Бактерии рода Proteus
Являются третьей (по значимости) группой СПМ; в качестве СПМ предложены ещё в 1911 г род включает 4 вида; наибольшее санитарно-показательное значение имеют P. vulgaris и P. mirabilis. При этом P. vulgaris обычно рассматривают, как показатель загрязнения объекта органическими веществами (т.к. его чаще обнаруживают в гниющих остатках), а Р. mirabilis — как показатель фекального загрязнения (т.к. его чаще обнаруживают в основном в фекалиях). P. rettgeri чаще выявляют в испражнениях при кишечных инфекциях, поэтому его обнаружение свидетельствует об эпидемиологическом неблагополучии. Длительное время протеев считали несовершенными СПМ, т.к. их выявляли в кишечнике человека в небольших количествах лишь в 6-10% случаев; кроме того, они широко распространены во внешней среде и способны размножаться в ней. После введения в практику специальных полимиксиновых сред частота выделения бактерий из кишечника возросла до 98% случаев; в 82% выявляли P. Mirabilis. Во многом это расхождение объясняет длительное использование в санитарной микробиологи метода Щукевича, тогда как этот метод выявляет лишь Н-формы бактерий. Позднее стал известно, что протеи в воде размножаются медленнее Е. coli, например в сточных водах в 2-раза медленнее. Присутствие протеев в воде, пищевых продуктах, смывах всегда свидетельствует о загрязнении объекта разлагающимися субстратами и о крайне неблагополучном санитарном состоянии. Пищевые продукты, загрязнённые протеем, обычно выбраковывают; воду, а держащую протей, нельзя пить. Протееметрия воды официально признана в США и Югославии. В РФ она рекомендована при исследовании воды открытых водоёмов, лечебных грязей, а при обследовании пищевых продуктов обнаружение протеев предусмотрено ГОСТ.
Clostridium perfringens
Является четвёртым СПМ; предложен еще в 1895 г. почти одновременно с Е. coli. Кляйн обнаружил этот микроб в сточных водах и в кишечнике человека и предложил простой меттод индикации — так называемый энтеритный тест, название которого отражает источник выделения и первое название микроорганизма (Bacterium enteritidis sporogenes). Тест включает посев на молоко и обнаружение «штормовой» реакции в нём (т.е. бурного сбраживания субстрата). Уилсон и Блэйр (1924-1925) предложили железо-сульфитную среду, совершившую настоящий переворот в санитарной бактериологии. Среда позволяет дифференцировать клостридии фекального происхождения от клостридий, обитающих во внешней среде. Кишечные клостридии восстанавливают сульфиты и вызывают почернение среды, а свободноживущие клостридии не имеют сульфит редуктазы и не изменяют цвет среды. Следует только отметить, что почернение среды могут вызывать и некоторые другие микробы, например Е. coli. Для подавления рос сопутствующей микрофлоры рекомендуют посевы выращивать при 43-44,5 °С или прогрева при 80 С 15-20 мин. Для дифференцировки С. perfringens от прочих сульфитвоссианавливающих клостридии ставят энтеритный тест. Подобная лёгкость выделения С. perfringens делает, по мнению Кляйна, Уилсона и Блэйра бесспорно санитарно-показательным. Однако если рассматривать С. perfringens с позиций СПМ, то у неё есть определённые недостатки.
A. Палочка не всегда присутствует в кишечнике человека. У детей до 3 лет её выделяют лишь в 38% случаев в титрах 10-2; 10-3/г; у взрослых в 70-98% случаев — в титрах до 10-8. Однако если принять во внимание наличие в кишечнике людей и животных других клостридий С. perfringens с полным правом может претендовать на роль СПМ.
Б. С. perfringens длительно сохраняется во внешней среде за счёт спорообразования. Поэтому обнаружение этого микроба свидетельствует лишь о некогда имевшем место фекальном загрязнении. Определить, обусловлено оно свежими фекалиями или только почвенными сточными водами, не представляется возможным. Принято считать, что споры С. perfringens сохраняются недолго и погибают от антагонистическогс воздействия сапрофитной микрофлоры. Для спор С. perfringens (как и для вирусов) губительная доза остаточного хлора в количестве 1,2-1,7 мг/л, что делает микроб индикатором возможного присутствия энтеровирусов.
