Возможные ошибки при проведении лимфоцитотоксического теста

№	Возможные ошибки	Причины ошибок и пути их устранения
1.	Взвесь выделенной популяции лимфоци­тов содержит высокий процент гранулоцитов, тромбоцитов или даже эритроцитов	1. Нередко возникает у пациентов с хрони­ческим лимфолейкозом. 2. Проверить рН цитратного гемостабилизатора 3. Контроль плотности полученного градиента 4. Для лизиса эритроцитов использо­вать раствор 3% уксусной кислоты
2.	Малое количество вы­деленных лимфоцитов (менее 2 х 106/мл)	1. Неправильное соотношение смесей (кровь-ЗФР – кровь-градиент плот­ности) 2.2. Большая скорость и длительность центрифугирования 3. Негоризонтальное положение про­бирок во время центрифугирования 4. Несоблюдение рН всех используе­мых растворов 5. Отсутствие контроля адекват-ности антикоагулянта 6. Длительное хранение крови и выде­ленной популяции (более 3 ч)
3.	Низкое значение ЦТИ	Те же + 1. Ошибки при приготовлении трипа­нового синего (рН физраствора, концен­трация красителя, фильтрация перед употреблением) 2. Ошибки математического расчета 3. Отсутствие химической чистоты используемых реагентов 4. Токсичность гепарина (должен быть без консервантов)

HLA- антигены идентифицируют двумя методами:

- в цитотоксическом тесте с лимфоцитами из периферической крови обследуемого и набором моноспецифических антисывороток к различным HLA- антигенам.

- в реакции смешанной культуры лимфоцитов. В основе реакции лежит феномен взаимной стимуляции синтеза ДНК в культуре лейкоцитов, различающихся по HLA- антигенам.

5. Определить совместимость антигенов донора и реципиента, если реципиент имеет генотип: А1, В8, DR3, A24, B57, DR5 (дать заключение, оформить протокол)

1. A1, B8, DR3, A29, B44, DR7

2. A3, B35, DR1, A24, B57, DR5

3. A3, B35, DR1, A29, B44, DR7

Заключение: донор № ........

6. Определить присутствие антигенов HLA в лимфотоксическом тесте (записать в тетрадь, оформить протокол

В лимфотоксическом тесте получены следующие результаты (таблица 9):

Таблица 9

Номер сыворотки	Специфичность антител	Баллы
1	A1	8
2	A1, A36	8
3	A1, A3, A11	6
4	A2	1
5	A2, A28	1
6	A3	8
7	A3, A1, B14	8
8	A23, A24	1
9	A24	1

Оценка результатов лимфотоксического теста (табл.10):

Таблица 10

Число погибших лимфоцитов, %	Балл	Результат
0–10	1	Отрицательный
11–20	2	Сомнительный
21–50	4	Слабо положительный
51–80	6	Положительный
81–100	8	Резко положительный

Заключение: на исследуемых клетках присутствуют антигены

HLA..........и ......

7. Определить относительный риск (ОР, θ) развития аутоиммунопатологии (записать в тетрадь, оформить протокол)

Известно следующее:

HLA⁺ A8 и HLA ^- A8 выявлялись у 15 и 10 больных с аутоиммунопатологией, соответственно. HLA⁺ A8 и HLA ^- A8 были обнаружены у 187 и 809 здоровых, соответственно.

Заключение: ОР ..................%