- •1. История развития биотехнологии. Основные этапы культуры клеток и тканей.
- •2. Использование достижений биотехнологии в отраслях производства.
- •4. Клеточная инженерия. Тотипотентность растительных клеток.
- •5. Клональное микроразмножение растений in vitro.
- •6. Основные этапы клонального микроразмножения растений.
- •7. Экспланты: происхождение, и их стерилизация.
- •8. Питательные среды для клонального размножения, каллусообразования и морфогенеза in vitro.
- •9. Модель Миллера-Скуга о роли гормонов в клеточной и тканевой культуре.
- •14. Размножение in vitro в биореакторах и образованием соматических зародышей.
- •15. Распространение вирусов, вироидов, микоплазм у растений.
- •16. Подготовка материала к оздоровлению от вирусных инфекций.
- •17. Использование термо- и химиотерапии при оздоровлении от вирусных болезней.
- •18. Биотехнология оздоровления картофеля от вирусных инфекций и других, патогенов.
- •19. Схема оздоровления древесно-кустарниковых растений.
- •20. Фитосанитария выращивания оздоровленных растений.
- •21. Диагностика вирусов при оздоровлении и размножении оздоровленных растений.
- •22. Иммуноферментный анализ: значение, методы ифа, применение.
- •23. Метод двойных антител твердофазного ифа «сэндвич - вариант».
- •24. Антитела, антигены, коньюгат, субстрат и метка.
- •25. Суспензионная культура клеток in vitro.
- •26. Получение протопластов растительных клеток.
- •27. Культивирование и слияние протопластов.
- •28. Парсексуализация (гибридизация) соматических клеток и применение в практике.
- •29. Создание ассоциаций клеток растений и микроорганизмов.
- •30. Биотехнолгия в симбиотической азотфиксации (бобово-ризобиальный симбиоз).
- •31. Конструирование рекомбинантной днк.
- •32. Получение инсулина на основе методов генной инженерии.
- •33. Этапы технологии получения гмо.
- •34. Улучшение качества и повышение продуктивности растений методами генной инженерии.
- •35. Получение трансгенных растений, устойчивых к стрессовым воздействиям.
- •36. Получение трансгенных растений, устойчивых к насекомым.
- •37. Получение трансгенных растений, устойчивых к грибной, бактериальной и вирусной инфекции.
- •38. Получение трансгенных растений, устойчивых к гербицидам биалофос, глифосат, бромоксилин.
- •39. Перенос генов и их трансформация (векторы).
- •40. Векторы переноса генов на основе Ti-плазмиды Agrobacterium tumifaciens.
- •41. Биобезопасность. Понятие биобезопасности. Методы оценки гмо. Контроль за биобезопасностью.
- •42. Особенности государственного регулирования генноинженерной деятельности и контроля за безопасностью получения и использования гмо в сша и рф.
- •43. Биотехнология производства метаболитов. Первичные и вторичные метаболиты.
- •44. Биотехнология получения аминокислот. Гидролиз сырья, химический и микробиологический синтез, биотрансформация предшественников аминокислот.
- •46. Биотехнология производства органических кислот. Получение уксусной, лимонной и др. Кислот.
- •47. Биотехнология получения вторичных метаболитов (идиолитов): антибиотиков, ферментов, стероидов и др.
- •48. Криосохранение и банк клеток тканей растений.
- •32. Получение инсулина на основе методов генной инженерии.
- •6. Основные этапы клонального микроразмножения растений.
- •7. Экспланты: происхождение, и их стерилизация.
- •8. Питательные среды для клонального размножения, каллусообразования и морфогенеза in vitro.
35. Получение трансгенных растений, устойчивых к стрессовым воздействиям.
Засуха, переувлажнениние, высокая или низкая температуры, кислое рН – стрессы, снижающие урожайность. Стрессовый ответ – синтез в растении, м.о. молекулярных в-в – осмопротекторов (пролин, глицинбеталин). Из Е.coli получен ген синтеза пролина, его перенесли в газонные травы. Табак – переносит высокую конц. солей.
36. Получение трансгенных растений, устойчивых к насекомым.
На сегодня такая устойчивость достигается единственным способом - внедрением генов из другой почвенной бактерии Bacillus thuringiensis (Вt). Такие растения часто называют по первым буквам латинского названия этой бактерии (Bt-кукуруза, Bt-хлопок). В начале прошлого века в природе найдены Вас. thyringiensis. При спорообразовании образуют кристалл токсина (яда), который убивает насекомых. Белок в кишечнике насекомого, под действием пищеварительных факторов превращается в яд – прототоксин (энтомотоксин). Выращивают бациллу, получают споры. Используют как биологический препарат (через 3 дня смерть). Из генома бациллы выделен ген Bt-2. Он интегрируется в геном растения методом агробактериальной трансформации (табак, томат, картофель, соя, рис, брокколи). Получены ГМР с тройной устойчивостью: гербицидам, вирусам, насекомым.
Получение картофеля устойчивого к колорад. жуку: Берем дохлые личинки колорад. жука, погибшие от энтомотоксина. Выделяем и сажаем в пит. среду. Отбор колоний по черным гранулам. Отобранные выращивает в пит. среде. Выделяем из бактерий плазмиды, несущие ген энтомотоксина. Плазмиды режут рестриктазой на 4 части. Каждую часть пришивают к плазмидам E.coli. Выращивают E.coli, отбирают по черным гранулам колонии. Выделяют рекомбинантные плазмиды. Переносят на Ти-плазмиду. Рекомб. Ти-плазмида (селективный ген, ген энтомотоксина, Т-область, Вир-область). Агроб. с Ти-плазмидами добавляют к растениям в стерильных условиях. Регенерируют на среде с цитокининами и антибиотиками. Конамицин убивает клетки, трансформированные кл. устойчивы к канамицину. Отбор. Размножение. Проверка.
37. Получение трансгенных растений, устойчивых к грибной, бактериальной и вирусной инфекции.
При нападении на раст. фитопатогенов в них вкл. каскад мех. защиты. Синтез токсичных для патогена соединений, или структур-барьеров (лигнина, гликопротеидов), которые прекращают распространение патогенов.
В ответ на внедрение грибов образуется фермент хитиназа, глюконаза, который ингибирует развитие грибов. Получены картофель, табак, рис, люцерна, рапс.
Животные кл. синтезируют интерферон в ответ на вирус. Антивирусный эффект получен: 1) при введении гена интерферона человека (картофель, табак, турнепс). 2) при введении гена синтеза белкового капсида ВТМ (вирус табачной мозаики). 3) трансформация кл. генами, кодирующие синтез фитоалексинов. В-ва, которые обладают фунгицидным, антимикробным действием (картофель устойчив к фитофторе).