- •1. История развития биотехнологии. Основные этапы культуры клеток и тканей.
- •2. Использование достижений биотехнологии в отраслях производства.
- •4. Клеточная инженерия. Тотипотентность растительных клеток.
- •5. Клональное микроразмножение растений in vitro.
- •6. Основные этапы клонального микроразмножения растений.
- •7. Экспланты: происхождение, и их стерилизация.
- •8. Питательные среды для клонального размножения, каллусообразования и морфогенеза in vitro.
- •9. Модель Миллера-Скуга о роли гормонов в клеточной и тканевой культуре.
- •14. Размножение in vitro в биореакторах и образованием соматических зародышей.
- •15. Распространение вирусов, вироидов, микоплазм у растений.
- •16. Подготовка материала к оздоровлению от вирусных инфекций.
- •17. Использование термо- и химиотерапии при оздоровлении от вирусных болезней.
- •18. Биотехнология оздоровления картофеля от вирусных инфекций и других, патогенов.
- •19. Схема оздоровления древесно-кустарниковых растений.
- •20. Фитосанитария выращивания оздоровленных растений.
- •21. Диагностика вирусов при оздоровлении и размножении оздоровленных растений.
- •22. Иммуноферментный анализ: значение, методы ифа, применение.
- •23. Метод двойных антител твердофазного ифа «сэндвич - вариант».
- •24. Антитела, антигены, коньюгат, субстрат и метка.
- •25. Суспензионная культура клеток in vitro.
- •26. Получение протопластов растительных клеток.
- •27. Культивирование и слияние протопластов.
- •28. Парсексуализация (гибридизация) соматических клеток и применение в практике.
- •29. Создание ассоциаций клеток растений и микроорганизмов.
- •30. Биотехнолгия в симбиотической азотфиксации (бобово-ризобиальный симбиоз).
- •31. Конструирование рекомбинантной днк.
- •32. Получение инсулина на основе методов генной инженерии.
- •33. Этапы технологии получения гмо.
- •34. Улучшение качества и повышение продуктивности растений методами генной инженерии.
- •35. Получение трансгенных растений, устойчивых к стрессовым воздействиям.
- •36. Получение трансгенных растений, устойчивых к насекомым.
- •37. Получение трансгенных растений, устойчивых к грибной, бактериальной и вирусной инфекции.
- •38. Получение трансгенных растений, устойчивых к гербицидам биалофос, глифосат, бромоксилин.
- •39. Перенос генов и их трансформация (векторы).
- •40. Векторы переноса генов на основе Ti-плазмиды Agrobacterium tumifaciens.
- •41. Биобезопасность. Понятие биобезопасности. Методы оценки гмо. Контроль за биобезопасностью.
- •42. Особенности государственного регулирования генноинженерной деятельности и контроля за безопасностью получения и использования гмо в сша и рф.
- •43. Биотехнология производства метаболитов. Первичные и вторичные метаболиты.
- •44. Биотехнология получения аминокислот. Гидролиз сырья, химический и микробиологический синтез, биотрансформация предшественников аминокислот.
- •46. Биотехнология производства органических кислот. Получение уксусной, лимонной и др. Кислот.
- •47. Биотехнология получения вторичных метаболитов (идиолитов): антибиотиков, ферментов, стероидов и др.
- •48. Криосохранение и банк клеток тканей растений.
- •32. Получение инсулина на основе методов генной инженерии.
- •6. Основные этапы клонального микроразмножения растений.
- •7. Экспланты: происхождение, и их стерилизация.
- •8. Питательные среды для клонального размножения, каллусообразования и морфогенеза in vitro.
20. Фитосанитария выращивания оздоровленных растений.
В Голландии запрещено выращивать не оздоровленный картофель. Необходим правильный отбор на семена. В нашем крае высаживают in vitro в горшочки, а затем как рассаду в теплицу. Надо соблюдать: 1) почва грунта – торф/песок (3/1), торф/песок/дерн.земля (3/1/1). Нельзя грунт с проволочником, совкой, карантийными болезнями (рак карт., нематоды). 2) защита от насекомых: тля, цикады. Для этого один раз в 7 дней обр-т сектицидами (робикур, актеллин, карбофос). Наносить на нижнюю часть. Форточки обтягивать марлей (против белокрылки).
Борьба с сорняками: они разносчики нематод. Их надо удалять. Против вредителей обраб-т интексицидами, а против болезней фундицидами (бордовская жидкость, фундазол). Можно использовать биол. средства, барелин против насекомых, трихобелин – против болезней.
21. Диагностика вирусов при оздоровлении и размножении оздоровленных растений.
Серологическая р-ция (раньше). Основана на р-ции агглютинации. Капелька сока + капелька антигенов = если образуются хлопья, то есть в соке вирусы. При слабой зараженности можно и не определить. Сейчас имеет значение диагностика вирусов.
Методы: 1) электр. микроскопия. 2) серологический. 3) ИФА: прямой, непрямой, элиз-отест, сендвич-метод, твердый, изотопный, флуоресцентный (ФИФА).
22. Иммуноферментный анализ: значение, методы ифа, применение.
Методы: 1) электр. микроскопия. 2) серологический. 3) ИФА: прямой, непрямой, элиз-отест, сендвич-метод, твердый, изотопный, флуоресцентный (ФИФА).
Он высоко-чувствительный. Если в среде 6 вирусов, то уже положительный рез-т. Он специфичный. Стабильные реагенты. Быстрота проведения анализа. Он внедрен в медицину, с/х, биологию, фарм. пр-во, опред. вирус СПИДА, беремен., допинг.
В основе 2 реакции: 1) иммунная – взаим-е антитела с антигеном. 2) ферментная – исп-ся фермент пероксидаза, которая разрушает пероксид до воды и О. Если к этому О доб-ть в-во, при добавлении кот. изм-ся окраска, то можно визуально определить эту реакцию.
23. Метод двойных антител твердофазного ифа «сэндвич - вариант».
Твердой фазой явл-ся 96 луночная микролампа из полистирола. Основан на взаимодействии: антитело – фермент – коньюгат. Антитела получают микроклональным размн. Кролику вводят вирус х картофеля, на вирус обр-ся антитела, их берут и выращивают in vitro. Антигены – возбудители инфекций (вирусы). Субстрат – пероксид, гидрохинон. Гидрохинон при окислении приобретает коричневую окраску. Конъюгат – антитело, которому пришивается метка. Метка – фермент пероксидаза (из хрена).
В основе 2 реакции: 1) иммунная – взаим-е антитела с антигеном. 2) ферментная – исп-ся фермент пероксидаза, которая разрушает пероксид до воды и О. Если к этому О доб-ть в-во, при добавлении кот. изм-ся окраска, то можно визуально определить эту реакцию.
Освещают, в каких ячейках положительный результат, там вирусы. Оценивают результаты на приборах – унискан, или визуально. Для определения вирусов раст. выпускают наборы. Производительность анализа при компьютерном обесп. – 1000 за смену, а при ручной -600.