B. С. perfringens может размножаться во внешней среде, особенно в некоторых типах почв. Однако для размножения этого микроба нужны температура не менее 18-20 °С и достаточное количество питательных веществ, что наблюдается не часто, а лишь в гумусных почвах южных широт. Кроме того для прорастания спор необходим так называемый «температурный шок», т.е. прогревание при 70 °С в течение 15-30 мин. Без прогрева способно прорастать лишь 0,1-3% спор.
1. В настоящее время о давности фекального загрязнения объекта предложено судить по сопоставлению количества споровых и вегетативных форм С. perfringens. С этой целью определяют количество клостридии в непрогретых и прогретых пробах.
а. В прогретых пробах индекс будет представлен только споровыми формами, свидетельствующими о давнем загрязнений (в свежих фекалиях 80-100% составляют вегетативные клетки).
б. В непрогретых пробах выявляют вегетативные и споровые формы. Первоначально вычисляют индекс только вегетативных клеток, затем определяют коэффициент - отношение количества вегетативных форм микроба к общему количеству вегетативных и споровых форм. Высокие значения коэффициента указывают на более свежее фекальное загрязнение. Метод предложен в последней рекомендации МЗ РСФСР от 11 июня 1976 г. (для исследования воды открытых водоёмов).
2. На практике количество С. perfringens в непрогретых пробах нередко бывает ниже, чем в прогретых. Этот парадокс обусловлен антагонистическим влиянием сопутствующей микрофлоры или отсутствием «температурного шока»' в непрогретых пробах.
3. С 1958 г. за рубежом предложен другой метод определения давности фекального загрязнения по наличию С. perfringens. Бактерии, попавшие во внешнюю среду сравнительно недавно, условно обозначают «фекальными», а попавшие давно — «почвенными». Конечно такое распределение носит условный характер, т.к. все С. perfringens имеют фекальное происхождение . Тем не менее «почвенные» С. perfringens устойчивы к действию 20% раствора NaCl, а «фекальные» лабильны. Дифференциацию «почвенных» и «фекальных» штаммов проводят посевом на среду с полимиксином и неомицином после 10-часового инкубирования в 20% растворе NaCl при 4 "С. Однако этот метод в нашей стране недостаточно апробирован.
4. В отечественной практике о давности фекального загрязнения судят по сопоставлению индекса Е. coli и индекса С. perfringens. Высокое значение индекса Е. coli и низкое значение индекса С. perfringens указывают на давнее загрязнение. Если оба показателя имеют высокое значение, это свидетельствует о свежем фекальном загрязнении.
5. Количественный учёт клостридии в воде предусмотрен Международным стандартом для воды, а также стандартами США, Англии, Франции и т.д. Но его считают лишь вспомогательным методом и используют чаще для уточнения характера загрязнения при первичных исследованиях новых источников водоснабжения.
6. В отечественной практике количественный учёт клостридий предусмотрен при исследованиях почвы, лечебных грязей, воды открытых водоёмов. Сульфитвосстанавливающие С. perfringens не должны обнаруживаться в 100 мл воды на предприятиях пищевой промышленности. Определение микроба проводят и в некоторых пищевых продуктах, как возможного возбудителя пищевых отравлений. Критический уровень С. Perfringens в готовых блюдах равен 10 клеток в 1 мл или 1 г продукта. Для колбас предложено использовать содержащее не более 100 клеток С. perfringens в 1 г; в консервах до стерилизации должно быть не более 1000 клеток/г, т.к. в такой концентрации при автоклавировании они погибают. Готовые консервы не должны содержать С. perfringens.
7. По соотношению количеств кишечной палочки, энтерококков и клостридийсудят о давности фекального загрязнения.