Активация тромбоцитов приводит также к конформаци-онному изменению в ГП Ilb-IIIa, которое способствует связыванию фибриногена с тромбоцитарной мембраной, что в свою очередь является предпосылкой для агрегации тромбоцитов. С инициированием активации тромбоцитов внутриклеточные органеллы сосредотачиваются в центре клетки за счет сокращения мик-ротубулярного кольца, после чего происходит слияние мембран плотных и а-гранул друг с другом, с клеточной мембраной тромбоцита и мембранами ОКС. Это слияние приводит к экзоцитозу содержимого гранул в наружную микросреду, так как внутренние каналы ОКС соединяются с внеклеточным пространством. Посредством экзоцитоза белок мембраны а-гранул Р-селектин (синонимы: GMP-140, PADGEM) перемещается с внутреннейповерхностигранулв ОКС и к наружной оболочке клетки. В это время имеют место такие биохимические реакции, как синтез тромбоксана А2 из арахидоновой кислоты, высвобождаемой мембраной плотной тубулярной системы, и синтез тромбоцитак-тивирующего фактора (ТАФ) — сложной липидной молекулы. Тромбоксан А2 (нестабильный член семейства простагландинов) — сильный проагрегант и вазо-констриктор, а ТАФ усиливает реакцию агрегации тромбоцитов и является мощным активатором нейтрофилов. Секретируемые с началом активации тромбоцитов АДФ, серотонин и тромбоксан А2 в свою очередь активируют близлежащие тромбоциты. Этот каскад аутоактивации тромбоцитов, синтез тромбоксана А2 и выделение содержимого гранул приводят к появлению тромбоцитарного агрегата, прошитого фибриногеновыми мостиками с участием ГП Ilb-IIIa мембранных рецепторов соседних тромбоцитов. Фибриногеновые мостики существенно стабилизируются тромбоспондином — другим компонентом а-гранул, освобождаемым при активации тромбоцитов. Образование продукта гуморального коагуляционного каскада тромбина усиливает агрегацию тромбоцитов, поскольку тромбин — еще один мощный ее агонист (рис. 6-15).

Происходит не только активация тромбоцитов тромбином, но и тромбоциты в значительной степени способствуют генерированию тромбина, катализируя и обеспечивая факторы для реакций гуморального коагуляционного каскада (рис. 6-2, 6-4, 6-6, 6-11). Известно, что мегакариоциты синтезируют и депонируют в ос-гранулах факторы свертывания V, VIII, XIII, ФВ и фибриноген. Эти факторы свертывания крови выбрасываются в микросреду при активации тромбоцитов и эк-зоцитозе, что повышает их локальную концентрацию. Внеклеточные адгезивные гликопротеины (фибронектин, остеонектин и витронектин) также депонируются в тромбоцитарных сс-гранулах и секретируются при активации тромбоцитов.

Тромбоцитарные мембраны играют не менее важную роль в запуске специфических реакций свертывания. Липопротеин мембраны, так называемый фактор 3, является значимым катализатором при активации фактора X факторами IXau VIII и образовании протромбиназы за счет взаимодействия между факторами Ха и V (рис. 6-4 и 6-6). Кроме того, тромбоцитарная мембрана может существенно влиять на взаимодействие других растворимых факторов свертывания с целью достижения оптимальной реактивности. И наоборот, активированные тромбоциты ограничивают коагуляционный каскад. Мембрана активированного тромбоцита связывает тромбин и тромбомодулин, компонент а-гранул, которые вместе вызывают активацию антикоагуляционного протеина С (рис. 6-11). сс-Гранулы к тому же поставляют в микросреду активатор тканевого плазминогена.

Значительно менее изучено участие тромбоцитов в воспалительном процессе и репарации тканей. Однако вполне очевидно, что тромбоцитарные а-гранулы поставляют мощные цитокины, тромбоцитарный фактор роста и трансформирующий фактор роста (3 (ТФР-(3) в очаг поврежденной ткани. Тромбоцитарный фактор роста является сильнодействующим стимулятором пролиферации фиб-|' робластов и гладкомышечных клеток, в то время как трансформирующий фактор! обладает как стимулирующими, так и ингибирующими рост свойствами. Тромбо-> цитарныйфактор4и (3-тромбоглобулин — два других тромбоцитоспецифическш' белка а-гранул, члены небольшого семейства индуцибельных белков, играющих определенную роль в коагуляции, воспалительной реакции и клеточном росте., Наконец, тромбоциты контактируют с системой гуморального иммунитета. Как] указывалось ранее, тромбоцитарные мембраны имеют рецепторы для Fc-участка* молекулы IgGn связывают иммунные комплексы и агрегированный IgG. Обнару-, жено, что покоящиеся тромбоциты поглощают иммуноглобулин за счет эндоци-j тоза и хранят его в сс-гранулах, чтобы позже секретировать путем экзоцитоза.

