Опыт № 2 Обнаружение липидов в биоматериале по реакции с фосфорно-ванилиновым реактивом

Общие липиды в биоматериале (печень, кровь, плазма крови) обнаруживают по реакции окрашивания липидов с фосфорно-ванилиновым реактивом (ФВР — смесь 0,6 % водного раствора ванилина и фосфорной кислоты (р = 1,7) в соотношении 1:4)

В тканях и клетках липиды находятся в свободном и связанном состоянии, в виде комплексных соединений с белками, углеводами и другими веществами. Липиды выделяют из биоматериала методом экстракции бинарным растворителем, например гептан-изопропанол, при этом полярный растворитель разрушает белково-липидные комплексы и растворяет нелипидные компоненты, полярные липиды; нейтральные липиды переходят в раствор неполярного растворителя. Предлагаемая методика состоит из двух частей: в первой части осуществляют изолирование (а), а во второй — обнаружение (б). При наличии готовых экстрактов выполняют только вторую часть.

Методика эксперимента

а) Изолирование: В мерную пробирку с пробкой вносят 2—З капли крови, или 2—З капли плазмы крови. Затем добавляют по З мл смеси гептан-изопропанол (1:1 по объёму), энергично встряхивают в течение 1 мин. Добавляют 0,5 мл воды для разделения фаз, пипеткой отбирают обе фазы в две пробирки.

6) Обнаружение: В пробирки вносят 10 капель гептанового и изопропанольного экстрактов липидов, в третью для контроля помещают одну каплю подсолнечного масла и 10 капель гептана, затем во все пробирки добавляют по 10 капель концентрированной серной кислоты и ставят на кипящую водную баню на 5—7 мин. Отмечают изменение окраски. Затем охлаждают пробирки, добавляют 10 капель фосфор-ванилинового реактива (ФВР) и оставляют в штативе на 15—20 мин. Отметить изменения. Записать наблюдения и выводы о том, можно ли по интенсивности окраски растворов судить о концентрации липидов (растворы оставить для опыта № 8).

Наблюдения _________________________________________

Выводы ______________________________

Опыт № з Эмульгирование жиров

Методика эксперимента

В две пробирки поместить по 2—З капли растительного масла (подсолнечное, оливковое и др.). В одну — прилить по 10 капель 50 % раствора желчи, в другую — 1 % раствора гидрокарбоната натрия. Энергично встряхнуть пробирки. Наблюдать изменения, изобразить схему структуры мицеллы.

Химизм

Привести формулы:

1. 1 -О-пальмитоил-2-О-олеиноил-З -О-линоленоил -S_n-глицерина;

2. 1 -О-стеароил-2-О-олеиноил-3-О-линоленоил- S_n -глицерина.

Наблюдения ___________________________________________

Выводы _______________________________________________

Опыт № 4 Омыление жиров

Соли высших жиряьих кислот называют мылами. ма-, К-соли растворимы в воде, а Са-соли не растворкмы. Этим объясняется образование осадков при использовании мыла в жёсткой воде.

Методика эксперимента

В пробирку поместить 1—2 капли растительного масла, затем 10 капель этанола и 5 капель 40 % водного раствора гидроксида натрия. Пробирку встряхнуть и поставить на кипящую водную баню, через 5—10 мин. смесь становится однородной. Перенесите 2—З капли раствора в другую пробирку, добавьте 1 мл воды и нагрейте на бане. Если проба полностью растворяется, омыление можно считать законченным. К полученному водному раствору натриевого мыла прибавьте 5—10 капель 5 % водного раствора хлорида кальция. Встряхнуть, записать наблюдения.

Химизм

Записать гидролиз триглицеридов (опыт З) до глицерина и солей жирных кислот.

 Наблюдения _________________________________________

Выводы ______________________________