Zhuk_ON_i_dr_Sanitarnaia_i meditsinskaia mikrobiologiia

Санитарная и медицинская микробиология

- миграция в микробных популяциях R-плазмид;

- использование антибиотиков в качестве продуктов питания; - высокая адаптивность микробов к изменяющимся условиям среды

обитания.

представителей этого вида) – обусловлена отсутствием мишени для действия антибиотика. Например, у микоплазм к пенициллинам, вследствие отсутствия у

представителей вида) — обусловлена изменением в процессе жизнедеятельностиÐепозиториймикроорганизма под де ствием факторов окружающей

среды. Она реализуется за счет модификаций, мутаций и рекомбинаций (чаще всего при передаче r-генов с участием плазм д транспозонов).

ÏолесÃÓ

Санитарная и медицинская микробиология

Модуль 4 (М-12) ХАРАКТЕРИСТИКА ОСНОВНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ

БАКТЕРИАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЧЕЛОВЕКА (4 часа)

Тема 8 МЕДИЦИНСКАЯ БАКТЕРИОЛОГИЯ

(4 часа)

1. Морфологические, культуральные, антигенные и патогенные

золотистыйÐепозиторий). У лиц ÏолесÃÓниженн й резистентностью заболевания вызываются S. epidermidis, S. haemolyticus, S. Hominis, S. capitis, S. saprophytics, S. wameri и

свойства, основные симптомы, лечение и профилактика вызываемых заболеваний, характерные для представителей следующих родов бактерий:

Staphylococcus, Streptococcus, Neisseria, Yersinia, Salmonella, Shigella, Klebsiella, Proteus, Vibrio, Clostridium, Bacillus, Brucella, Francisella, Bordetella, Haemophilus, Corynebacterium, Mycobacterium.

1. Морфологические, культу альные, антигенные и патогенные свойства, основные симп мы, лечение и профилактика вызываемых

заболеваний, характерные для представителей следующих родов бактерий:

1. Staphylococcus

Стафил к кк вые инфекции - это многочисленные гнойно-

воспалительные заб левания кожи, подкожной клетчатки, слизистых оболочек,

aureus (гр ч. staphyle - вин градная гроздь,- лат. coccus - кокк, аигеит -

другими условно-патогенными видами.

При заболеваниях, вызванных стафилококками, исследуют гной, отделяемое слизистых оболочек, кровь, мокроту и мочу, рвотные массы, испражнения больных. Из открытых поражений гной берут ватным тампоном,

из закрытых гнойников - шприцем, кровь - венепункцией.

Патогенный золотистый стафилококк отличается от условно-патогенных образованием золотистых колоний, способностью гемолизировать кровь, коагулировать' плазму кролика, выделять гиалуронидазу, лецитовителлазу, ДНК-азу, окислять маннит в аэробных условиях и ферментировать его в отсутствии кислорода, продуцировать а-токсин, вызывать у кролика при интрадермальном введении некроз кожи.

Бактериоскопическое исследование. Гной и другие жидкие материалы, исключая кровь, микроскопируют, окрашивая мазки по Граму. Стафилококки располагаются небольшими скоплениями, попарно, короткими цепочками.

Полесский государственный университет Страница 52

Санитарная и медицинская микробиология

Бактериологическое исследование. В первый день материалы высевают в чашки Петри с 3-5 % кровяным агаром. Чашки помещают в термостат при 37°С на 18-24 ч. Спустя сутки на плотных средах золотистые стафилококки образуют средней величины выпуклые непрозрачные колонии гомогенной или мелкозернистой структуры с зоной гемолиза вокруг на кровяном или зоной помутнения на желточно-солевом агаре (лецитовителлиновая реакция). В мазках из них обнаруживают типичные грамположительные стафилококки.

Для дальнейшего исследования колонии стафилококков пересевают на скошенный агар, а получив на третий день чистую культуру, исследуют плазмокоагуляционную активность, засевая чистую культуру в пробирку с цитратной плазмой. В положительных случаях через 2 ч в термостатных

условиях плазма свертывается. Одновременно двухмиллиардную взвесь культуры в объеме 0,2 мл вводят внутрикожно кролику светлой масти - на следующие сутки у него возникает некроз.

