- •1. История развития биотехнологии. Основные этапы культуры клеток и тканей.
- •2. Использование достижений биотехнологии в отраслях производства.
- •4. Клеточная инженерия. Тотипотентность растительных клеток.
- •5. Клональное микроразмножение растений in vitro.
- •6. Основные этапы клонального микроразмножения растений.
- •7. Экспланты: происхождение, и их стерилизация.
- •8. Питательные среды для клонального размножения, каллусообразования и морфогенеза in vitro.
- •9. Модель Миллера-Скуга о роли гормонов в клеточной и тканевой культуре.
- •14. Размножение in vitro в биореакторах и образованием соматических зародышей.
- •15. Распространение вирусов, вироидов, микоплазм у растений.
- •16. Подготовка материала к оздоровлению от вирусных инфекций.
- •17. Использование термо- и химиотерапии при оздоровлении от вирусных болезней.
- •18. Биотехнология оздоровления картофеля от вирусных инфекций и других, патогенов.
- •19. Схема оздоровления древесно-кустарниковых растений.
- •20. Фитосанитария выращивания оздоровленных растений.
- •21. Диагностика вирусов при оздоровлении и размножении оздоровленных растений.
- •22. Иммуноферментный анализ: значение, методы ифа, применение.
- •23. Метод двойных антител твердофазного ифа «сэндвич - вариант».
- •24. Антитела, антигены, коньюгат, субстрат и метка.
- •25. Суспензионная культура клеток in vitro.
- •26. Получение протопластов растительных клеток.
- •27. Культивирование и слияние протопластов.
- •28. Парсексуализация (гибридизация) соматических клеток и применение в практике.
- •29. Создание ассоциаций клеток растений и микроорганизмов.
- •30. Биотехнолгия в симбиотической азотфиксации (бобово-ризобиальный симбиоз).
- •31. Конструирование рекомбинантной днк.
- •32. Получение инсулина на основе методов генной инженерии.
- •33. Этапы технологии получения гмо.
- •34. Улучшение качества и повышение продуктивности растений методами генной инженерии.
- •35. Получение трансгенных растений, устойчивых к стрессовым воздействиям.
- •36. Получение трансгенных растений, устойчивых к насекомым.
- •37. Получение трансгенных растений, устойчивых к грибной, бактериальной и вирусной инфекции.
- •38. Получение трансгенных растений, устойчивых к гербицидам биалофос, глифосат, бромоксилин.
- •39. Перенос генов и их трансформация (векторы).
- •40. Векторы переноса генов на основе Ti-плазмиды Agrobacterium tumifaciens.
- •41. Биобезопасность. Понятие биобезопасности. Методы оценки гмо. Контроль за биобезопасностью.
- •42. Особенности государственного регулирования генноинженерной деятельности и контроля за безопасностью получения и использования гмо в сша и рф.
- •43. Биотехнология производства метаболитов. Первичные и вторичные метаболиты.
- •44. Биотехнология получения аминокислот. Гидролиз сырья, химический и микробиологический синтез, биотрансформация предшественников аминокислот.
- •46. Биотехнология производства органических кислот. Получение уксусной, лимонной и др. Кислот.
- •47. Биотехнология получения вторичных метаболитов (идиолитов): антибиотиков, ферментов, стероидов и др.
- •48. Криосохранение и банк клеток тканей растений.
- •32. Получение инсулина на основе методов генной инженерии.
- •6. Основные этапы клонального микроразмножения растений.
- •7. Экспланты: происхождение, и их стерилизация.
- •8. Питательные среды для клонального размножения, каллусообразования и морфогенеза in vitro.
24. Антитела, антигены, коньюгат, субстрат и метка.
Антитела получают микроклональным размн. Кролику вводят вирус х картофеля, на вирус обр-ся антитела, их берут и выращивают in vitro.
Антигены – возбудители инфекций (вирусы). Субстрат – пероксид, гидрохинон. Гидрохинон при окислении приобретает коричневую окраску. Конъюгат – антитело, которому пришивается метка. Метка – фермент пероксидаза (из хрена).
Освещают, в каких ячейках положительный результат, там вирусы. Оценивают результаты на приборах – унискан, или визуально. Для определения вирусов раст. выпускают наборы. Производительность анализа при компьютерном обесп. – 1000 за смену, а при ручной -600.
25. Суспензионная культура клеток in vitro.
Выращивание растительных кл. во взвешенном состоянии, в жидкой среде с перемешиванием. Выращивают на твердой среде каллусную ткань, затем помещают в жидкую среду, которую постепенно перемешивают на ротаторе (роммер). Если каллус плотный, то добавляют фермент пектидазу и ламилазу. При постоянном вращении кл. делятся, но находятся в небольших конгломератах – суспензионная.
26. Получение протопластов растительных клеток.
Протопласты – растительные кл. без клеточной целлюлоз. стенки. Получают из каллусной или суспензионной культуры, используя ферментный метод. Ферм.: гемицеллюлаза, пектидаза. рН=5,4-6,2. В р-ре сахарозы. Эту культуру промывают на центрифуге от ферментов и получают протопласты. Протопласты выращивают на среде Б5-Гамбурга, Ногато и Токебе, Мурасига-Скуга. рН=5,6. Плотность засева – в 1 мл. от 3 тыс. до 10 тыс. штук. Можно высадить в расплавленный агар, в агар-среде протопласты синтезируют кл. стенку, делятся и образуют эмбриоиды.
27. Культивирование и слияние протопластов.
Культивирование проточное или цикличное. Иноклиум (трансплант) – часть суспензионной культуры, используемая для пересадки в свевжую среду.
28. Парсексуализация (гибридизация) соматических клеток и применение в практике.
Надо получить отдельные растения. Берут мезофилл листа и обрабатывают ферментами. Протопласты можно смешать – это будет соматическая гибридизация (парасексуализация). Слияние стимулирует полиэтилгликоль (ПЭГ). 3 кап. на 1 мл. суспензии кл. Образуются соматические гибриды – цибриды.
1978 – Малкерс провел первую сомат. гибридизацию, сливая протопласт картофеля и томата. Одно ядро ликвидируется (картофель ликвидир-ся). Есть внеядерные ДНК (протопласты, хлоропласты, митохондрии). Некоторые св-ва остаются. Томат + морковь = л. как у моркови.
29. Создание ассоциаций клеток растений и микроорганизмов.
30. Биотехнолгия в симбиотической азотфиксации (бобово-ризобиальный симбиоз).
Симбиоз бобовых и ризобия встречается в природе. 1) Можно переносить в растения гены азотфиксации из азотфикс. бактерий – ниф-гены. Все они выделены. Азотфиксация не будет обеспечена Е. N2+Н2 -> 12 АТФ, нитроза -> азотфиксация будет снижена.
2) Кл. азотфикс. бактерий поместить в раст. кл. Слияние (эндогенез) проходит. N не фиксирует, т.к. мало Е. Необходимо усиливать фотосинтез. Злаки, кукуруза, рис.