- •О. Ю. Сартакова
- •Учебное пособие
- •Содержание
- •1 Основы микробиологии ................................................... 7
- •2 Основы биотехнологии ................................................... 42
- •3 Типовая схема и основные стадии
- •4 Основные понятия биокатализа и53
- •5 Ферментация....................................................................... 65
- •6 Области применения биотехнологии........................... 69
- •Введение
- •1 Основы микробиологии
- •1.1 Общие сведения о микроорганизмах
- •1.2 Распространение микроорганизмов в природе
- •1.3 Морфологическая характеристика отдельных групп микроорганизмов
- •1.3.1 Структура эукариотической клетки
- •Ской мембраны
- •1.3.2 Структура прокариотической клетки
- •1.3.3 Ультрамикробы
- •1.3.4 Бактерии
- •1.3.4.1 Спорообразование у бактерий
- •1.3.4.2 Движение бактерий
- •1.3.4.3 Размножение бактерий
- •1.3.4.4 Питание бактерий
- •1.3.4.5 Типы питания
- •1.3.4.6 Систематика бактерий
- •1.3.5 Актиномицеты
- •1.3.6 Грибы
- •1.3.7 Водоросли
- •1.3.8 Простейшие
- •1.3.9 Коловратки
- •2 Основы биотехнологии
- •2.1 Объекты биотехнологии
- •2.2 Прошлое и настоящее биотехнологии
- •2.3 Перспективы развития биотехнологии
- •2.4 Основные виды биотехнологической деятельности микроорганизмов
- •2.5 Преимущества биотехнологических процессов
- •3 Типовая схема и основные стадии биотехнологических производств
- •4 Основные понятия биокатализа и биотрансформации
- •4.1 Основные группы биотрансформаций
- •4.2 Основные виды реакций биокатализа
- •4.3 Классификация ферментов
- •4.4 Преимущества и недостатки биокаталитических процессов
- •4.5 Основные понятия иммобилизации ферментов
- •4.6 Методы иммобилизации ферментов
- •Го связывания с носителем
- •«Сшивки»
- •4.7 Оценка качества иммобилизованных ферментов и метода иммобилизации
- •4.8 Примеры использования ферментов
- •5 Ферментация
- •5.1 Классификация процессов ферментации
- •Ферментация бывает:
- •5.2 Основные параметры периодической ферментации
- •5.3 Понятие скорости роста
- •5.4 Фазы периодической ферментации
- •5.5 Преимущества и недостатки периодической ферментации
- •6 Области применения биотехнологии
- •6.1 Биотехнологические процессы в решении экологических задач
- •6.2 Примеры блок-схем микробиологической очистки стоков
- •6.3 Биохимические методы очистки воды
- •6.3.1 Микробная ассоциация и технологические условия ме-
- •6.3.2 Очистка воды в аэротенках
- •6.3.3 Очистка воды в биофильтрах
- •6.3.4 Комбинированные сооружения аэробной биохимической очистки воды
- •6.3.5 Процессы нитрификации и денитрификации
- •6.3.6 Методы обработки осадка
- •6.3.7 Аэробная стабилизация осадка
- •6.3.8 Метановое брожение (биометаногенез)
- •6.3.8.1 Этапы метанового брожения
- •Биогаз (сн4, co2 )
- •6.3.8.2 Химизм процесса метанового брожения
- •6.3.8.3 Микробная ассоциация биометаногенеза
- •6.3.8.4 Сырье биометаногенеза
- •6.3.8.5 Технологические режимы и аппаратурное оформление процесса метанового брожения
- •6.4 Биоценозы как индикаторы сапробности водоемов
- •6.5 Применение биотехнологии в медицине
- •6.5.1Антибиотики
- •6.5.2. Гормоны
- •6.5.3 Вакцины, иммунные сыворотки и иммуноглобулины
- •6.5.4 Ферменты
- •6.5.5 Биодатчики в медицине
- •6.6 Применение биотехнологии в энергетике
- •6.6.1 Законы биоэнергетики
- •6.6.2 Биологические мембраны, как преобразователи энергии
- •6.6.3 Характеристика растительного сырья как источника энергии
- •6.6.4 Альтернативные источники энергии и их получение
- •6.7 Производство пищевых продуктов и напитков
- •6.7.1 Биотехнологические процессы в хлебопекарном производстве
- •6.7.2 Биотехнология приготовления пива
- •6.7.3 Производство вина и спиртсодержащих продуктов
- •6.7.4 Биотехнология приготовления кисломолочных продуктов и сметаны
- •6.7.5 Биотехнологические процессы в сыроделии
- •6.7.6 Биотехнология приготовления маргарина
- •6.8 Химическая промышленность и биотехнология
- •6.9 Сельское хозяйство и биотехнология
- •6.10 Биогеотехнология
- •6.10.1Биогидрометаллургия
- •6.10.2 Выщелачивание куч и отвалов
- •6.10.3 Бактериальное выщелачивание in situ
- •6.10.4 Выщелачивание минеральных концентратов
- •6.10.5 Микробиологический способ извлечения золота
- •6.10.6 Биосорбция металлов из растворов
- •6.10.7 Обогащение руд
- •6.10.8 Извлечение нефти
- •6.11 Безопасность биотехнологических процессов
- •Глава 1
- •Главы 2, 3
- •Глава 4
- •Глава 5
- •Глава 6
2.1 Объекты биотехнологии
Объектами биотехнологии являются отдельные части клеток (ми- тохондрии, рибосомы, хромосомы, мембраны и т.д.), сами клетки и их коллективы - клеточные культуры, отдельные микроорганизмы (грибы,
43
водоросли, бактерии, простейшие, вирусы и т.д.), и их колонии, а так- же - самостоятельные многоклеточные растительные и животные ми- кроорганизмы.
