2 курс / Нормальная физиология / Физиология.-Шукуров-Ф.А
.pdf
Рис. 88. Условия необходимые для реакции агглютинации.
Для реакции агглютинации необходимы два условия: 1) встреча одноименных агглютиногенов и агглютининов (агглютиноген А с агглютинином альфа; агглютиноген В с агглютинином бета); 2) досточная концентрация агглютининов, так как они, в отличие от агглютиногенов, способны разбавляться в плазме реципиента. Пороговая концентрация агглютининов, при котором происходит реакция агглютинации, соответствует той, которая отмечается при разбавлении 1:13. Таким образом, если агглютинины разбавились в крови реципиента более, чем в 13 раз (1:14, 1:15, 1:16 и т.д.) они не способны склеивать эритроциты с одноименным агглютиногеном, если агглютинины разбавились в крови реципиента в 13 раз и меньше (1:13, 1:12, 1:11 и т.д.) они способны склеивать эритроциты с одноименным агглютиногеном. На рисунке 88А отражена вторая группа крови (агглютиноген А и агглютинин бета). Здесь не соблюдаются вышеперечисленные условия, поэтому нет реакции агглютинации. На рисунке 88Б пациенту со второй группой добавили плазму третьей группы, в которой содержится альфа агглютинин. В данном случае соблюдается первое условие, но не соблюдается второе – мало добавили плазмы, поэтому агглютинины альфа сильно разбавились (разведение 1:14 и более), в данном случае реакция агглютинации эритроцитов не происходит. На
241
рисунке 88В показано, что пациенту со второй группы добавили большое количество плазмы третьей группы, поэтому концентрация агглютининов соответствует разведении 1:13 и меньше, то есть в данном случае соблюдаются оба условия, поэтому здесь происходит реакция агглютинации (все эритроциты, содержащие агглютиноген А склеились друг с другом за счет высокой концентрации агглютининов альфа).
При реакции антиген-антитело (встрече агглютиногена с соответствующим агглютинином) молекула антитела образует связь между двумя эритроцитами, имеющими соответсвующий агглютиноген. Многократно повторяясь, она приводит к склеиванию большого числа эритроцитов, что может привести к закупорке жизненно важных капилляров и возникает гематрансфузионный шок. Человеку, которому переливают кровь называется реципиентом, а человек, который сдает кровь называется донором. При переливании крови необходимо остерегаться реакции агглютинации – склеивания эритроцитов с последующим их гемолизом (гемотрансфузионный шок). Переливаемая кровь – это кровь донора, лица, кому переливают кровь – реципиенты. Реакция агглютинации наступает при следующих обстоятельствах: 1) при встрече агглютиногенов с одноименными агглютининами (А с альфа и В с бета). Агглютинины находятся в плазме, поэтому они способны разбавляться в крови реципиента, агглютиногены – в оболочке эритроцита, они не разбавляются. Установлено, что реакция агглютинации происходит при пороговом разведении агглютининов 1/13 и меньше (1/12, 1/11 и т.д.); 2) при встрече агглютиногена D с резус агглютинином. Правила переливания крови: 1) переливать можно только одногруппную кровь; 2) нельзя переливать резус положительную кровь реципиенту с резус отрицательной
242
кровью. Перед переливанием крови обязательно проводится три пробы:
1) проба на групповую и резус совместимость крови
донора с кровью реципиента. Групповую совместимость определяют двумя способами: а) с использованием стандартной сыворотки I, II, и III групп, в каждую сыворотку добавляют кровь исследуемого (1/10, т.е. количество сыворотки должно быть в 10 раз больше крови). Разными стеклянными палочками размешивают кровь с сывороткой и через 5 мин оценивают результат (рис. 89)
Рис. 89. Способ определения группы крови с помощью стандартных сывороток.
На лунки специальных стекол добавляем сыворотки Iгруппы с содержанием альфа и бета агглютининов (а), II группы с содержанием бета агглютининов (б) и III группы с содержанием альфа агглютининов (в). На данном рисунке после добавления исследуемой крови в луночки с агглютининами альфа и бета (а), бета (б) и альфа (в) произошла реакция агглютинации эритроцитов исследуемой
243
крови в сыворотке с агглютининами альфа и бета (а), а также в сыворотке с агглютининами альфа (в). Результаты свидетельствуют о том, что реакция агглютинации произошла в тех сыворотках, где находился агглютинин альфа (а и в), следовательно, в эритроцитах исследуемой крови находился агглютиноген А, что соответствует II группе. Таким образом, исследуемая кровь II группы (в эритроцитах которой есть агглютиноген А, а в плазме агглютинин бета). Формула исследуемой крови II (Аβ).