ÐепозитБактериологическÏолесÃÓе исследорийвание. Гной, мокроту, отделяемое слизистых оболочек высевают на чашку Петри сахарным 5 % кровяным агаром. На

2. Streptococcus

стрептококки вызывают гнойные поражения кожи, слизистых оболочек, других

тканей и сепсис, являю ся э ологическим фактором рожи, скарлатины, возможно, ревмати ма.

Для исследования берут гной, кровь, отделяемое слизистых оболочек,

мочу.

Бактери ск ическое иссл дование. В мазках из гноя, мокроты,

отделяемого слизистых оболоч к, окрашенных по Граму, стрептококки располагаются короткими ц почками, небольшими группами в виде диплококков или единичных кокков, поэтому их трудно дифференцировать от стафилококков.

следующие сутки инкубации в термостате при температуре 37 °С вырастают мелкие, плоские, суховатые колонии зернистой структуры с зоной гемолиза вследствие выделения Р-гемотоксина (стрептолизина) или позеленения вокруг них в результате образования метгемоглобииа под влиянием а-гемотоксина. Если гемотоксин отсутствует, гемолиза не наблюдается. В сахарном бульоне стрептококки дают придонный или пристеночный рост в виде хлопьев или зерен; среда остается прозрачной.

В мазках из колоний стрептококки располагаются одиночно, попарно или небольшими скоплениями, в мазке из бульона - длинными цепями.

Исследование крови. Взятая венепункцией кровь при сепсисе засевается в объеме 5-10 мл на 50-100 мл сахарного бульона непосредственно у постели больного. Через 24-48 ч инкубирования среды в термостате на дне флакона

Санитарная и медицинская микробиология

обнаруживаются длинные цепочки стрептококков. Для выявления гемотоксина культуру из бульона пересевают в чашку Петри с кровяным агаром. Для выделения анаэробных стрептококков, вызывающих послеродовый сепсис,

токсинообразование, в частности продукцию фибринолизина (стрептокиназы). Для этого к плазме крови человека, разведенной 1:3, добавляют 0,5 мл 18часовой культуры стрептококка и 0,5 мл 0,25 % раствора кальция хлорида. Пробирки осторожно встряхивают и помещают на водяную баню при 42 °С. Выделяющие фибринолизин стрептококки растворяют образующийся сгусток фибрина в ближайшие 40-50 мин, а некоторые штаммы - через 2 ч.

Заболевания, вызываемые S. pneumoniae. Основные свойства стрептококкаÐепозиторипневмонии: имеет ланцетовиднуюйформу, располагается попарно, образует капсулу, высоковирулентный для мышей, растворяется в желчи,

расщепляет инулин.

Стрептококки пневмонии, или пневмококки, являются возбудителями крупозной пневмонии, катаральной пневмонии, ползучей язвы роговицы, реже нагноительных процессов среднего уха, гайморовой полости, а также сепсиса и менингита.

ИсследованиюÏолесÃÓподлежат мокрота, гной, спинномозговая жидкость и кровь.

Бактериоскопическое сследование. Из исследуемых материалов (кроме крови) готовят два ма ка. Один окрашивают по Граму, другой - для обнаружения капсул по Бурри-Гинсу. Стрептококки пневмонии располагаются попарно, клетки имеют вытянутую форму в виде пламени свечи и окружены капсулой.

Бакт риологическое исс дование. Для выделения чистой культуры пневмококка кровь (5-10 мл) высевают в сывороточный бульон (1 ч. сыворотки и 3 ч. МПБ, pH 7,2-7,4) и в сахарный бульон. После 18-24 ч инкубации в термостате выросшую культуру пересевают в чашку Петри с 10 % кровяным агаром. Спинномозговую жидк сть центрифугируют и осадок сеют на кровяной агар. Колонии стрептококков пневмонии мелкие, почти плоские,

нередко с вдавлением в центре, непрозрачные, ореолом зеленого цвета, реже

3. Neisseria

Гонорея - гнойное воспаление слизистой оболочки мочеполовых путей, передающееся при половом контакте, бленнорея — воспаление конъюнктивы глаз с выделением слизи (греч. blennos), возникающее у новорожденных, заражающихся от больных гонореей матерей.

