Опыт №6 Осаждение белка концентрированными минеральными кислотами (проба Геллера)
Методика эксперимента
В пробирку наливают 10-15 капель концентрированной азотной кислоты и, наклонив её под углом 45°, осторожно, по стенке пробирки, спускают из пипетки равный объём 1 % раствора белка. На границе двух слоёв жидкости образуется осадок белка в виде плёнки.
Сущность процесса
Белок при взаимодействии с концентрированной минеральной кислотой выпадает в осадок, вследствие нарушения вторичной, третичной и четвертичной структуры белка. Этот процесс называется денатурацией. Осаждение белка происходит под действием органических растворителей при кипячении.
Наблюдения__________________________________________
Выводы______________________________________________
Опыт №7 Разделение белковых фракций методом высаливания
Осаждение белка методом высаливания при различной степени насыщения и различном рН раствора используют для разделения белковых фракций при получении очищенных ферментативных и гормональных препаратов, а также для получения белков в кристаллическом состоянии.
Методика эксперимента
К 10 - 15 каплям соленого раствора яичного белка приливают равный объём насыщенного раствора сернокислого аммония (полунасыщенного). Выпадает осадок яичного глобулина. Через 5 минут осадок отфильтровывают и к фильтрату добавляют мелко истолчённый порошок сернокислого аммония до прекращения растворения соли, т.е. до полного насыщения.
Сущность процесса
Образуется осадок яичного альбумина, который всплывает наверх вследствие высокой плотности жидкости. При высаливании белок обычно не теряет присущих ему физико-химических и биологических свойств.
Наблюдения__________________________________________
Выводы______________________________________________
Опыт №8 Коацервация растворов биополимеров
При понижении растворимости полимера может произойти переход от полной взаимной растворимости до ограниченной растворимости с расслоением раствора на две фазы. Это явление называется коацервацией.
Методика эксперимента
Смешивают 10 мл 5 % раствора желатина с 5 % раствором картофельного крахмала. Предварительно пробирки с раствором нагреть на водяной бане при температуре (35—40°С) а наблюдать за изменением в течение 20—30 мин.
Наблюдения__________________________________________
Выводы______________________________________________
Опыт №9
Обнаружение белковых включений
в гистологическом препарате
Методика эксперимента
Вниманию студентов предлагается гистологический препарат тигроид в нервных волокнах спинного мозга. Среда окрашена по Нислю.
С использованием метода световой микроскопии изучить локализацию белковых включений в нервных волокнах.
Лабораторная работа № 6
Тема:
ИССЛЕДОВАНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЛИПИДОВ, РЕАКЦИИ ИХ ОБНАРУЖЕНИЯ И ВЫЯВЛЕНИЯ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ
Цель: Отработать умения изолировать липиды из биоматериала, экспериментально обнаруживать и характеризовать физико-химические свойства.
Опыт № 1
Обнаружение липидов в гистологических препаратах
В клетках липиды находятся в сложном окружении белков, нуклеиновых кислот, углеводов. Путём использования специфических реактивов, окрашивающих только липиды, можно выявить последние в гистологических препаратах. Для приготовления препарата ткань предварительно консервируют этанолом или формалином, затем уплотняют, пропитывая её парафином, смолами и другими способами. Затем получают тонкий срез микротомом, окрашивают специфическим реактивом. Для длительного хранения гистологический препарат помещают между предметным и покровным стеклом, герметизируют природными или синтетическими смолами.
Методика эксперимента
Вниманию студентов предлагаются готовьте гистологические препараты ткани печени и клеток жирной ткани. Для выявления липидов среды окрашены суданом чёрным В, при этом липиды имеют чёрно-серую окраску.