Если реакция агглютинации произошла в сыворотке II группы (здесь есть агглютинины бета), тогда эта реакция должна произойти и в сыворотке I группы (здесь тоже есть бета агглютинины). Сыворотка I группы (а) служит контролем: если реакция агглютинации произошла в сыворотке II группы (б) или в сыворотке III группы (в), то обязательно должна произойти и в сыворотке I группы, где есть агглютинин альфа и бета. Таким образом, по данному результату, отраженному на рисунке 90, нельзя определить группу крови, т.к. здесь реакция агглютинации произошла с сывороткой, содержащей бета-агглютинин и нет реакции с сывороткой первой группы, где так же есть агглютинин бета. Необходимо повторить результат.
244
Рис. 90. Способ определения группы крови (неверный результат)
Если реакция агглютинации происходит во всех сыворотках, тогда в эритроцитах исследуемой крови имеются агглютиногены А и В, следовательно эта кровь IV группы; реакция агглютинации в сыворотке I и II групп свидетельствует о наличии в исследуемой крови только агглютиногена А, следовательно это II группа крови; реакция агглютинации в сыворотке I и III групп свидетельствует о наличии в исследуемой крови только агглютиногена В, следовательно это III группа крови; отсутствие реакция агглютинации во всех сыворотках свидетельствует о том, что в эритроцитах исследуемой крови отсутствуют агглютиногены, следовательно это I группа крови); б) более точный способ определения группы крови и резус фактора (агглютиноген Д) с помощью цоликлонов анти-А, анти-В и анти-Д (рис. 91)
Рис. 91. Способ определения группы крови и резус-фактора при помощи цоликлона.
Цоликлон анти А дает возможность определить наличие или отсутствие агглютиногена А в эритроцитах
245
исследуемой крови, цоликлон анти В – о наличии или отсутствия агглютиногена В в эритроцитах исследуемой крови, цоликлон анти Д дает возможность определить наличие (резус положительная кровь) или отсутствие (резус отрицательная кровь) агглютиногена Д (резус агглютиногена) в эритроцитах исследуемой крови.
Для этого в углубления планшеты двумя пипетками наносят по капле цоликлона анти-А и анти-В рядом с каплями наносят по маленькой капле крови (в 10 раз меньше), двумя стеклянными палочками смешиваем и через 2-3 мин оценивают результат (нет агглютинации с цоликлоном анти-А и с цоликлоном анти-В - I группа крови; агглютинация только с цоликлоном анти-А - II группа крови ; агглютинация только с цоликлоном анти-В - III группа крови; реакция агглютинация с цоликлоном анти-А и с цоликлоном анти-В - IV группа крови). Резус совместимость определяют с помощью цоликлона анти- D. Для этого в углубления планшеты пипеткой наносят каплю цоликлона анти- D, рядом с каплей наносим по маленькой капле крови (в 10 раз меньше), стеклянной палочкой смешиваем и через 2-3 мин оценивают результат (нет агглютинации с цоликлоном анти-D – кровь резус отрицательная, если есть агглютинация – кровь резус положительная); На рисунке 91 после добавления исследуемой крови в луночки с циликлоном анти А (а), анти В (б) и анти Д (в) произошла реакция агглютинации эритроцитов исследуемой крови с цоликлоном анти В и анти Д. Результаты свидетельствуют о том, что в эритроцитах исследуемой крови содержится агглютиноген В (третья группа крови) и агглютиноген Д (резус положительная кровь). Таким образом, исследуемая кровь III группы (в эритроцитах которой есть агглютиноген В, а в плазме агглютинин альфа) и резус положительная (в эритроцитах помимо агглютиногена В находится резус агглютиноген Д). Формула исследуемой крови III (Bα) Rh+ .
246
2)индивидуальная совместимость в 2-3 капли сыворотки реципиента, взятой после ретракции сгустка крови, добавляют маленькую каплю донорской крови, агглютинация должна отсутствовать;
3)биологическая совместимость – переливают 5-10
мл крови и в течение 3-х мин убеждаются в отсутствии реакции на несовместимость (потемнение в глазах, боль в пояснице), такую процедуру проводят три раза, затем продолжают трансфузию.
Исходя из правила разведения, I гр. крови (в небольшом количестве 100-150 мл) можно переливать во все группы; II гр. – во II и IV; III гр. – в III и IV; IV гр. – только в кровь IV группы. Людей с I гр. крови называют универсальными донорами, а людей с IV гр. крови – универсальными реципиентами.