Возбудителем этих заболеваний является гонококк (Neisseria gonorrhoeae - открыт Нейссером; греч. gonos - семя, rheo – теку).

Основной метод диагностики острой гонореи и бленнореи - бактериоскопия.

Санитарная и медицинская микробиология

Гной из уретры у мужчин получают после обработки наружного отверстия мочеиспускательного канала ватным тампоном, смоченным стерильным изотоническим раствором натрия хлорида, надавливая пальцем на заднюю стенку уретры из глубины кнаружи. У женщин вводят указательный палец во влагалище. Материал из шейки матки извлекают тампоном с помощью зеркала Куско.

При бленнорее отделяемое конъюнктивы снимают бактериальной петлей. Мазки окрашивают щелочным раствором метиленового синего и по Граму. В гнойном содержимом мазка гонококки располагаются в нейтрофилах

в виде бобовидных диплококков, реже - внеклеточно.

В связи с тем, что в исследуемом материале могут находиться и другие грамотрицательные бактерии, сходные с гонококками, применяют прямую и непрямую РИФ. При прямом методе мазки обрабатывают флюоресцирующими антителами против гонококков. При непрямой РИФ используют сыворотку

ÐепозиториСлизь из носоглоткиÏолесÃÓснимают специальнымй тампоном, изогнутым под углом. Ликвор получают интралюмбальной пункцией, кровь - венепункцией.

больного гонореей с последующим спользованием флюоресцирующей антисыворотки человека.

Бактериологическое исследование п оводят в тех случаях, когда гонококка в мазках не обнаруживают или находят нетипичные, измененные формы Аша. Ввиду высокой чувс вительности гонококка к температурному фактору материал транспор ировке не подлежит. Гонококк очень чувствителен к этиотропным препаратам, поэ ому за 1-2 суток до посева необходимо

поражающая н с гл тку, оболочки головного и спинного мозга. Вызывается менингококк м (N. meningitidis - во пал ние оболочек мозга). Материалами

Менингококк весьма чувствителен к колебаниям температуры, поэтому материал заворачивают в вату или помещают в грелку. Мазки из носоглотки и спинномозговой жидкости окрашивают водным раствором основного фуксина и метиленовым синим, реже - по Граму.

Бактериологическое исследование. Оставшуюся после микроскопии часть спинномозговой жидкости заливают стерильным полужидким сывороточным агаром и помещают в термостат для накопления микробных клеток. На второй день после инкубации при температуре 37 °С изучают культуральные свойства. Менингококки образуют небольшие, круглые, выпуклые, прозрачные колонии; в мазках, приготовленных из них, находятся полиморфные диплококки и тетракокки. Колонии, розовеющие при нанесении оксидазного индикатора,

Полесский государственный университет Страница 55

Санитарная и медицинская микробиология

пересевают на скошенный сывороточный агар.

На третий день исследования выделенную культуру агглютинируют с менингококковыми сыворотками.

4. Yersinia

Чума - особо опасная кровяная инфекция, сопровождающаяся тяжелейшей интоксикацией, поражением лимфатических узлов, кожи, легких, кишечника и развитием сепсиса. Возбудитель чумы - Yersinia pestis.

