Шкала гемолиза

Номер пробирки	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
Процент гемолиза	10	20	30	40	50	60	70	80	90	100
Количество раствора со 100% гемолизом эритроцитов на дист. Н20 (мл)	0,2	0,4	0,6	0.8	1,0	1,2	1,4	1,6	1,8	2,0
Количество буферного раствора (мл)	1,8	1,6	1,4	1,2	1,0	0,8	0,6	0,4	0,2	-

Контроль качества. На предварительно построенной карте Шухарта откладываются стандартные значения показа­теля гемолитической активности при каждой постановке анализа.

7. Изучить метод определение СЗ компонента комплемента в сыворотках крови человека (записать в тетрадь, оформить протокол)

Система комплемента – одна из ведущих в неспецифической защите организма, играющая существенную роль в развитии иммунных и воспалительных реакций; развитии антиинфек­ционной резистентности. Среди многих компонентов ком­племента ключевым является активирование СЗ, который содержится в плазме в наибольшем количестве и его актива­ция приводит к образованию важнейшего продукта расщеп­ления СЗа и последующей активацией других компонентов комплемента. Концентрация СЗ у здоровых лиц составляет 0,8–1,8 г/л.

Принцип метода заключается в постановке реакции преципитации с использованием моноспецифических сыво­роток (РИД). При добав-лении сыворотки человека к смеси агара с антисывороткой против СЗ в ходе взаимной диффузии АГ и AT, образуется кольцо преципитации, диаметр которого за­висит от концентрации СЗ в сыворотке.

Техника постановки РИД:

1. В слое агара пробойником сделать лунки диаметром 2 мм на расстоянии 15 мм друг от друга;

2. В первые три лунки первого ряда пипеточным дозатором внести 8– 10 мкл стандартной сыворотки в разных разве­дениях. Например: неразведенная, разведенная 1:2, 1:4 (титр разведения указан в инструкции и на флаконе). В остальные лунки внести по 8–10 мкл исследуемые неразведенные образцы (сыворотки пациентов). Стекла с нане­сенными образцами выдерживаются 24 ч во влажной ка­мере при комнатной температуре. В реакции радиальной иммунодиффузии в геле образуются кольца преципи­тации, диаметр которых пропорционален количеству СЗ (г/л).

Содержание СЗ в исследуемых образцах определяется относительно контрольных разведений стандартов с извест­ной концентрацией СЗ (г/л).

Учет результатов:

- с помощью бинокулярной лупы (МБС-9 или 10) измеря­ется диаметр преципитата;

- строится калибровочная кривая зависимости диаметра преципитата от концентрации СЗ (г/л).

По оси абсцисс откладываются диаметры колец пре­ципитатов (мм), по оси ординат – соответствующие им кон­центрации СЗ (г/л) стандартной сыворотки в разных разведе­ниях: неразведенная, разведенная 1:2, 1:4. Полученные точки соединяют. Для определения СЗ в искомых образцах по оси абсцисс откладывают диаметры преципитатов исследуемых образцов, проводят линию до пересечения со стандартной калибровочной кривой, точку пересечения проецируют на ось ординат и определяют концентрацию СЗ в образцах.

Контроль качества. На предварительно построенной карте Шухарта откладываются контрольные значения СЗ (r/л) при каждой постановке анализа.

5. Подведение итогов занятия – 5 мин

Практическое занятие 3

ТЕМА. Антигены. Определение и характеристика вещества как антигена. Химическая природа антигена. Понятие чужеродности, антигенности, иммуногенности, специфичности антигена. Антигенная детерминанта (эпитоп), структура, роль в формировании специфичности антигена. Виды антигенной специфичности: видовая, групповая, типоспецифичность, гетероспецифичность и другие. Аутоантигены. Основные группы антигенов (природные, синтетические и др.).

Особенности антигенов бактерий, вирусов, других микроорганизмов и продуктов. Изоантигены человека: система антигенов эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и других клеток. Адъюванты, природа, характеристика. Гаптены. Тимусзависимые и тимуснезависимые антигены. Пути поступления антигена в организм. Принципы получения и очистки антигенов. Реакция агглютинации. Реакция преципитации

Цель занятия. Освоить понятие «антиген», изучить методы выявления антигенов