5 курс / ОЗИЗО Общественное здоровье и здравоохранение / Инновационное_развитие_науки_фундаментальные_и_прикладные

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

33.Омашева, М.Е. Генетическое разнообразие культурной яблони, возделываемой в Казахстане / М. Е. Омашева, А. С. Пожарский, Б. Б. Смайлов [и др.] // Генетика. – 2018. – Т. 54. - № 2. – С. 187-199.

34.Омашева, М.Е. Молекулярно-генетическая паспортизация сортов

яблони: научно-методические рекомендации / М.Е. Омашева, А.С. Пожарский, Б.Б. Смойлов, Н.Н. Галиакпаров. – Алматы, 2017. – 50 с.

35.Сохранность плодов яблока/биосинтез этилена: [Электронный ресурс] // RosBREED. URL: https://www.rosbreed.org/node/406. (Дата обращения 22.02.2023).

36.Ульяновская, Е.В. Изучение биоразнообразия и формирование идентифицированных коллекций рода Malus Mill. для ускоренного создания

https://rscf.ru/project/ 22-26-20101. (Дата обращения 03.03.2023).

37. Oraguzie, N. C. Inheritance of the Md-ACS1 gene and its relationship to fruit softening in apple (Malus x domestica Borkh.) / N. C. Oraguzie, H. Iwanami, J. Soejima [et al.] // Theoretical and Applied Genetics. – 2004. – V. 108. – P. 1526– 1533.

P.46-52.

39.Савельева, Н.Н. Полиморфизм сортов и форм яблони по генам биосинтеза этилена / Н.Н. Савельева, А.С. Лыжин, Н.И. Савельев // Селекция и сорторазведение садовых культур : Материалы Международной научнопрактической конференции, посвященной 170-летию ВНИИСПК, Орѐл, 02–05 июня 2015 года. Том 2. – Орѐл: Всероссийский научно-исследовательский институт селекции плодовых культур, 2015. – С. 165-167.

40.Шамшин, И.Н. Распространение аллелей генов, вовлеченных в контроль лежкости плодов, среди сортов яблони / И.Н. Шамшин, О.В. Зорина, C.А. Мкртычян // Вестник Мичуринского государственного аграрного университета. – 2015. – № 2. – С. 57-61.

41.Савельев, Н.И. Применение достижений генетики в селекции плодовых культур: вклад Мичуринского отделения Вавиловского общества генетиков и селекционеров / Н. И. Савельев, Н. Н. Савельева // Вавиловский журнал генетики и селекции. – 2016. – Т. 20. – № 4. – С. 555-562.

59

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

42.Савельева, Н.Н. Генетический потенциал исходных форм яблони для создания устойчивых к парше и интенсивных колонновидных сортов : специальность 06.01.05 "Селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений" : диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук / Савельева Наталья Николаевна. – Рамонь, 2015. – 353 с.

43.SSR genotyping of Kazakhstani apple varieties: identification of alleles associated with resistance to highly destructive pathogens / M.Y. Omasheva, A.S. Pozharskiy, A.D. Maulenbay [et al.] // Биотехнология. Теория и практика. – 2016. – No 2. – P. 46-58.

44. Zoufalá, J. Apple genetic resources and their molecular analysis /

J.Zoufalá, P. Vejl, M. Melounová [et al.] // Agriculture. - 2009. – V. 55. – P. 69-79.

©Дулов М.И., 2023

©ГБУ СО НИИ «Жигулевские сады», 2023

60

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

Глава 3. КОМБИНИРОВАННОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ ПЕСТИЦИДОВ

И ИХ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ

Халиков Пулат Хужамкулович

д.б.н., профессор

Курбанов Абдубурхон Кузибаевич

к.м.н., доцент

Даминов Акмал Охунжонович

к.м.н., доцент

Шигакова Люция Анваровна

Ташкентская медицинская академия

Аннотация: Исследования частоты хромосомных мутаций в соматических и генеративных клетках малоценны для оценки генетических эффектов пестицидов. Цитогенетические эффекты пестицидов изучались в костном мозге и зародышевых клетках с использованием методов количественного определения хромосомных аберраций в клетках костного мозга; микроядра (PSE) в полихроматофильных эритроцитах; Хромосомные аберрации при диакинезе - метафаза в тестикулярных клетках. Таким образом, многократное воздействие пестицидов в малых дозах может повлиять на генетический аппарат соматических и генеративных клеток. Что касается хромосомных аберраций, то существует мало доказательств генетического воздействия пестицидов на животных, особенно на млекопитающих.