В зависимости от клинической формы чумы материалами для исследования могут быть пунктат из бубона (бубонная форма), отделяемое язвы (кожная), мокрота (легочная), испражнения (кишечная), кровь

ÐепозиториБактериологическоеÏолесÃÓисследование. Содержимоей бубона, отделяемое язвы, мокроту другой материал высевают в чашки Петри с МПА (pH 7,2-7,3). В целях стимуляции роста чумных бактерий к МПА прибавляют 0,1 % крови кролика или лошади. Для инактивации чумного фага, всегда имеющегося в этих материалах, поверхность МПА равномерно орошают 0,1 мл антифаговой сыворотки. Рост посторонней, гнилостной микрофлоры угнетают прибавлением к 100 мл МПА 1 мл 2,5 % натрия сульфита и 1 мл насыщенного спиртового раствора генциана фиолетового, разведенного 1:100 дистиллированной водой. Кровь больного (5-10 мл) засевают в 100 мл МПБ. Посевы помещают в термостат при температуре 25-28 °С. Через 10-12 ч на чашках Петри могут вырастать R-формы колоний с компактным центром и ажурной периферией, напоминающие "кружевные платочки". В бульоне через 24 ч образуется рыхлая

(септическая). При вскрытии умерших исследуют кровь, внутренние органы, лимфатические узлы. В природных очагах изучению подлежат трупы грызунов

и блохи, вода, пищевые продукты и друг е объекты. Взятие материала и все

исследования проводятся в специальных лабораториях с соблюдением особых правил, в противочумном костюме.

Основным методом, подтве ждающим клинический диагноз, является

агглютинируются в адсорбированных противочумных сыворотках и подвергаются лизису прот вочумным фагом. Антигены возбудителя в остатках трупов животных выявляют в реакции термокольцепреципитации Асколи.

Бактериоскопическое исследование. Из патологического материала обычно готовят три ма ка и фиксируют их в меси Никифорова. Два из них окрашивают Граму и метиленовым иним Леффлера, третий - обрабатывают иммунофлюоресцирующей сывороткой (прямая РИФ). Обнаружение мелких грамотрицат льных палочек, бипо ярно окрашенных метиленовым синим, с ободком св ч ния вокруг них при юминесцентной микроскопии, позволяет выдать пр дварительн п жите ьное заключение о наличии возбудителя

чумы.

пленка, от которой спускаются "сталактиты".

Чистую культуру чумных бактерий выделяют на скошенном агаре и

Полесский государственный университет Страница 56

Санитарная и медицинская микробиология

идентифицируют по морфолого-культурапьным и биохимическим (не очень стабильным) признакам, а главное - в реакциях фаголизиса, РА и биологическом эксперименте.

5. Salmonella

Брюшной тиф и паратифы - острые инфекционные заболевания, сопровождающиеся бактериемией, общей интоксикацией, поражением

иммунологических исследований. При этом брюшной тиф вызывается

Salmonella typhi, паратифы А и В - S. paratyphi А и S. schottmuelleri.

бактерийÐепозиторииз рода SalmonellaÏолесÃÓ. Основными изйних в нашей стране являются: S. typhimurium, S. enteritidis, S. choleraesuis, S. gallinarum.

Дифференцировать их по морфологическим признакам невозможно. Они, как и другие виды многочисленного семейства энтеробактерий (эшерихии, шигеллы, возбудители сальмонеллезов), представляют собой бесспоровые и бескапсульные грамотрицательные палочки с закругленными концами размером 1,5-3,0 х 0,5 мкм.

Основными методами лаб ат ной диагностики тифопаратифов являются выделение гемокульту ы сальмонелл, положительная реакция агглютинации Видаля и в более п здние сроки заболеваний - выделение копро-

и уринокультур.

Материалы исследован й от больных - кровь, испражнения, моча, от

микробоносителей - испражнен я, моча, желчь.

В первые дни боле ни и весь лихорадочный период высевают кровь для выделения гем культуры. В начале второй недели с целью обнаружения агглютининов берут кр вь для р акции Видаля. В конце второй - на третьей

У больного исследуют рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, а также кровь, при выявлении микробоносителей - испражнения, получаемые после приема слабительного. Для определения факторов и путей передачи сальмонеллезных гастроэнтеритов исследуются остатки пищи, соскобы со столов, разделочных досок, смывы с рук обслуживающего

персонала и др.