Микроорганизмы - это удивительно совершенные творения при-
роды. Микробная клетка в состоянии жить и размножаться, используя
в качестве источника питания часто только один-единственный орга- нический субстрат и минеральные соли. Бактерии способны жить в аэробных и анаэробных условиях при температурах, близких к 0 и
+80 ОС. Отдельные виды микроорганизмов находят в струях гейзеров
при температурах 105 ОС, в сверхсоленых озерах, например в зна-
менитом Мертвом море, в вечной мерзлоте Арктики, в океане на глу- бине 11 км, в атмосфере на высоте 41 км. Некоторые бактерии пре- красно себя чувствуют в воде, охлаждающей ядерные реакторы, оста- ются жизнеспособными, получив дозу радиации в 10 тысяч раз превы- шающую смертельную дозу для человека. Они выдерживают двухне- дельное пребывание в глубоком вакууме, не погибают в открытом космосе в течение 18 ч под смертоносным воздействием солнечной ра- диации. Совершенный, точно регулируемый метаболизм микробной клетки позволяет ей расти с огромной скоростью. Так деление бакте- рий Escherichia coli (кишечная палочка), при росте на полноценной среде, происходит каждые 30 мин. Если сравнить клетку с машиной, то это очень совершенная машина, имеющая коэффициент полезного дей- ствия до 70 % (превращение углерода субстрата в углерод клеточной биомассы).
Быстрый рост численности населения нашей планеты и исчерпа- ние природных ресурсов - источников питания, кормов и сырья для пе- рерабатывающей промышленности - не позволяют развивать народное хозяйство традиционными методами. Это определяет актуальность развития биотехнологических процессов сегодня и позволяет считать их наиболее перспективными.
2.2 Прошлое и настоящее биотехнологии
Человек использовал биотехнологию многие тысячи лет. По сви- детельству легенд и народных сказаний древности, люди с незапамят- ных времен готовили из сока винограда вино, делали сыр из скисшего молока, поражали врагов и диких зверей стрелами, наконечники кото- рых были пропитаны смертельным ядом. Археологические раскопки в Двуречье помогли найти сохранившиеся остатки пекарен и пивоварен, которые были построены соответственно за 6000 и 2000 лет до н.э.
44
Человек наблюдал многие удивительные явления, происходящие
в живых организмах, таких как: свертывание крови, дозревание и раз- ложение мясных, рыбных и растительных продуктов. Почему все это происходило, он долгое время не мог объяснить. Наши предки не име- ли представления о процессах, лежащих в основе знакомых им техно- логий домашнего производства продуктов питания и их хранения. Они действовали интуитивно, пользуясь микроорганизмами, не догады- ваясь об их существовании. Но в течение тысячелетий успешно приме- няли метод микробиологической ферментации для приготовления и сохранения пищи.
И лишь в начале 19 века, были обнаружены вещества, вызываю- щие подобные превращения. Они получили названия ферментов. Люди научились делать мыло из жиров, изготавливать простейшие лекарства
и перерабатывать отходы.
Становлению и развитию биотехнологии как науки предшество- вали открытия в области микробиологии таких ученых как: Хук, Ле- венгук, Женнер, Пастер, Кох и др.
