Zhuk_ON_i_dr_Sanitarnaia_i meditsinskaia mikrobiologiia

Санитарная и медицинская микробиология

Модуль 3 (М-11)

ОСНОВЫ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

(10 часов)

Тема 6 ВАКЦИНЫ И СЫВОРОТКИ

(4 часа)

Цель: Изучить вопросы практического применения профилактических

средств для снижения риска заражения возбудителями инфекционных заболеваний.

ÐепозиторийЗадание 2: ИспÏолесÃÓль уя дидактиче кие материалы по патогенным

Материалы и оборудование: Дидактические и демонстрационные

материалы по теме работы.

.

Задание 1: Изучить следующие вопросы с использованием

предложенного методического дем нст ационного материала:

микроорганизмам, изучить опыт применения вакцин и сывороток в медицинской рактике.

Задание 3: Изучить ка ендарь прививок, применяемый в современной медицинской практике д я пр фи актики инфекционных заболеваний.

Задание 4: Сделать не бх димые записи в тетради.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:

1. Искусственный иммунитет как основная мера профилактики.

2. Вакцины, принципы их приготовления и классификация.

3. Возможности использования вакцин для терапии.

4. Профилактические и лечебные сыворотки, использование сывороток для диагностики инфекционных заболеваний

Санитарная и медицинская микробиология

Тема 7 ОСНОВНЫЕ ПОНЯТИЯ О ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ

СРЕДСТВАХ

(6 часов)

Цель: Изучить вопросы практического применения химиотерапевтических средств для лечения инфекционных заболеваний.

Задание 1. Провести эксперимент по определению чувствительности бактерий к антибиотикам методом бумажных дисков.

Определение чувствительности к антибиотикам методом бумажных

дисков основано на диффузии антибиотика в питательную среду. Концентрация антибиотиков в дисках подобрана таким образом, чтобы диаметры зон задержки роста стандартных тест-орган змов были 28 - 32 мм.

Бактерии исследуемого штамма (0,1 мл суспензии, находящейся в стационарной стадии роста) высевают на поверхность агаризованной среды в чашке Петри и распределяют шпателем. Затем стерильным пинцетом на засеянную поверхность помещают на авном расстоянии друг от друга, от краев центра чашки стандар ные бумажные диски, пропитанные растворами различных антибиотиков, выпускаемые промышленностью. Засеянные чашки

выдерживаютÐепозиторийв термосÏолесÃÓа при температуре, оптимальной для роста исследуемых бактерий. Если бактерии чувствительны к данному соединению,

то вокруг дисков обра уется она задержки ро та (рисунок 2).

Рисунок 2 – Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом бумажных дисков

затемненная часть - рост бактерий, светлая зона - отсутствие видимого роста

Диаметр зоны задержки роста соответствует степени чувствительности исследуемого микроорганизма к данному антибиотику.

Задание 2. Провести эксперимент по определению чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений антибиотика в жидкой полноценной питательной среде.

Санитарная и медицинская микробиология

Метод серийных разведений антибиотика в жидкой питательной среде позволяет путем определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика количественно охарактеризовать его активность в отношении исследуемых микроорганизмов.

Работу начинают с приготовления растворов антибиотика. Для этого в ряд стерильных пробирок наливают по 2 мл жидкой полноценной питательной среды. В первую пробирку вносят 2 мл исходного раствора антибиотика (концентрация препарата - 500, 1000 мкг/мл) и тщательно перемешивают смесь. После этого 2 мл жидкости из первой пробирки переносят во вторую, повторяя перемешивание, далее 2 мл из второй пробирки переносят в третью и т.д. Из предпоследней пробирки 2 мл раствора антибиотика удаляют. При таком

способе разведения в каждой пробирке будет содержаться по 2 мл раствора антибиотикаÐепозиторийи в каждой последующей пробирке его концентрация будет в два

раза меньше, чем в предыдущей. Среда в последней пробирке раствора антибиотика не содержит и является контрольной для роста культуры.

После приготовления разведений во все пробирки вносят по 0,1 мл взвеси клеток с таким расчетом, чтобы в 1 мл соде жалось 105 - 104 клеток (рисунок

3).

По 0,1 мл исследуемой куль уры

Рисунок 3 – Схема экспериментаÏолесÃÓпо пределению чувствительности микроорганизмов

к антибиотику методом серийных разведений препарата в жидкой питательной среде

Пробирки энергично перемешивают помещают на 18 - 20 часов для

выращивания при оптимальной температуре. Учет результатов проводят двояко: вначале просматривают пробирки, чтобы по помутнению среды определить наличие роста микроорганизмов. Помутнение среды указывает на наличие высокой численности бактерий (более 107 кл/мл). Среда в пробирках, в которых антибиотик находится в концентрациях, достаточных для подавления роста микроорганизмов, остается прозрачной. Наименьшая концентрация антибиотика, при которой размножение микроорганизмов уже не происходит, а содержимое пробирок остается прозрачным, соответствует наименьшей ингибирующей концентрации данного антибиотика в отношении изучаемого микроорганизма и рассматривается как бактериостатическая, что означает задержку роста бактерий, но не наличие их гибели. Для определения

Полесский государственный университет Страница 123

Санитарная и медицинская микробиология

бактерицидной концентрации исследуемого антибиотика в отношении изучаемого микроорганизма (это значит, концентрации препарата, в которой он вызывает гибель клеток) проводят посев бактериологической петлей из пробирок, содержимое которых не помутнело, на полноценную питательную агаризованную среду. Отсутствие роста свидетельствует, что в данной пробирке микроорганизмы полностью убиты данным антибиотиком.

