9. Модель Миллера-Скуга о роли гормонов в клеточной и тканевой культуре.

1955 г. Открыли цитокению. Случайно. Молока сельди содержит много ДНК, они ее добавляли, но ничего не происходило. Студент забыл выключить автоклав. Раньше всего 20 мин. Получили цитокинины.

Согласно их модели: каусообразование вызывает большая доля ауксинов 24Д, 3,6 мг/л. среды.

Избавляются от сорняков. Из каллусной ткани получают стебли на среде ИУК, где цитокининов больше или равно 10/1. Для стимуляции вводят 0,1-2 мг. цитокининов. Соотношение цитокининов не приводит к делению клетки.

10. Условия культивирования клеток и тканей in vitro (освещения и температуры).

Температура 20-25 градусов. Для луковичных 16, манстера – 30.

Освещение: люминесцентные лампы, ОТ-400 – тепловые лампы. 1-5 килолюкс. Длина дня 15-16 часов (длинный световой день). Для клубнеобразования – короткий день. Низкая и высокая освещенность не желательна, т.к. подавляется рост.

11. Размножение растений in vitro активацией пазушных меристем.

Снимают апикальное доминирование, добавленирем в среду цитокининов, которые приводят к образованию пазушных побегов. Их отделяют и укореняют (2-х этапное получение растений), или культивируют дальше.

Размножают: картофель, томат, огурцы, свекла, роза, гвоздики, папоротник, туя, можжевельник, яблоня, слива, вишня, виноград, крыжовник.

12. Размножение растений in vitro индукцией адвентивных почек.

Адвентивные почки – возникшие из клеток и тканей растений, обычно их не образующие. Получают из любых органов листа, высаживают на среду где цитокининов больше чем ауксинов.

Размножают: томат, лук, тюльпаны, гладиолусы, чеснок,. Сажаем в колбу нарезанные части листа. Корней не будет.

13. Микрочеренкование in vitro побега, сохраняющего апикальное доминирование.

Черенкуют, укореняют. Питательная среда ИУК. Работу проводят в ламинарном боксе где дует стерильный воздух (0,4 м/с). За 30 мин. до работы включить продувку и УФЛ. В бокс поставить спиртовку, спички, 2 флакона 70 и 96% спиртом и стакан для маточных растений. Инструменты: скальпель, пинцет. Чашка-петки. Протереть спиртом, сесть в бокс, нарезать, посадить, подписать, накрыть колпачком, резинкой, в штатив.

Размножают: картофель, виноград, плодовые, семечковые.

14. Размножение in vitro в биореакторах и образованием соматических зародышей.

В биореакторах: размножение оздоровленных растений, посадка материала у растений с клубнями, луковицами; кустарники. Лилии, гладиолусы, рододендроны. Картофель массой 5 гр. (клубень) с 1 м3 среды.

Образование соматических зародышей. Основан на соматическом эмбриогенезе. Клетки раст. в присутствии ауксина 2,4Д образуют эмбриональные клетки. Затем снижают концентрацию, или высаживают на среду без него. Развиваются эмбриоиды, их отделяют, капсулируют. Получают семена.

Размножают: дуб, ель, эвкалипт, виноград.

15. Распространение вирусов, вироидов, микоплазм у растений.

Все вегетативно размн. растения накапливают внутриклеточных паразитов. Следовательно снижается качество, урожайность, сохранность на 50%. 1949 г. французы установили, что апикальная меристема у вирусных растений (0,1-0,3 мм) не содержит вирусов. А в других клетках их содержится сотни штук. Перемещаются по проводящим тканям. А т.к. в меристемах нет проводящих тканей, они их не поражают. Посадка оздоровленного материала повышает урожайность на 40-60% (300%).

Урожай с 1 га и пораженность: Голландия - 346 ц., 0,1; Франция – 333 ц., 0,33; Германия – 250 ц, 0,5; ПК – 90-100 ц.

Сильно заражены сады в Молдавии (на 80% снижен урожай), вишня – 35-96%, слива – 5-95%, картофель 25-88%.

Первые оздор. раст. получили во Франции – георгины, нарциссы, картофель.

Вирусы делятся на 3 группы (на примере картофеля): 1) вирусы e, s, m, a. 2) менее распространенные f, метельчатость верхушек картофеля, скрученность л. 3) редко встр-ся – мозайка люцерны, вирус собачей мозайки.