Ключевые слова: генетический эффект, пестициды, костной мозг, сперматоциты, аберрации хромосом, метафаза, соматические и генеративные клетки, хромосомные мутации, цитогенетический эффект, метафазы.

CYTOGENETIC EFFECT OF SOME PESTICIDES

UNDER THEIR COMBINED EXPOSURE

Khalikov Pulat Khuzhamkulovich

Kurbanov Abduburkhon Kuzibaevich

Daminov Akmal Okhunjonovich

Shigakova Lucia Anvarovna

Abstract: When evaluating the genetic effect of pesticides, the study of the frequency of chromosome mutations in somatic and generative cells is of no small importance. The cytogenetic effect of pesticides was studied in bone marrow and testis cells using tests for accounting for chromosome aberration in metaphase in bone marrow cells; micronuclei in polychromatophilic erythrocytes (PCE);

61

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

aberrations of chromosomes in diakinesis - metaphase in testis cells. Thus, the separate repeated action of pesticides in small doses can affect the genetic apparatus of both somatic and generative cells. There are few data on the genetic effect of pesticides obtained on an animal object, especially on mammals, taking into account chromosome aberrations.

Key words: genetic effect, pesticides, bone marrow, spermatocytes, chromosome aberrations, metaphase, somatic and generative cells. chromosomal mutations, cytogenetic effect, metaphases.

При оценке генетического воздействия пестицидов их совокупное действие на организм имеет немаловажное значение, поскольку при применении и хранении лекарственных средств в организм человека одновременно могут попасть несколько пестицидов. Кроме того, пестициды могут оказывать аддитивное (обобщающее), синергетическое (усиливающее) и антагонистическое (ослабляющее) действие. Однако в литературе очень редко встречаются сведения о генетическом действии пестицидов в сочетании с их комбинированным действием. [1] Исходя из этого, в данной работе изучено цитогенетическое действие хлората магния (дефолиант), фозалона (инсектицид), которана (гербицид).

Загрязнение окружающей среды кобиотическими веществами является одной из основных проблем современности, поскольку количество ксенобиотиков, попадающих в окружающую среду, стремительно растет, а главное, увеличивается их концентрация в окружающей среде. Пестициды относятся к ксенобиотическим веществам. Они используются на площади более 15 млн кв. км, в окружающую среду планеты выбрасывается до 1 млн т, они стали одним из сильнейших экологических факторов (А.И. Куринный, М.А. Шлиннская, 1976; Н.П. Дубинин, 1977; О). (Н. Прокофьев, 1083; А.А. Кулыгина, 1984; А. И. Николаев и др., 1988). •

Ядохимикаты, отравления, могут приводить к гибели сортов сельскохозяйственных культур, вызывая наследственные изменения (Т.А. Кириллова, И.А. Тихонова и др., 1987; В.В. Логинекко, В.В. Моргун, 1982; А.Е. Эргашев, А.С. Султан, 1990; А.С., 1993), изменение генетического влияния микроорганизмов (В.А. Бреев, 1982; М.И. Гальперина, 1985; Х.П. Ядгаров, 1993), животных (М.Г. Акио, 1977; П.С. Потль, 1989; Романцева

идр. У. Л. П., 1989; П.Х. Халиков, Тип-ходдаев П.И., 1983) и люди (Рупа Д.С.

идр., 1989; Бочков Н.П., Чеботарев А.Н., 1989; Ташхожава П.И. и др., 1993). Все это сказывается на генетической структуре видов в биоценах ГАЗ. Эргашев и др., 1973; П. Х. Халиков, 1991).

Вотличие от других загрязнителей, пестициды преднамеренно вносятся в биосферу человеком. Оки в нем циркулируют во все возрастающих масштабах, мигрируют по трофическим цепям, накапливаются в различных

объектах природной среды. Это приводит к их неизбежному контакту

62

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

практически со всеми живыми существами и ухудшает прогноз их потенциального генетического риска. Поэтому необходимо проводить не только испытания пестицидов на генетическую активность, но и генетический мониторинг для оценки мутагенности окружающей среды в районах их интенсивного применения [2].

