Ртга с типоспецифической сывороткой

№№ пробирок	1	2	3	4	5	6	7	8
							контроль
Разведения сыворотки	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	1:640	с-ки	вируса
Физиологический раствор	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25
Сыворотка типоспецифическая разв. 1:10 (титр 1:320)	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25 0,25	в дез. р-р 0,25 - 1:10
Аллантоисная жидкость 4 АЕ	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	-	0,25
Пластину встряхивают и оставляют на 30 мин при комнатной температуре
1% куриные эритроциты	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Учет реакции						-	-	-

Заключение: .........

6. Изучить реакцию торможения гемадсорбции (записать в тетрадь, оформить протокол)

Реакция торможения гемадсорбции основана на способности антител иммунной противовирусной сыворотки тормозить адсорбцию эритроцитов на клетках культуры ткани, зараженной вирусом. Реакцию применяют, как для типирования вируса, так и для обнаруже­ния антител. Эту реакцию применяют для вирусов, которые, реплицируясь в клетке не вызывают видимого цитопатического эффекта. Типирование ви­русов проводят с помощью типоспецифических иммунных сывороток. Цельную или слегка разведенную сыворотку смешивают с заражен­ной культурой клеток, предварительно удалив из нее питательную среду, помещают в термостат на 2 часа. Затем вносят в пробирки 0,4% взвесь эритроцитов, опять выдерживают в термостате, встряхивают и изучают под микроскопом с малым увеличением, обращая вниманием на эритроциты, прилипшие к клеткам. Если антитела соответствуют вирусу, на клетках не будет адсорбированных эритроцитов, произой­дет реакция нейтрализации вируса. Тип вируса определяют по той специфической антивирусной сыворотке, которая задерживает гемадсорбцию.

5. Подведение итогов занятия - 5 мин

Практическое занятие 12

Тема. Гиперчувствительность немедленного типа (В-зависимая аллергия), её механизмы. Аллергическая реакция I типа. Реакция II типа (IgE-независимые). Иммунопатологические состояния. Определение общего IgE в сыворотке крови. Определение аллергенспецифических IgE методом ИФА

Цель занятия. Освоить понятие ГНТ, механизм, клинические проявления. Изучить принцип постановки ИФА для определения IgE в сыворотках крови

Методические указания к практической работе

Продолжительность занятия: 3 академических часа (135 минут)

Место проведения занятия: учебная аудитория

Материально-техническое оснащение – таблицы, стенды, микроскопы, микропрепараты, вакцины

Хронометраж практического занятия:

1. Вводное слово преподавателя – 5 мин

2. Проверка исходного уровня знаний (тест-контроль) – 15 мин

3. Разбор теоретических вопросов по теме: «Гиперчувствитель- ность немедленного типа (В-зависимая аллергия), её механиз мы. Аллергическая реакция I типа. Реакция II типа (IgE- независимые)» – 80 мин

1. Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) (В-зависимая аллергия), клинические проявления.

2. Механизм сенсибилизации, десенсибилизации. Пассивная и активная анафилаксия

3. Основные механизмы синтеза IgE

4. Принцип метода ИФА по определению специфических IgE.

4. Выполнение практической работы – 30 мин