Первым из людей, заглянувших в таинственный мир микроорга-
низмов, стал голландский естествоиспытатель Антони ван Левенгук
(1632 г. - 1723 г.). Он изготовил линзы, которые увеличивали в 100-300 раз. Самостоятельно шлифуя оптические стекла, он добился пре- восходного качества. Рассматривая с их помощью растворы и настои,
он увидел причудливых "зверушек", постоянно снующих в разные сто-
роны. Левенгук назвал их "анималькулюс", что по латыни означает
"зверушка". Он первым описал и зарисовал микроорганизмы. В письме
№ 17 в Лондонское королевское общество он так описывает это откры- тие: «После всех попыток узнать, какие силы в корне действуют на язык и вызывают его раздражение, я положил приблизительно пол-
унции корня в воду: в размягченном состоянии его лучше изучать. Ку-
сочек корня оставался в воде около трех недель. 24 апреля 1676 г. я по-
смотрел на эту воду под микроскопом и с большим удивлением увидел
в ней огромное количество мельчайших живых существ».
В конце 19 века благодаря трудам французского ученого Луи Па- стера были созданы реальные предпосылки для дальнейшего развития прикладной микробиологии, а также в значительной мере и биотехно- логии. Пастер всегда стремился к тому, чтобы его работы непосред- ственно служили людям. Он знал, какую огромную роль играет вино- делие в развитии экономики Франции. Порча вина приносила стране и виноделам большие убытки. Требовалось найти научное объяснение причинам вызывающим это явление. Будучи ценителем и любителем
45
вина, Пастер стал изучать процесс брожения, который считался многи- ми учеными чисто химическим явлением. Ученый сделал вывод о том, что брожение происходит только в присутствии живых организмов - дрожжей и является биологическим явлением. Порчу вина он объяснил тем, что при попадании бактерий в вино происходит вытеснение дрожжей и вино превращается в уксус. Для предотвращения порчи Па- стер предложил сразу по окончании брожения подогревать вино до
60 ОС - 70 ОС, не доводя до кипения. Вкус вина при этом сохраняется, а бактерии погибают. Этот процесс теперь называют пастеризацией. Так
обрабатывают молоко, пиво, вино.
Таким образом, Луи Пастер установил, что микробы играют клю- чевую роль в процессах брожения, и показал, что в образовании от- дельных продуктов участвуют различные их виды. Его исследования послужили основой развития в конце 19 и начале 20 веков бродильного производства органических растворителей (ацетона, этанола, бутанола
и изопропанола) и других химических веществ, где использовались разнообразные виды микроорганизмов. И сегодня многие химические соединения получают путем брожения, самым выгодным с экономиче- ской точки зрения способом.
Пастер открыл возможность жизни без кислорода. Так живут, в частности, масляно-кислые бактерии, делающие горьким вино, молоко, пиво.
К дальнейшему изучению микроорганизмов Пастера подтолкнула
смерть дочери Жанны от тифа. Он предположил, что бактерии вызыва- ют не только "болезни вина", но и людей. Пастер доказал, что, приви- вая ослабленных микроорганизмов - возбудителей, можно создавать у организма невосприимчивость к болезни - иммунитет. Прививочный материал Пастер назвал вакциной. Открыл вакцину против бешенства.
В настоящее время процессы биохимической технологии широко используются при производстве ценных биологически активных ве- ществ (антибиотиков, ферментов, гормонов и др.), для предотвращения
загрязнения окружающей среды, защиты растений от болезней и вре-
дителей, в крупномасштабном производстве белков и аминокислот,
предназначенных в качестве добавок к кормам в животноводстве.
Новая биотехнология началась после открытия Дж. Уотсоном и
Ф. Криком строения ДНК. Главным объектом исследований до сих пор остается живая клетка, но центральное место в экспериментах за-
нимают манипуляции с ДНК. Пользуясь методами генетической инже-
нерии, создаются искусственные, заранее запрограммированные струк-
туры в виде рекомбинантных ДНК, осуществляют трансплантацию ге-
46
нов между разными видами микробных клеток, а также между клетка- ми одноклеточных и многоклеточных организмов. Многообразны био- технологические манипуляции с клеточными структурами и протопла- стами. Развитие генетической и клеточной инженерии позволило полу-
чать ранее недоступные вещества - в первую очередь лекарственные препараты (интерфероны, гормоны роста, инсулин человека и др.). Раз- работка методов генетической инженерии, основанных на создании ре- комбинантных ДНК, привела к "биологическому буму", свидетелями которого мы являемся. Эти методы не только открывают возможности улучшения уже освоенных процессов и продуктов, но и дают нам со- вершенно оригинальные способы получения новых веществ, позволя-
ют осуществлять новые процессы.
На третьем съезде Европейской ассоциации биотехнологов
(Мюнхен, 1984г) голландский ученый Е. Хаувинк разделил историю развития биотехнологии на пять периодов, учитывая основные открытия, способствующие ее развитию:
− допастеровская эра (до 1858г);
− послепастеровская эра (1858 г. – 1949 г.);
− эра антибиотиков (1941 г. – 1960 г.);
− эра управляемого биосинтеза (1961 г.- 1975 г.);
− новая эра (после 1975 г.).