Лабораторная работа №5
Тема:
РЕАКЦИИ ОБНАРУЖЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ, БЕЛКОВ И ИХ ВЫЯВЛЕНИЕ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ
Цель:
Отработать умения экспериментально исследовать свойства аминокислот и белков.
Опыт № 1 Нингидриновая проба.
Реакция характерна для α-аминокислот и их остатков. Растворы α- аминокислот и белков при нагревании с нингидрином приобретают фиолетовое окрашивание.
Методика эксперимента
В одну из двух пробирок прилить 3—5 капель 1 % раствора яичного белка, в другую 3—5 капель 0,1 % раствора глицина. В каждую пробирку наливают по 2—3 капли 0,1 % водного раствора нингидрина. Содержимое пробирок осторожно нагреть. Описать наблюдения, сделать выводы.
Наблюдения__________________________________________
Выводы______________________________________________
Опыт 2 Обнаружение серосодержащих α -аминокислот (реакция Фоля)
Реакция Фоля позволяет обнаружить в белке аминокислоты, содержащие слабосвязанную серу, например:
Методика эксперимента
В пробирку поместить 5—10 капель раствора яичного белка и вдвое больший объём 10 % раствора гидроксида натрия. Содержимое пробирки перемешать, нагреть до кипения (1 мин). К полученному щелочному раствору добавить 3—5 капель 10 % ацетата свинца и вновь прокипятить. Описать наблюдения.
Химизм процесса
При кипячении белка со щелочью α -содержащие аминокислоты образуют сульфид натрия.
Интенсивность окраски зависит от количества серосодержащих аминокислот в белке и от концентрации белка в растворе.
Наблюдения__________________________________________
Выводы______________________________________________
Опыт №3 Амфотерные свойства α-аминокислот
Амфотерность α-аминокислот обусловлена наличием в молекулах карбоксильной и аминогрупп, за счёт которых они образуют цвиттер-ион:
Методика эксперимента
а) В одну пробирку поместить 3—5 капель 1 % раствора –α-аланина и добавить по каплям 0,1 % раствор хлороводородной кислоты, подкрашенной конго.
б) Во вторую пробирку поместить 3-5 капель 1 % раствора α -аланина и по каплям добавить 0,1 % раствора гидроксцда натрия, подкрашенного фенолфталеином. Запасать наблюдения.
Химизм процесса
Наблюдения__________________________________________
Выводы______________________________________________
Опыт №4 Реакция глицина с формальдегидом
Реакция позволяет защитить аминогруппу и используется для количественного определения карбоксильных групп в α-аминокислотах путём кислотно-основного титрования.
Методика эксперимента
В пробирку поместить 5 капель 1 % раствора глицина и добавить 1-2 капли метилового красного и 3-5 капель раствора формалина. Наблюдается изменение окраски.
Химизм процесса
Блокируя аминогруппу формальдегид одновременно освобождает карбоксильную группу, которую далее можно анализировать методом титрования щелочью.
Наблюдения__________________________________________
Выводы______________________________________________
Опыт №5 Обнаружение пептидной связи и образование комплексной соли глицина
Пептидную или белковую макромолекулу формально можно представить как продукт поликонденсации α-аминокислот, протекающей с образованием пептидной (амидной) связи между мономерными звеньями.
Методика эксперимента
В две пробирки прилить 3—5 капель 1 % раствора сульфата меди, добавить по каплям 10 % раствор гидроксида натрия до образования осадка. Далее в одну из двух пробирок приливают по каплям 1 % раствор глицина, а во вторую — раствор белка до растворения.
