Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по теме «Химия и обмен углеводов».

2. Рассказ преподавателя.

Термином «фруктозамин» в клинической химии обозначают сумму гликозилированных белков сыворотки крови. Фруктозамин – продукт неферментативной реакции между моносахарами (обычно глюкозой) и некоторыми компонентами (Σ – аминогруппой лизина, аминогруппой Валина) белков крови.

Более 60% всех белков, реагирующих с глюкозой, представлено альбумином. Среди всех гликозилированных белков плазмы крови доминирует гликозилированный альбумин, длительность нахождения его в сосудистом русле составляет 20 суток. Определение содержания в крови фруктозамина является интегральным тестом, отражающим уровень гипергликемии за последние 3 недели.

В последнее время наиболее распространенным является колориметрический метод с использованием нитросинего тетразолия.

Метод определения содержания в крови фруктозамина по реакции с нитросиним тетразолием адаптирован к разным биохимическим полуавто- и автоанализаторам. Фирмой «Реанал» также предлагаются наборы реагентов для определния концентрации фруктозамина видоизмененным методом Джонсона. Метод основывается на принципе восстановления тетразолиевого красителя кетоаминовой группой. Расчет производят по стандарту. Для осуществления контроля качества используют предлагаемую этой фирмой контрольную сыворотку «Фруктозамин» («Нормальный контроль»).

Содержание фруктозамина может быть определено как в сыворотке, так и в плазме крови при применении в качестве антикоагулянта ЭДТА-Nа₂. Показана возможность определения его в капиллярной крови, взятой из пальца.

В плазме крови практически здоровых людей (норма) содержание фруктозамина обычно не превышает 285 мкмоль/л.

2. Методические указания к занятию. Рекомендации:

1. Внимательно изучите инструкцию.

2. Осмыслите ход выполнения лабораторной работы.

3. Соблюдайте меры предосторожности в работе.

3. Практическая часть.

1. Лабораторная работа № 1. Определение концентрации фруктозамина в крови.

ПРИНЦИП МЕТОДА: фруктозамин восстанавливает нитросиний тетразолий в щелочной среде, переводя его в формазон с максимумом поглощения при 530 нм.

Оборудование и реактивы: набор реагентов для определения фруктозамина (фирма «Реанал»), градуированные пипетки, штатив с пробирками; спектрофотометр.

Материал для исследования: сыворотка крови или капиллярная кровь из пальца.

Проведение анализа.

Реакция между фруктозамином (кровь) и нитросиним тетразолием протекает при рН 10,8 (в карбонатном буфере) и температуре 37ºС. Фотометрирование при длине волны 530 нм проводят через 15 минут после инкубирования. В качестве стандарта используют синтетический кетоамин, фруктозолейцин.

Приложение № 4.

Закрепление знаний, умений и навыков.