Лабораторные исследования

Подсчет тромбоцитов

У здоровых людей количество тромбоцитов в норме обычно достаточно стабильно,, но у различных пациентов может изменяться в пределах 150 000-400 000/мкл. Средний объем тромбоцитов изменяется обратно пропорционально их количеству, поэтому циркулирующая тромбоцитарная масса у индивидуума более постоянна, чем можно было бы ожидать. В настоящее время лабораторное определение '-■ числа тромбоцитов в периферической крови осуществляется автоматически в разведенной пробе после лизиса эритроцитов. Поскольку этот метод позволяет уста- ■ новить только количество частиц данного размера и не обеспечивает специфичес-;

кого дифференцирования тромбоцитов, то в случае отклонения показателя от нормы необходимо сделать анализ мазка периферической крови. Количество тромбоцитов в поле зрения при 100-кратном увеличении умножают на 12 000-15 000, полученная величина равна их содержанию в 1 мкл. Как артефакт низкое число тромбоцитов может быть связано с индуцированной ЭДТА агглютинацией тромбоцитов (так называемой псевдотромбоцитопенией) или сателлитизмом — слипанием тромбоцитов с плазматическими мембранами нейтрофилов в результате действия IgGили IgM-тромбоцитарных агглютининов. Напротив, ложное завышение количества тромбоцитов может наблюдаться в том случае, если в периферической крови имеют место небольшие фрагменты нетромбоцитарных клеток (например, при остром лейкозе, когда циркулирующие бласты могут выделять малые цитоплазматические пузырьки, а для эритроцитов характерен микросфероци-тоз). Если есть сомнение в достоверности результатов автоматического подсчета, необходимо выполнить его вручную. Для подтверждения данных лабораторного тестирования нужно всегда исследовать мазок периферической крови (глава 2).

Измерение объема тромбоцитов

Внедрение в практику автоматического подсчета клеток крови сделало доступным определение размера циркулирующих тромбоцитов. Установлено, что объем тромбоцита коррелирует со средней плоидностью мегакариоцитов и что этот объем возрастает при ускоренном образовании тромбоцитов. Наличие большого количества крупных тромбоцитов или мегакариоцитов в мазке периферической крови больных с тромбоцитопенией считается диагностическим маркером тром-боцитопении потребления. Однако на результаты автоматического измерения среднего объема тромбоцитов оказывают влияние такие неклинические переменные факторы, как температура образца крови, срок его хранения, используемый антикоагулянт. Поэтому этот вид измерения трудно стандартизировать, полученные данные следует интерпретировать с осторожностью.

Время кровотечения

Тромбоцитарный гемостаз зависит от двух переменных: количества тромбоцитов и их функциональной активности. В то время как определение количества тромбоцитов — простая процедура, оценка функции тромбоцитов — довольно сложная задача, к тому же на интерпретацию теста оказывают влияние различные сложные клинические переменные. Несмотря на гетерогенность возможных механизмов и клинических проявлений тромбоцитарной дисфункции, существует только один широко применяемый клинический тест для определения функции этих клеток, а именно — время кровотечения (ВК). ВК соответствует времени между нанесением небольшой стандартной поверхностной раны на предплечье и образованием стабильного тромбоцитарного тромба, о чем свидетельствует прекращение кровотечения. В модифицированном тесте используется лезвие (с пружиной), которым на ладонной поверхности предплечья наносится рана длиной 1 см и глубиной 1 мм, а на плече манжеткой нагнетается давление до 40 мм рт. ст. Кровь промокают на краю раны фильтровальной бумагой каждые 30 с так, чтобы не задеть образующуюся в центре тромбоцитарную пробку, до остановки кровотечения. В норме ВК составляет 3-8 мин; так называемое нормализованное ВК — 2-7 мин (рис. 5-2).

Исследование агрегации тромбоцитов

Количественное исследование агрегации тромбоцитов позволяет дифференцировать качественные нарушения тромбоцитов в отдельные группы. Это простой лабораторный тест, в котором конгломерация одиночных тромбоцитов в группы или агрегаты большего размера определяется количественно по степени пропускания света через тромбоцитосодержащую плазму. Тромбоцитарный агрегометр (рис. 5-3) состоит из небольшой прозрачной кюветы, в которую помещают пробу тромбоцитов пациента в стандартной концентрации. Через кювету пропускается свет от калиброванного источника, поступающий на фотоэлемент. Фотоэлемент связан с регистрирующим устройством, измеряющим светопрохождение (или оптическую плотность) с учетом времени. Если тромбоциты представляют собой суспензию одиночных клеток (т. е. до агрегации), то пропускание света минимально. С увеличением агрегации плазма, содержащая тромбоциты, становится все светлее, а пропускание света возрастает. Представить себе это явление можно, сравнивая прозрачность жидких суспензий, содержащих одну и ту же массу глины или в виде большого количества мелких частиц, или сконцентрированную в нескольких кусочках.

Агрегацию тромбоцитов in vitro можно инициировать, вводя различные экзогенные вещества (чаще всего АДФ, адреналин, коллаген, тромбин, арахидоновую кислоту и ристоцетин) в агрегометрическую кювету. АДФ, адреналин и тромбин обладают уникальной способностью вызывать агрегацию тромбоцитов самостоятельно, без обязательной дегрануляции клеток и экзоцитоза. Поэтому в низких концентрациях эти вещества будут стимулировать только обратимую первичную

Рис. 5-3. Процесс агрегометрии тромбоцитов. Значок * означает, что к системе добавлен агонист агрегации тромбоцитов, например АДФ или адреналин. Образование тромбоцитарных агрегатов из одиночных тромбоцитов превращает мутную, богатую тромбоцитами плазму в относительнопрозрачную