Метод серийных разведений антибиотика в агаризованной среде удобен тем, что позволяет в одном опыте проверить чувствительность к данному антибиотику нескольких микроорганизмов. Разведения антибиотика готовят в стерильной агаризованной среде. Для этого в нее добавляют требуемое количество исходного раствора антибиотика, тщательно перемешивают и заливают в стерильные чашки Петри. После застывания агара дно чашки с наружной стороны делят маркером на стора. Каждую исследуемую культуру засевают штрихом с помощью бактериолог ческой петли на отдельный стор в чашки с разными концентрациями антиб от ка.

Чашки помещают в термостат п температуре, оптимальной для роста и развития изучаемых бактерий и инкуби уют в течение 40 - 72 часов. Результаты учитывают наличию или тсутствию роста бактерий в сравнении с ростом на среде в контрольн й чашке. Бактерии считаются чувствительными

Санитарная и медицинская микробиология

Модуль 4 (М-12) ХАРАКТЕРИСТИКА ОСНОВНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ

БАКТЕРИАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЧЕЛОВЕКА (4 часа)

Тема 8 МЕДИЦИНСКАЯ БАКТЕРИОЛОГИЯ

(4 часа)

Цель: Изучить морфологические, культуральные, антигенные и

Задание 1. Изучить морфологические, культуральные, антигенные и патогенные свойства, осн вные симптомы, лечение и профилактика вызываемых заболеваний, харак ерные для представителей следующих родов бактерий: Staphylococcus, Streptococcus, Neisseria, Yersinia, Salmonella, Shigella, Klebsiella, Proteus, Vibrio, Clostridium, Bacillus, Brucella, Francisella, Bordetella, Haemophilus, Corynebacterium, Mycobacterium.

Задание 2. С ставить в тетради таблицу 1 «Общая характеристика микроорганизм в», зап лнить .

Таблица 1 – Характеристика микроорганизмов – патогенов животных и челов ка.

Санитарная и медицинская микробиология

23.Характеристика патогенных спирохет на примере бледной трепонемы. Сифилис.

24.Характеристика патогенных спирохет на примере спирохеты возвратного тифа.

25.Характеристика патогенных спирохет на примере лептоспиры. Лептоспироз.

Санитарная и медицинская микробиология

Модуль 5 (М-13) САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

(18 часов)

Тема 9 ПОНЯТИЯ О САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМАХ

Тема 10 ЗНАЧЕНИЕ САНИТАРНОГО СОСТОЯНИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

(12 часов)

Цель: Освоить методы исследования и интерпретации полученных результатовÐепозиторийпо темам:

1. Санитарно-микробиологический контроль за качеством воды.

2. Санитарно-микробиологический контроль за состоянием почв.

3. Методы определения микробного заг язнен я воздуха.

1. САНИТАРНОМИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ ЗА КАЧЕСТВОМ ВОДЫ

Задание 1. О ределить микробное чи ло воды: произвести взятие проб воды и сделать осев разведений иссл ду мой воды на мясопептонный агар (таблица 2).

Мат риалы и оборуд вание. Ко ба с исследуемой водой — 50 мл, пробирки со стерильной водой по 9 мл, стери ьные чашки Петри, стерильные пипетки на 1—2 мл,

пробирки с мясо-пептонным агар м по 10 мл, водяная баня, термометр.

Методические указания к выполнению работы.

Из открытых водоемов пробы воды отбирают с глубины 10—15 см от

поверхности на расстоянии 10—15 см от дна. Из водопровода воду берут в

стерильные флаконы притертой пробкой емкостью 0,5 л, а с глубины водоема

— привязанным к шесту батометром или стеклянным сосудом с притертой пробкой, к которой прикреплен шнур. Водопроводную воду наливают после предварительного обжигания крана и стекания первых порций воды из него в течение 10—15 мин. Воду из колодца следует брать утром до начала пользования им или через 10—12 ч после прекращения пользования. Хлорированную воду перед исследованием нейтрализуют серноватистокислым натрием из расчета 10 мл на 1 л воды. Промежуток времени с момента взятия пробы до бактериологического исследования не должен превышать 2 ч (при температуре 1—5°С можно хранить до 6 ч).

Микробное число воды — количество микробов в 1 мл используемой

Полесский государственный университет Страница 127

Санитарная и медицинская микробиология

воды — определяют путем высева воды на мясопептонный агар.

