1 О,б °щ °'т 0,6э я1 группа

0,5 Ш 1 III Л^² 12 группа

До 15 сут. ЗОсут. 45 сут. Визиты добровольцев

75

Диаграмма /?

Уровень ИЛ-13 у добровольцев

MfT ~T22~"

1 0,83

_{™ I wi uSI' „Л "Н}

0,4 _Оо^ г¹! °g a 2 группа

°'о iImiiiiipiiiiiI И В 1 КДД In ^{D 3 г}РУ^ппа

До 15 сут. ЗОсут. 45сут.

Визиты добровольцев

жания LIF в сыворотке крови (диаграмма 18) . Наибольшие показатели отмечаются в 3-й группе исследуемых лиц через 30 суток с момента введения ГСК пуповинной крови.

Колониестимулирующие факторы (КСФ), или гемопоэтины, включаютв себя G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор) и GM-CSF

Диаграмма IS

Уровень LIF у добровольцев

1гТ~ 0,88

0,8

0,6 0.47

04 L S1 f£! °4^{3 И1фУППа}|

n JL I 1 Ц 1 I 1Я U D3групп!

До 15 сут. ЗОсут. 45 сут. Визиты добровольцев

^I

(гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор). Они образуются клетками стромы костного мозга и других органов, макрофагами, активированными Т-лимфоцитами. Индукторами синтеза КСФ могут быть бактериальные продукты, полиэлектролиты, антигены. Под влиянием G-CSF увеличивается продукция в нейтрофилах нейтрофильного аттрактанта, что способствует мобилизации нейтрофилов в участки воспаления [ 16].

Динамика содержания G-CSF в сыворотке крови у добровольцев была следующей (диаграмма 19). Через 15 дней с момента введения ГСК у лиц 1-й группы уровень G-CSF практически не изменился. Через 30 дней содержание G-CSF увеличилось и вернулось к исходному уровню через 45 дней наблюдения.

У лиц 2-й группы отмечалось незначительное повышение уровня G-CSF через 15 и 30 дней и оставалось несколько сниженным (не доходя до исходного) через 45 дней с момента введения ГСК.

В 3-й группе уже через 15 дней наблюдалось значительное увеличение содержания в сыворотке крови G-CSF, которое резко возрастало к 30-му дню и снизилось к исходному уровню через 45 дней.

Аналогичная динамика изменений в испытуемых группах наблюдалась и в значениях GM-CSF как по срокам наблюдения, так и в группах добровольцев (диаграмма 20).

Выраженная дозозависимость показателей КСФ и крайне высокая степень увеличения содержания этих показателей через 30 дней с момента введения ГСК отражает процессы инициации гранулицито / миело / моноцитопоэза в естественных условиях.

Интерферон-гамма (Y-ИФН) вырабатывается активированными Т-лим-фоцитами и NK-клетками, важнейшей его функцией является участие в опо­средовании взаимосвязей между лимфоцитами и макрофагами и в регуляции клеточного и гуморального иммунитета. Он активирует нейтрофилы и НК клет­ки, стимулирует антителопродукцию к полисахаридным антигенам [ 17,18].

Диаграмма 19

Уровень GCSF у добровольцев

0,8; р

0,7

0,6

0,5 0,43

а л '■ / Г*н1 ^{н 1} ФУ^ппа

⁴ 0JS 0-325

-WjrtJ ■■■■■» -"ДМ из— . f~, Q ггч\ /n n n

0,3 0,225 0,22 ₀jfe= И^ 0,25, р.²,⁵ □ 2 группа

До 15 сут. ЗОсут. 45 сут.

Сроки исследования

77

Диаграмма 20

Уровень GMCSF у добровольцев

0,6 /Г 0,53

0,5

па °j37

nt n->k ПГ 0.275 0,27 .

^0,3 о,2 Д c,3:t Я_Г1 ■ 1 группа j

0,1 'В'²' ПЗ группа

До 15сут. 30 сут. 45 сут.

Сроки исследования

Диаграмма 211

Уровень гамма интерферона у добровольцев

8

7 6,3

6 Г

J-; _{2>65 2},₆₉ 2,975^ _{2о25 295} ^па I

До 15 сут. 30 сут. 45 сут.

Сроки введения

8 динамике содержания у-ИФН в сыворотке крови у добровольцев (диаграмма 21) прослеживаются те же закономерности, что и при изучении других цитокинов, т. е. происходит увеличение содержания через 15 дней исследования, после чего к 30-му дню показатели содержания -^ИФН достигают» наибольших величин во всех группах, и к 45-му дню наблюдения показатели уровня у-ИФН снижались до исходного.

* * *

Таким образом, изучение уровня цитокинов в сыворотке крови при введении ГСК пуповинной крови показало, что во всех группах исследуемых отмечалосЛ

_I

Увеличение их содержания по сравнению с исходными показателями (до введения ГСК) за исключением провоспалительных цитокинов (ИЛ-6 и ФНО-яяьфа) в 1-й и 2-й группах обследованных лиц. Эта закономерность характерна дяя всех видов цитокинов во всех группах обследованных лиц. Причем через 30 ^ей с момента введения ГСК пуповинной крови увеличение уровня цитокинов було наиболее выраженным.