В настоящее время от этого принципа переливания крови практически отказались и для переливания используют только одногруппную кровь. Отказом от классических правил переливания служит две основные причины: 1) при переливании иногруппной крови невозможно переливать донорскую кровь в большом количестве, что бывает необходимым при ряде хирургических операциях; 2) наличие большого количесва подгрупп крови , так как обнаружены несколько вариантов агглютиногенов А и В. Кроме того, в настоящее время известны и другие агглютиногены (кроме системы АВО): M, N, S, P и другие – всего около 400 агглютиногенов
247
Резус-фактор (система).
Этот фактор был открыт К.Ландштейнером и А. Винером (1937-1940 гг.) в результате иммунизации кроликов кровью обезьян – макак-резусов. В настоящее время выявлено много антигенов этой природы, поэтому более правильно говорить о резус-системе. Наиболее активными в антигенном отношении является антиген D, в меньшей степени С и Е, еще в меньшей степени – d, с, е. Все эти антигены находятся в эритроцитах. Оказалось, не все люди содержат эти антигены. Человек считается резусположительным, если в его эритроцитах обнаруживается наиболее активный антиген – D. Среди европейцов таких людей – 86%, у представителей монгольской расы – 100%. У аборигенов Австралии в эритроцитах не выявлен ни один представитель системы резус. Такой вариант называют резус-нуль. Резус-конфликт возникает в тех случаях, когда в крови с антигеном D возникают резус-агглютинины, которые способствуют реакции агглютинации эритроцитов (склеиванию эритроцитов), имеющих данный агглютиноген. Этот конфликт возникает при следующих обстоятельствах: 1) при переливании резус положительной крови реципиенту с резус отрицательной кровью то в его организме образуются антирезус-агглютинины. При повторном переливании этому человеку резус-положительной крови произойдет реакция агглютинация эритроцитов, содержащих резус-фактор; 2) при развитии плода с резус положительной кровью у матери с резус отрицательной кровью (резус фактор у плода появляется с 3-го мес и достигает иммунологической активности к концу беременности); 3) при переливании реципиенту с резус положительной кровью резус отрицательную кровь матери после резус-конфликта с плодом.
248
Рассмотрим несколько примеров переливания крови с наличием или отсутствием реакции агглюцинации (рис.91-94)
Рис. 91. Ситуации, возникающие при переливании второй группы (донор) реципиентам первой, третьей и четвертой групп. При добавлении крови II группы (а - донор) в эритроцитах которой агглютиноген А, а в плазме агглютинин бета реципиенту с IV группой может произойти реакция агглютинация эритроцитов реципиента (2), а может не быть реакции агглютинации (1).
Это зависит от количества крови II группы, которая добавляется реципиенту. При добавлении крови II группы реципиенту с IV опасность представляет агглютинин бета в крови донора, который может способствовать агглютинации эритроцитов реципиента, имеющие агглютиногены В (встреча одноименных агглютиногенов и агглютининов: агглютиноген В встречается с агглютинином бета). В данном случае реакция агглютинация зависит от досточной концентрации
249
агглютинина бета, которые, в отличие от агглютиногенов, способны разбавляться в плазме реципиента. Пороговая концентрация агглютининов, при котором происходит реакция агглютинации, соответствует той, которая отмечается при разбавлении 1:13. Во втором случае (г2) добавили большое количество крови второй группы и концентрация агглютининов бета в плазме реципиента соответствует разбавлению 1:13 и меньше (1:12; 1:11 и т.д.). В первом случае (г1) добавили небольшое количество крови и концентрация агглютининов бета крови донора в плазме реципиента соответствует разбавлению 1:14 и более (1:15, 1:16 и т.д.), поэтому здесь отсутствует реакция агглютинации, хотя условие встречи одноименных агглютиногенов и агглютитнинов соблюдается (встреча агглютиногена В реципиента встречается с агглютинином бета донора, который разбавляется в плазме реципиента). Анологичным образом можно объяснить наличие (2) или отсутствие (1) реакции агглютинации при переливании крови второй группы реципиентам третьей и первой группы.
При добавлении крови III группы (рис.92) в эритроцитах которой агглютиноген В, а в плазме агглютинин альфа реципиенту со II группой происходит реакция агглютинация только эритроцитов донора (2) и нет реакции агглютинации эритроцитов реципиента (1). Эритроциты донора содержат агглютиноген В, который не разбавляется в крови реципиента, а у реципиента достаточно большая концентрация агглютининов бета, поэтому в данном случае происходит реакция агглютинации эритроцитов донора. Эритроциты реципиента содержат агглютиноген А, а в крови донора есть агглютинин альфа, но реакции агглютинации нет, следовательно, реципиенту добавлено небольшое количество крови донора и концентрация агглютининов донора соответствует разбавлению 1:14 и более (1:15, 1:16 и т.д.), поэтому нет их агглютинции.
250