4.2. Определение температуры кипения

Для определения температуры кипения жидкость перегоняют в приборе для перегонки (рис. 17). Для индивидуального вещества собирают фракцию, кипящую в узком температурном интервале. Разность температур начала и конца перегонки не должна превышать 0,5 ^оС. При определении температуры кипения перегонку нужно вести медленно и лучше на банях, чтобы избежать перегрева. Кроме того, следует учитывать, что температура кипения зависит от давления.

4.3. Хроматография тонкослойная

Метод разделения, анализа и физико-химического исследования веществ. Метод основан на различии в скоростях движения концентрационных зон исследуемых компонентов, которые перемещаются в потоке подвижной фазы (элюента) вдоль слоя неподвижной фазы, причем исследуемые соединения распределены между обеими фазами. Обычно неподвижная фаза представляет собой сорбент с развитой поверхностью, а подвижная поток газа (пара) или жидкости. В зависимости от агрегатного состояния подвижной фазы различают: газовую хроматографию, жидкостную хроматографию. По геометрии сорбционного слоя неподвижной фазы различают колоночную и плоскослойную хроматографию. К плоскослойной относятся тонкослойная хроматография и хроматография на бумаге.

Тонкослойная хроматография (ТСХ) нашла широкое распространение в лабораторной практике как метод идентификации веществ. Основой ТСХ является различие скоростей перемещения компонентов анализируемой смеси в плоском тонком слое сорбента при движении по нему растворителя. Сорбентами служат силикагель, оксид алюминия, целлюлоза, полиамид. Элюентами - органические растворители разной полярности, их смеси между собой или с растворами кислот, щелочей и солей. Существует два способа приготовления тонкого слоя сорбента: закрепленный слой и незакрепленный слой. При приготовлении закрепленного слоя абсорбент наносится на стеклянную или металлическую пластинку вместе со связующим веществом. Для приготовления незакрепленного слоя пользуются стеклянными пластинками, на них насыпают слой сорбента и раскатывают его валиком. На расстояние 1,5-2 см от края пластинки проводят линию старта. На линию старта капилляром наносят капли раствора, при этом не должно нарушаться равномерное распределение сорбента на пластинке. На одну хроматографическую пластинку можно нанести несколько проб при условии, что расстояние между ними будет не менее 2 см. Содержание вещества в пробе должно находиться в пределах от 0,5 до 50 мкг. После нанесения образца на сорбент растворителю дают испариться. Далее пластинку помещают в камеру с элюентом. Пластинку с незакрепленным слоем располагают наклонно, угол ее наклона должен быть таким, чтобы сорбент не сползал с пластинки. Пластинки с закрепленным слоем могут находиться в почти вертикальном положении. На дно кюветы наливают элюент слоем в 1,5-2 см, так чтобы стартовая линия не соприкасалась с растворителем. Во время хроматографирования камера с пластиной должна быть герметично закрыта, чтобы препятствовать испарению растворителя. Когда в качестве элюента применяют смесь растворителей важно сохранять постоянное соотношение растворителей во все время процесса разделения.

Рис. 28. Схема разделения соединений в ТСХ

Положение пятен вещества после хроматографирования характеризуется значениями Rf (отношение фронтов):

Расстояние от точки старта до середины пятна хроматограммы

Rf = ----------------------------------------------------------------------

Расстояние, пройденное растворителем от линии старта (Hs)

Поскольку Rf зависит от качества сорбента и элюента, то необходимо проводить сравнение величины Rf испытуемого вещества со свидетелем, который наносится на ту же пластинку, Свидетелем служит чистое вещество, полученное другим методом.

Пластинку вынимают из хроматографической камеры, после того как элюент поднимется почти до верха пластины (рис. 28), и отмечают на ней расстояние, прошедшее растворителем. Если разделяют бесцветные вещества, после испарения элюента, пластинку помещают в среду легкосорбируемого вещества. Тогда чистый сорбент окрашивается, а вещества (пятна) остаются бесцветными. Иногда при таком проявлении хроматограммы окрашенными становятся как сорбент, так и вещества, но интенсивность окраски оказывается различной. Часто таким проявителем служит йод, то просушенную пластинку помещают в камеру с кристаллами иода и выдерживают там примерно 20 мин. Если опрыскивать хроматограмму концентрированной серной кислотой, в местах нахождения органических веществ образуются темные пятна. Если исследуемое вещество поглощает в УФ - области, то используют хроматографические пластины с содержанием флуоресцирующих веществ. Хроматограммы, полученные на таких пластинах, рассматривают в УФ - свете.