Исследуемую воду разводят в 10, 100 и 1000 раз. В пробирку с 9 мл стерильной воды вносят 1 мл исследуемой воды (разведение 1:10), затем после перемешивания другой пипеткой переносят в аналогичную пробирку 1 мл разведенной воды (разведение 1 : 100) и т. д. По 1 мл полученных разведении воды, начиная с большего, переносят в маркированные стерильные чашки Петри и заливают 10 мл расплавленного и охлажденного до 45°С мясопептонного агара. Осторожно кругообразными движениями перемещают по поверхности стола чашку Петри, перемешивая содержимое. Затем чашки Петри с застывшим агаром переворачивают вверх дном и помещают на сутки в термостат. При исследовании водопроводной воды в каждую из двух чашек

Санитарная и медицинская микробиология

3. Высев со среды Эндо в глюкозопептонную среду

Результат (+ или - )

Заключение:

пробирки с концентрированной глюкозопептонной средой — одна с 10 мл и одна с 1 мл среды; 3 пробирки, содержащие по 10 мл среды нормальной концентрации; пипетки на 10 мл и на 1—2 мл.

Материалы и оборудование. Колба с исследуемой водой — 50 мл; пробирки с разведеннойÐепозиторийводой в 10, 100 раз (приготовленные при определении микробного числа воды);

Методические указания к выполнен ю работы.

Сущность метода заключается в посеве определенных объемов

исследуемой воды в среде нак пления (глюкозо-пептонная или лактозопептонная среда с индикат ром и поплавком), последующем культивировании посевовÏолесÃÓи высеве из забродивших пробирок на среду Эндо.

Выросшие на среде Эндо колон и изучают с целью определения БКГП. Затем определяют по расчетным табл цам коли-титр и коли-индекс.

Для анализа отб рают различные объемы воды, регламентированные ГОСТом 18963-73.

Первый день исследования. В лучае исследования воды на этапах очистки и обеззараживания производят посев 100; 10; 1; 0,1; 0,01 мл воды соотв тств нно во флаконы 10 и 1 мл концентрированной среды накопления и 10, 10 10 мл среды накоп ения нормальной концентрации. При исследовании пить вой водопроводн й в ды производят посев 100, 100, 100 и 10, 10, 10 мл воды соответственно во флак ны с 10 и 1 мл концентрированной среды накопления и по 1, 1, 1 мл в 10 мл среды накопления нормальной концентрации. Культивирование посевов производят при температуре 37° в

течение 24 ч.

Задание 3. Определить коли-индекс воды методом мембранных фильтров, используя демонстрацию.

Материалы и оборудование. Чашки Петри со средой Эндо с выросшими на фильтре колониями бактерий группы кишечной палочки.

Методические указания к выполнению работы.

Для анализа отбирают различные объемы воды, в зависимости от предполагаемого количества БГКП в пробе воды. Исследуемую воду фильтруют в фильтровальном аппарате, например в аппарате Зейтца через мембранные фильтры № 2 или № 3, а также планктонные фильтры № 6.

Фильтровальный аппарат стерилизуют фламбированием после обработки

Санитарная и медицинская микробиология

ватным тампоном, смоченным спиртом. Подготовленный фильтр помещают на стерильный столик фильтровального аппарата и закрепляют верхней частью аппарата (воронкой, цилиндром).

Вода фильтруется с помощью водоструйного насоса или аппарата Комовского. После фильтрования фильтр стерильным пинцетом переносят, не переворачивая, на среду Эндо, в чашку Петри.

Фильтр должен плотно прилегать к поверхности питательной среды. На дне чашки Петри ставят номер пробы, объем профильтрованной воды, дату посева и помещают в термостат при температуре 37°С на сутки. За это время из осевших на фильтре бактерий образуются колонии. Учитывают колонии, характерные для кишечных палочек (темно-красные с металлическим блеском

кишечных палочек (короткие или дл нные, полиморфные) дополнительно проводят оксидазный тест, который позволяет отличить бактерии семейства Enterobacteriacae от других грамот ицательных бактерий.

и без него, розовые прозрачные). Из нескольких колоний различных оттенков готовятÐепозиториймазки и окрашивают их по Граму. В случае присутствия нетипичных

С этой целью мембранный фильтр с колониями бактерий помещают на

больший по размеру диск фильт вальной бумаги, смоченный реактивом —

раствором фе-нилендиамина.

относящиеся к семейству Еntегоbасtеriасеае, дают положительную реакцию на оксидазу в виде посинен я колоний или появления синего ободка. Колонии, не

изменившие окраску состоящ из грамотрицательных палочек, относят к

колониям БГКП, так как у них отсут твует ок идазная активность.

Результат анализа выражают в виде коли-индекса, который высчитывают, умножая количество выросших на фильтре колоний БГКП на 1000 и делят на объ м профильтрованной воды. Ес в 1 питьевой воды содержится более 3 БГКП, а в 1 л воды бассейнов — бо ее 10, то это свидетельствует о фекальном

загрязн нии, пр вышающем н рму.

Результат реакцииÏолесÃÓучи ывают через 2—4 мин. колонии бактерий, не

Задание 4. Определить в воде индекс энтерококка (1-й этап): сделать

посевы исследуемой воды на щелочную элективную среду (таблица 4).

Таблица 4 –Определение индекса энтерококка в воде