Можно отметить высокую дозозависимость содержания цитокинов в исследуемых группах. Так, у лиц, составляющих 3-ю группу, увеличение уровня цитокинов значительно превышало таковые показатели в 1-й и 2-й группах. Особенно ярко это проявляется в содержании колониестиму-дирующих факторов. Инициация выброса гемопоэтинов (КСФ) в результате введения ГСК по принципу положительной обратной связи, в свою очередь, должна приводить к стимуляции выброса ГСК из костного мозга в периферическую кровь, что и было отмечено по результатам изучения содержания CD 34⁺ (стволовых) клеток в периферической крови обследо­ванных лиц в те же сроки.

Это говорит о выраженной активации системы цитокинов под влиянием введения ГСК, степень которой пропорциональна величине исследуемой дозы.

Поскольку клетки иммунной системы имеют соответствующие рецепторы к цитокинам, то увеличение их при введении ГСК неизменно должно приводить к стимуляции иммунного ответа, что и показано в соответствующем разделе настоящего отчета.

Выявленные сдвиги цитокинового профиля у обследованных лиц могут считаться весьма благоприятным эффектом биологического действия ГСК пуповинной крови, вполне безопасным и, учитывая широту и многоплановость биологических действий цитокинов, взаимную индукцию, взаимосвязи, а также участие их в процессах иммунорегуляции, нетрудно представить их роль в опосредовании и нормализации нарушенных иммунологических реакций в целостном организме.

При анализе индивидуальных данных цитокинового профиля нами было установлено, что при исходно сниженных показателях содержания цитокинов, отмечался более выраженный выброс практически всех цитокинов, в особенности КСФ (гемопоэтинов) через 30 дней с момента введения ГСК пуповинной крови. Это подтверждается также увеличением содержания CD 34⁺ (стволовых) клеток. К сожалению, в рамках настоящего исследования нам не представилась возможность более детального и углубленного изучения показателей иммунитета и цитокинового профиля в зависимости от исходных Данных. Однако мы усматриваем в усилении реакции иммунитета при исходно низких показателях приспособительную реакцию организма, что является общей закономерностью при введении биологически активных веществ Различного происхождения.

Описанные выше закономерности изменений цитокинового профиля соотносятся с результатами изучения количественного содержания основных йммунокомпетентных клеток организма исследуемых лиц, которое опреде­лялось методом проточной цитофлуориметрии.

I Введение препарата Суспензии ГСК пуповинной крови показало 79

выраженное стимулирующее влияние на основные показатели иммунной системы у обследованных лиц всех трех групп. При этом также можно отметить высокую дозозависимость полученных показателей. Повысилось содержание активированных МНК CD 25⁺, несущих рецептор к ИЛ-2, эти данные коррелируют с данными, полученными при изучении уровня ИЛ-2 у этих асе добровольцев (г = 0,90). Уровень ИЛ-2 достоверно повышался к 30-му дню вД второй и третьей группах.

Цитокиновая система не может быть инициирована без мощного антигенного стимула, каковым является препарат Суспензия (взвесь) ГСК пуповинной крови, в свою очередь под их влиянием активизируются клетки иммунной системы, которые начинают усиливать продукцию цитокинов. Тая осуществляются общебиологические принципы положительной обратном связи как основы автоматического регулирования и дублирования систем, которые направлены на сохранение гомеостаза организма.

ВЫВОДЫ:

1. Введение препарата Суспензия (взвесь) гемопоэтических стволовых клеток вызвало выраженную стимуляцию основных показателей иммунной системы у всех обследованных лиц. Наиболее значительная стимуляция отмечалась по содержанию популяции клеток, несущих CD 34⁺ маркеры.

2. Содержание активированных МНК CD 25⁺ клеток, несущих рецептор к ИЛ-2, увеличивалось, причем отмечается высокая корреляция с данными, полученными при изучении уровня ИЛ-2 у этих же добровольцев (г = 0,90). I

3. При изучении цитокинового профиля обследованных, условно здоровых лиц, было выявлено, что введение препарата Суспензия (взвесь) гемопоэтических стволовых клеток стимулировало их продукцию уже через 15 дней после введения препарата. Наибольших величин уровень цитокинов достигал через 30 дней наблюдения и снижался до уровня нормальных величие! к 45-му дню исследования.

4. Выявлена высокая дозозависимость практически по всем исследуемым параметрам цитокинового профиля и показателям иммунитета. Стимуляция основных исследуемых параметров была прямо пропорциональна величине вводимой дозы.

5. Выявлена взаимная индукция цитокинов и основных иммунокомпе-тентных клеток по принципу положительной обратной связи, что особенна выраженно прослеживается по содержанию гемопоэтинов (G-CSF и GM-CSF) и количественного содержания CD 34⁺ (стволовых) клеток.

6. Препарат Суспензия (взвесь) гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) плацентарно-пуповинной крови в исследуемых дозах (2,4—2,9 х 10⁵/ кг массы, 3,4—3,9 х 10⁵/ кг массы, а также 4,4—4,9 х 10⁵/ кг массы является безопасным и эффективным стимулятором иммунной системы.

7. Наиболее выраженным иммуностимулирующим действием обладает доза препарата 4,4-4,9 х 10⁵ / кг массы при общей безопасности для организма условно здоровых лиц.

80