Одной из основных сельскохозяйственных культур Узбекистана является хлопок. Ежегодно при выращивании хлопка используется большое количество ядовитых препаратов. Их использование основано на нагревании тела и изоляции ультрафиолетом, что ухудшает генетическое действие пестицидов. Однако научных исследований генетического действия пестицидов, применяемых при возделывании хлопчатника, немного, и они в основном проводятся на микроорганизмах или растениях (Х.К. Потапов, 1980; М. Сопова и др., 1980; О.А. Веоманова, А.Е. Ергаев, 1985; Б. Ю. Руотамова, 1906, А. Каррая, 1С86, Н. С. Бергенова, 1990, З. В. Эргашев, 1Q90, Л.С. Султонов, 1993); Работ по животным, особенно млекопитающим, очень мало» (Куканбоев Р.У., 1978; Чиненков Э.Л., Дадамухамедова С.Х., 1983; Мусамухзмедова В.Н.; Мусамухзмедова С.Р. и др., 1987; Шарма Ж.Ф. и др., 198). Б. Ш. А. Дуллоев, 1990).

Для оценки генотоксичности разработано множество тестов, определяющих способность различных факторов повреждать генетический материал в клетках и, как следствие, вызывать определенные виды мутаций. Однако проблема заключается в том, что пестициды представляют собой соединения, относящиеся к разным классам химических соединений, которые различаются по своему действию на растения, грибы и животных, а их генотоксическая активность может быть обусловлена разными механизмами, что в конечном итоге приводит к образованию многие виды генетических нарушений [3]. Универсального теста, позволяющего в одностороннем порядке оценить способность соединений индуцировать различные виды мутаций в половых и соматических клетках, не существует, что требует применения комплекса методов оценки мутагенных свойств пестицидов в условиях in vitro и in vivo. Выбор методов исследования влияет на объективность оценки потенциальной генотоксичности пестицидов и, как следствие, приводит к противоречивым выводам относительно ряда действующих веществ пестицидов. Для решения этой задачи необходимо провести сравнительные исследования на большой выборке пестицидов разных классов в сходных условиях эксперимента, определить ограничения отдельных испытаний, обусловленные специфическими свойствами исследуемых веществ, и определить оптимальный набор тестов, для некоторых групп пестицидов [4].

Кроме того, мало внимания уделяется изучению генотоксичности комплексных пестицидов, содержащих несколько действующих веществ и комбинаций препаратов, часто применяемых одновременно в виде баковых

63

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

смесей в одном и том же месте. Активные ингредиенты в смесях, их метаболиты и/или смеси в технических продуктах могут иметь побочные эффекты, связанные с аддитивным или синергетическим действием.

Эпидемиологические исследования, ставящие задачей изучение генотоксического действия пестицидов на разные группы людей, в нашей стране проводятся недостаточно и не входят в общую систему оценки генетического риска пестицидов.

Анализ мирового опыта показывает, что до сих пор нет единого подхода к оценке генотоксичности пестицидов. Системы проверки генотоксических свойств пестицидов, применяемые в разных странах, имеют свои отличия, которые связаны с национальными особенностями в области работы с пестицидами и постоянно совершенствуются по мере появления новых научных данных и разработки новых методов исследования. [5]

Внесение мутагенных пестицидов в окружающую среду может иметь серьезные последствия - увеличение частоты мутаций, увеличение генетической нагрузки в популяции человека, рост генетической патологии, онкологических заболеваний, нарушение репродуктивной функции и другие отдаленные негативные последствия. Поэтому при разработке новых молекул действующих веществ, а также при проведении регистрационных испытаний пестициды исследуют на предмет их возможной генотоксичности. Изучение генотоксической активности пестицидов является обязательной частью их токсикологической оценки и является основой для дальнейшей оценки угрозы здоровью населения.

Однако, поскольку процессы мутагенеза и канцерогенеза необратимы и могут иметь длительный латентный период, выявить мутагенные и канцерогенные эффекты на ранних стадиях применения пестицидов не представляется возможным. Кроме того, постоянное совершенствование методических методов в области оценки пестицидного риска, а также данных эпидемиологического наблюдения приводит к выявлению неизвестных ранее мутагенных и канцерогенных свойств действующих веществ пестицидов. Для некоторых пестицидов нет четкого понимания их генетического риска. В последние годы в литературе неоднократно появлялись противоречивые сообщения о канцерогенности и генотоксичности ряда пестицидов. [6]

Как видно из вышеизложенного, слишком мало информации, чтобы делать какие-либо выводы о генетическом действии пестицидов на млекопитающих. Скрытые генетические эффекты пестицидов на соматические и генеративные клетки при нормальных и повышенных температурах воздуха; кумулятивное воздействие пестицидов; Генетический мониторинг и коррекция генетических эффектов пестицидов природными антимутагенами в условиях Узбекистана.