Фекальные и рвотные массы берут в количестве 50-100 мл, промывные воды - 100-200 мл, мясо и мясные продукты - по нескольку кусков массой 500 г, полужидкие и жидкие продукты (сметана, молоко) - 100 - 200 мл. Материалы густой и плотной консистенции, вырезанные из глубины кусочки мяса, колбасы, сыра перед посевом на питательные среды растирают в фарфоровых ступках и взвешивают в изотоническом растворе натрия хлорида.

Основным методом лабораторной диагностики является выделение

Полесский государственный университет Страница 57

Санитарная и медицинская микробиология

чистой культуры сальмонелл и ее идентификация.

Серодиагностика. Антитела в крови больных появляются поздно, обычно спустя 1-2 недели с момента заболевания. Для их обнаружения ставят развернутую РА по типу реакции агглютинации Видаля с диагностикумами S. typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis и др. Диагностическое значение может иметь нарастание титра антител при постановке РА в динамике.

6. Shigella

Дизентерия - инфекционное заболевание, характеризующееся интоксикацией организма, поносами с болезненными спазмами прямой кишки.

Вызывается четырьмя видами Shigella, которые отличаются друг от друга биологическими, в частности ферментативными сво ствами.

обследованииÐепозиториочага ÏолесÃÓинфекции. При этом надойпомнить, что постинфекционные агглютинины сохраняются в крови переболевших в титрах 1:100-1:200 около 6

высевают в чашку Петри со сред й Пл ски ева и помещают в термостат при 37°С на 18-24 ч. На второй день бирают бесцветные колонии и пересевают на

среду Олькеницкого. На ре ьи сутки лактозоотрицательную культуру

микроскопируют и изучают в "раздавленной" и "висячей‖ каплях. Если в мазке наблюдаются грамотр цательные, а в каплях неподвижные палочки, то они пересеваются на ряд Гисса. Параллельно тавят РА с видовыми сыворотками и

набором дизентерийных адсорбированных ывороток на предметных стеклах.

На четвертые сутки учитывают изм н ния в средах Гисса и результаты развернутой РА.

В связи с широким распростран ни м лекарственно устойчивых штаммов

месяцев. Лучшие результаты дает РНГА эритроцитарными диагностикумами Зонне и Флекснера. В сыворотке больных можно выявить также антиген шигелл, используя антительную реакцию непрямой гемагглютинации. Хороший результат получают от применения ИФА.

7. Klebsiella

Существуют три нозологические формы клебсиеллезов (в честь Клебса): 1) фридлендеровская очаговая, или долевая пневмония; 2) риносклерома - хроническое заболевание, характеризующееся образованием в стенках носа и дыхательных путях рубцующихся гранулем; 3) озена, или зловонный насморк, - хроническое заболевание, при котором возникает дистрофия слизистых

Санитарная и медицинская микробиология

оболочек и костных стенок пазухи носа с образованием вязкого секрета и грязносерых корок.

Вызываются эти болезни энтеробакгериями рода Klebsiella, которые соответственно называются К. pneumoniae, К. rhinoscleromatis, K.ozaenae.

Материалом исследования при пневмонии является мокрота, при риносклероме - соскоб со слизистой оболочки верхних дыхательных путей или кусочки биоптата склерозированной ткани, при озене - секрет или корочки.

Основные методы лабораторной диагностики - выявление в мазках коротких грамотрицательных, попарно расположенных палочек, окруженных общей массивной капсулой, а в гистологических срезах биоптатов - гигантских клеток Микулича, заполненных желатинообразным веществом с наличием в

глицериновый агар или на МПА. Через 2-4 ч роста в термостате проводят агармикроскопию молодых колоний, а спустя сутки выросшие слизистые колонии пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры. Выделенную культуру высевают на с еды "пестрого" ряда, в желчный бульон или агар, а затем смывают и с авят РА и РСК со специфическими сыворотками.

Иногда в целяхÏолесÃÓопределения вирулентности культурой заражают белых мышей, а при наличии фагов - спы ывают на фаголизабельность.

8. Vibrio

Холера - с бо пасное инфекционное заболевание, протекающее по типу гастроэнтерита с профузным поно ом и фонтанной рвотой, тяжелой интоксикацией и резким наруш ни м водно-солевого обмена. Вызывается хол ра двумя биоварами - Vibrio cholerae и Vibrio eltor.

