Содержание спм определяют 2 методами.
а. Прямой подсчёт. Проводят с помощью специальных камер, например Петрова или Гельбера, либо специальных электронных счётчиков. Предварительно исследуемую пробу гомогенизируют и вносят краситель (обычно эритрозин). Метод применяют в экстренных случаях, при необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток — невозможность получить адекватные результаты в загрязнённых примесями субстратах, в которых бактерии образуют агломераты либо прилипают к частицам загрязнителя. Широкое распространение метода ограничивает невозможность подсчёта субмикроскопических организмов. Метод не позволяет отличать живые от погибших бактерий.
б. Посев на питательные среды. Менее точен, т.к. выявляет только группы микроорганизмов, растущих при заданном режиме (на определённых питательных средах и при определённой температуре).
Содержание спм выражают в титрах и индексах.
а. Титр СПМ — наименьший объём исследуемого материала (в миллилитрах) или весовое количество (в граммах), в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ.
б. Индекс СПМ — количество особей СПМ, обнаруженного в определённом объёме (количестве) исследуемого объекта. Для воды, молока, других жидких продуктов — в 1 л, для почвы, и пищевых продуктов — в 1 г. Индекс — величина, обратная титру; зная один показатель, можно вычислить другой.
Как дополнительный показатель в настоящее время также используют индекс наиболее вероятного числа (НВЧ), имеющий доверительные границы, в пределах которых может колебаться истинное количество искомого микроба с 95% вероятностью. Для определения НВЧ исследования проводят 3, 5 и 10 раз; показатель определяют по специальным таблицам Хоскенса-Муре.
Основные группы санитарно -показательных микроорганизмов
Escherichia coli
Микроорганизм является родоначальником всех СПМ. На эту роль её предложил Мейц в 1888 г., практически это предложение было осуществлено лишь в 1895 г. Смитом и Фройденраихом, разработавшими бродильный метод обнаружения кишечной палочки (или БГКП). В зависимости от цели и объекта исследования к санитарно-показательным БГКП предъявляют различные требования. Их условно разделяют на 3 подгруппы и при различных обстоятельствах используют факт их наличия для бактериологической характеристики объекта или субстрата.
К 1 подгруппе относят БГКП, обладающие следующими свойствами: они должны сбраживать лактозу и глюкозу или только глюкозу до газа при 37 °С и не проявлять оксидазную активность, в эту группу входят Escherichia coli, клебсиеллы, цитробактеры, энтеробактеры и другие представители семейства Enterobacteriaceae. Такие требования к санитарно-показательным БГКП предъявляют при исследовании объектов и субстратов, «чистых» по своей природе или ставших чистыми в результате их обработки, например термической. Во всех этих продуктах не должно быть никаких БГКП (ни оксидаза-отрицательных, ни оксидаза-положительных). Такими объектами являются:
1. Питьевая (артезианская, водопроводная хлорированная, колодезная, фильтрующаяся через почвенные слои) и дистиллированная вода (взятая из дистиллятора и трубопроводов).
2. Термически обработанные пищевые продукты (котлеты, колбасы, рыба и т.д.); анализируют пробы, отобранные из глубины продукта.
3. Молоко, взятое из пастеризатора до поступления в молокопроводы; супы, соусы, компоты, вторые блюда, отобранные из котлов.
4. Смывы, отобранные при проведении контроля эффективности дезинфекционной обработки в положенные сроки (не ранее 45 мин и не позднее 1 ч после обработки).
5. На всех этапах посевы выращивают при 37 °С.
II подгруппа включает БГКП, указывающие на неопределённое по времени фекальное загрязнение. Микроорганизмы должны сбраживать лактозу и глюкозу до газа при 43-44,5 "С. В эту подгруппу входят бактерии (Е. coli, клебсиеллы, цитробактеры, энтеробактеры и др.), сохранившие способность к газообразованию при повышенном температурном режиме. Подобные требования предъявляют к БГКП при невозможности уберечь субстрат от загрязнения. При этом следует ограничиться определением лишь показателей эпидемиологического неблагополучия. Такими объектами являются:
1. Вода открытых водоёмов, почва, сточные воды и все пищевые продукты, для которых высок риск обсеменения после термической обработки. В подобных случаях исследуют продукты с поверхности; жидкие пищевые продукты, вторые и третьи блюда на раздаче, смывы.
2. Посевы культивируют при 43-44,5 С; Е. coli дифференцируют по способности ферментировать лактозу и глюкозу или только глюкозу.
К III подгруппе относят БГКП, указывающие на свежее фекальное загрязнение. Отличительной особенностью Е. coli этой группы является способность расщеплять лактозу до газа при 43-44,5 С. Г. В настоящее время СПМ являются:
1. БГКП, расщепляющие лактозу и глюкозу до кислоты и газа при 37 °С
2. Колиформными бактериями считают БГКП, расщепляющие только лактозу до кислоты и газа при 37 С в течение 24 ч
3. Фекальными колиформными (ФКП) считают БГКП, расщепляющие только лактозу до кислоты и газа при 43-44,5 °С
Кишечная палочка не является абсолютно удовлетворительным СПМ. Её существенными недостатками как СПМ являются:
1. Обилие аналогов во внешней среде, в результате чего возникает необходимость дифференцировать её по тестам ТЛИАЦ.
2. Высокая вариабельность, в результате чего многие вопросы её экологии и диагностики не являются окончательно решёнными.
3. Недостаточная устойчивость к неблагоприятным воздействиям внешней среды, например к повышенным концентрациям различных химических веществ, и изменениям рН. В тоже время некоторые патогенные микроорганизмы, особенно энтеровирусы, к ним более устойчивы.
4. Относительно короткое время выживания в пищевых продуктах, в то время как некоторые патогенные микроорганизмы (например, шигеллы Зонне, палочка паратифа В, энтеровирусы) сохраняются длительное время.
5. Кишечная палочка размножается в воде при содержании органических веществ не менее 0,28 мкг/мл.
6. Кишечная палочка является нечётким индикатором, например известны вспышки сальмонеллёза водного происхождения при содержании возбудителей до 17 бактерий/л, в то время как содержание кишечной палочки не превышало 4 бактерий/л, т.е. оставалось почти нормальным.