Далапон - производное хлорированных алифатических кислот - желтобелый кристаллический порошок, растворимый в воде. Технический состав

64

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

содержит 80-85% действующих веществ. Используется как гербицид для уничтожения сорняков. Далапон является малотоксичным соединением: ЛД50 для мышей составляет 6000 мг/кг. Кумулятивные признаки представлены слабо. Отравление сопровождается снижением числа SH-групп в сыворотке крови, повышением аскорбиновой кислоты в надпочечниках, образованием белка и сахара в моче, повышением весовых коэффициентов печени, надпочечники, щитовидная железа и гипофиз. [7]

Материалы и методы

В экспериментах использовали взрослых лабораторных мышей. Животные были разделены на 10 групп. Первая группа – контрольная. Животным второй, третьей и четвертой групп отдельно давали хлопок (330 мг/кг), фазелон (27 мг/кг) и хлорат магния (1745 мг/кг); животным пятой группы - хлорат магния (1745 мг/кг) и фазолон (27 мг/кг) вместе однократно; шестая группа - три препарата вместе однократно; в экспериментах с комбинацией лекарственных средств объемное соотношение лекарственного средства составляло 1:1. Животным седьмой, восьмой и девятой групп многократно (в течение 3 мес) вводили хлорат магния (52 мг/кг), которан (10 мг/кг), фазелон (0,8 мг/кг); десятому животному - хлорат магния (52 мг/кг) и фасоль (0,8 мг/кг) вместе; одиннадцатое животное - совместно с хлоратом магния (52 мг/кг); фазолон (0,8 мг/кг) и куктара (10 мг/кг).

Использовались следующие дозы далопола: LD50; далапон - 320, 640,

1280, 2560 и 5000 мг/кг (1/18, 1/9, 1/4, 1/2 и близко к ЛД50. Далапон вводят животным тонкой иглой с тупой иглой. Для цитогенетических всех экспериментов - анализа клеток костного мозга животных забивали через 24 часа после введения далапона.

Экстракты клеток костного мозга готовили по общепринятой методике для наблюдения хромосомных аберраций в метафазе [1]. Мышам внутрибрюшинно вводили 0,04% раствор колхицина в дозе 0,01 мл/г. Через час животных умерщвляли и быстро удаляли бедренные кости. Костный мозг промывали теплым гипотоническим раствором (37°С) в центрифужной пробирке с помощью медицинского шприца. В качестве гипотонического раствора использовали 56% раствор хлорида калия. Суспензию клеток костного мозга инкубировали в гипотонической среде при 37°С в течение 5 минут. Затем эту суспензию центрифугировали при 800-1000 об/мин в течение 5 минут. Осадок декантировали и костные клетки фиксировали смесью метилового спирта и ледяной уксусной кислоты (3 части метилового спирта и 1 часть уксусной кислоты). Глушитель меняли 3-4 раза. Затем содержимое пробирки (около 0,5 мл фиксатора) встряхивали и получали однородную взвесь клеток в фиксаторе. Продолжительность фиксации 1-2 часа, 2-3 капли суспензии клеток помещают на чистое предметное стекло в фиксатор. Фиксатор выжигали, а препараты окрашивали краской из смеси оксалата

65

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

аммония и кристаллического розового. Хромосомные препараты анализировали на микроскопе МБИ-6 с иммерсионным объективом 90х. Для анализа отбирали метафазные пластинки, все хромосомы которых отделены друг от друга. Искомые клетки визуализировали под микроскопом МБИ-6 с микроиглой. Проанализированы возможные типы хромосомных перестроек, выявляемые в метафазе. Частоту хромосомных мутаций в костном мозге определяли по количеству клеток с хромосомными перестройками. Не менее 6 при рассмотрении хромосомных изменений

Данные о частоте хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей, подвергшихся воздействию различных доз далапона, представлены в таблице 1.

Цитогенетическую активность далапона изучали в дозах 320, 640, 1280, 2560, 5000 мг/кг (около 1/18, 1/9, 1/4, 1/2 и ЛД 50 соответственно). Меньшая доза Далапона оказалась неэффективной - после приема 320, 640 мг/кг частота хромосомных аберраций оставалась практически на уровне контроля (0,71 и 0,68% соответственно). Значительное увеличение числа хромосомных перестроек было отмечено после приема высоких доз Далапона. Так, количество хромосомных перестроек увеличилось более чем в 3 раза по сравнению с контролем (1,96%) при дозе 1280 мг/кг и в 4 раза при дозах 2560

и 5000 мг/кг (соответственно 2,64,2, 41%).).

Следует отметить, что изучение генетических эффектов пестицидов, применяемых при возделывании хлопчатника, в основном проводилось на микроорганизмах или растениях [2].