Иссл дованию подлежат испражнения и рвотные массы больных; фекалии р конвалесцент в, п учаемые после дачи им 20-30 г магния сульфата с тем, чтобы в них попали вибрионы из верхнего отдела кишечника и желчь; фекалии вибриононосителей, взятые тампоном из прямой кишки; отрезки тонкой кишки желчный пузырь частью печени; вода (1 л) и пищевые продукты (около 200 г).

Все материалы отбирают в чистую посуду, в которой не должно быть даже следов дезинфицирующих веществ. Их необходимо исследовать в ближайшие 3 ч с момента взятия. В исключительных случаях допускается консервация в щелочной пептонной воде без или с добавкой теллурита калия.

Основным в лабораторной диагностике холеры является: 1) обнаружение в мазках из испражнений изогнутых тонких грамотрицательных палочек, располагающихся в виде "стайки рыб"; 2) активная подвижность вибрионов в "раздавленной" и "висячей" каплях; 3) мгновенная их иммобилизация при добавлении О-противохолерной сыворотки; 4) образование голубоватой пленки-паутинки (5-6 ч) и характерных колоний-росинок на щелочном МПА (12 ч) на 1 % пептонной воде; 5) их агглютинабельность в противохолерных

Полесский государственный университет Страница 59

Санитарная и медицинская микробиология

сыворотках и лизабельность типовыми холерными фагами С и Эль-Тор. Исследования на носнтельство. Во время вспышки холеры проводят

массовое исследование на носительство холерного вибриона. Полученные от 10 обследуемых фекалии засевают в одну колбу, содержащую 200 мл пептонной воды и О-холерную агглютинирующую сыворотку, разведенную до половины титра. Колбу ставят в термостат при температуре 37 °С. Через 3-4 ч размножившиеся холерные вибрионы начинают агглютинироваться и хлопьями оседают на дно. Из осадка делают мазок и препарат "висячей" капли. Если в них обнаруживаются грамотрицательные подвижные вибрионы, каждый из 10 может рассматриваться как носитель и должен обследоваться индивидуально.

Бруцеллез - острое или хроническое рецидивирующее инфекционное заболевание, сопро-вождающееся бактер ем ей, поражением внутренних

органов, опорно-двигательного аппарата нервной системы.

Ðепозито9. Brucella рий

Вызывается бруцеллез тремя основными видами рода Brucella - В.

melitensis, В. abortus, В.suis.

Основными микробиол гическими методами, с помощью которых

подтверждается клинически с авленный диагноз бруцеллеза, являются

положительные реакцияÏолесÃÓагглю инации Райта и аллергическая проба Бюрне.

Дифференциац я в дов бруцелл. При росте бруцелл в бульоне происходит его помутнен с последующим образованием слизистого осадка. В чашках Петри с печеночным агаром бруцеллы образуют мелкие гладкие беловато-мутные к нии с перламутровым оттенком. Они не ферментируют углеводы, не свертывают молоко и не разжижают желатин. Различные виды

чувствит льности к бактери статическому действию анилиновых красителей.

10. Francisella

Туляремия - острая зоонозная инфекция, при которой, как и при чуме,

поражаются лимфатические узлы и возникают бубоны, развиваются пневмония и сепсис. Вызывает туляремию Francisella tularensis.

Основные микробиологические методы, подтверждающие диагноз туляремии, - положительные аллергические пробы, развернутая реакция

агглютинации и реакция связывания комплемента.

Аллергическая реакция. Аллергизация организма больного возникает спустя 5 дней от начала заболевания. Для ее выявления используют внутрикожную пробу с тулярином или в насечки кожи вводят туаллерген. Результаты аллергических реакций учитывают через 24-36-48 ч. Обычно на месте введения аллергенов развивается выраженная гиперемия и инфильтрат диаметром 5 мм. При этом нужно учитывать, что такая же положительная проба может возникать у реконвалесцентов и вакцинированных против

Полесский государственный университет Страница 60