Которан, фазолон и хлорат магния в дозах 1/3 ЛД50 при раздельном введении не влияли на генетический аппарат клеток костного мозга мыши. Частота хромосомных мутаций (0,37; 0,35; 0,44%), а также количество ПСК с микроядрами (1,14; 1,08; 0,83%) под влиянием этих пестицидов находились на уровне контроля. В табл. 2 представлены сведения о частоте хромосомных аберраций и количестве ПХЭ с микроядрами в клетках костного мозга мышей после многократного (более 3 мес.) введения котана, фазелона и хлората магния по отдельности и совместно. Частота хромосомных аберраций и количество ПХЭ с микроядрами увеличивались в 6-7 раз по сравнению с контролем при многократном опрыскивании каждым пестицидом по отдельности. Аналогичная частота хромосомных аберраций и число микроядер ПХЭ наблюдались и в опытах, где животных обрабатывали двумя (хлорат магния + фосалон) и тремя (которан + фосалон + хлорат магния) смесями пестицидов в соотношении 1:1 (Taблица 1). Частота аберрации хромосом и число ПХЭ с микроядрами в клетках костного мозга мышей после раздельного и комбинированного воздействия которана (330 иг/кг), фазалона (27 мг/кг) и хлората магния (1745 мг/кг) при их одновременном введении.

66

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

Таблица 2. Частота аберрации хромосом и число ПХЭ с микроядрами в клетках костного мозга мышей после раздельного и комбинированного воздействия которана (10 мг/кг), фазалона (0.8 мг/кг) и хлората магния (52 мг/кг) при их многократном (3 мес.) введении.

В опытах с индивидуальным и комбинированным действием пестицидов изучение ремоделирования клеток костного мозга в основном по типу хроматид, хромосомное ремоделирование было равномерным. Хроматидные перестройки часто встречались с единичными концевыми делециями. Затем в большом количестве появились микрофрагменты и транслокации. Основные типы хромосомных изменений, отмечаемые в диакинез-метафазе, - соматические униваленты, далее транслокации располагаются численно. [8]

Таким образом, многократное индивидуальное действие пестицидов в малых дозах может повлиять на генетический аппарат как соматических, так и генеративных клеток. Однако при повторном воздействии пестицидов на генеративные и соматические клетки не наблюдалось усиления (сенсибилизации) или снижения цитогенетического эффекта при использовании одного препарата с другим. Следовательно, частота хромосомных аберраций и количество САР при комбинированном воздействии как двух, так и трех пестицидов на один и тот же пестицид. [9]

67

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

ИННОВАЦИОННОЕ РАЗВИТИЕ НАУКИ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ ПРОБЛЕМЫ

Таблица 3. Частота аберрации хромосом в клетках сперматоцитах мышей после раздельного, комбинированного воздействия которана (330 мг/кг), фазалона (27 мг/кг) и хлората магния (1745 мг/кг) при их одновременном введении

В таблице 3 представлены результаты исследования частоты хромосомных аберраций в сперматоцитах мышей после однократного введения котара, фазолона и хлората магния по отдельности и вместе. Генетический аппарат клеток сперматоцитов не реагировал на однократное введение навоза, фазолона и хлората магния ни по отдельности, ни при комбинированном воздействии. Таким образом, во всех вариантах опыта частота хромосомных аберраций в диакинез-метафазе оставалась на уровне контроля (0,19–0,24%).

Частота хромосомных аберраций в клетках сперматоцитов мышей и количество АТС индивидуального и сочетанного действия котара, фазолон и хлората магния при многократном введении (3 месяца) представлены в таблице 4. Частота хромосомных аберраций в сперматоцитах при многократном индивидуальном действии этих препаратов (опыт 2,08; 2,17; 2,41%, контроль - 0,27%) и количество АТС (опыт 4,67; 5,12; 4,84%, контроль -11,41%) по сравнению с контрольный период отмечено, что он увеличился на 10. ). Аналогичное увеличение этих показателей наблюдалось при действии двух комбинаций пестицидов (фозалон + хлорат магния; аберрации - 2,26 % и числа АПК - 5,41 %).

По данным литературы, комбинированное действие химических веществ изучено слабо, а имеющиеся данные противоречивы. Основной причиной этого является отсутствие количественного анализа комбинированного действия мутагенов. [10]

Таблица 4. Частота хромосомных аберраций в сперматоцитах мышей и количество АГС после индивидуального и комбинированного введения Которана (10 мг/кг), фазелона (0,8 мг/кг) и хлората магния (52 мг/кг). повторное (3 месяца) воздействие.

68

МЦНП «НОВАЯ НАУКА»

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/