1.2 Стандартні еритроцити підгруп 0(I), a(II), b(III)

Стандартні еритроцити готують із крові донорів (див. Інструкцію щодо забору і обліку крові, яку отримують від донорів малими дозами для приготування стандартних еритроцитів). Кров від донорів беруть у кількості 2 - 4 мл у пробірку, що містить 0,25 - 0,50 мл 3,8% або 5,0% розчину натрію цитрату, або гепарин, або консервант крові. Далі в пробірку (на 10,0 мл) до верху доливають 0,9% розчин натрію хлориду, перемішують її вміст і центрифугують протягом 5 хв. при швидкості обертання ротора 1500 об./хв., або відстоюють до повного осадження еритроцитів. Надосад зливають, додають 0,9% розчин натрію хлориду до початкового об'єму крові і використовують як стандарт при визначенні групи крові перехресним методом. Стандартні еритроцити зберігають у холодильнику при температурі + 6( +- 2) град. C. Термін зберігання - до 3 діб.

Стандартні тест-еритроцити можна одержати в готовому вигляді в закладах служби крові, які виготовляють ці стандарти.

1.3. Моноклональні антитіла анти-A, анти-B, анти-AB.

1.4. Ізотонічний (0,9%) розчин натрію хлориду.

1.5. Білі порцелянові або інші пластини, предметні скельця з змочуваною поверхнею.

1.6. 3,8% - 5% розчин натрію цитрату, гепарин, консервант крові.

1.7. Пробірки.

1.8. Піпетки.

1.9. Скляні палички.

1.10. Вата гігроскопічна.

2. Застосування стандартних сироваток і стандартних еритроцитів для визначення груп крові за системою AB0

2.1. Техніка визначення груп крові за допомогою стандартних сироваток

Визначення проводять у приміщенні з задовільним освітленням при температурі від +15 до +25 град. C. Використовують цільну кров, відмиті еритроцити, еритроцити в плазмі, сироватці або в 0,9% розчині натрію хлориду. У хворих на анемію кров стабілізують гепарином.

• 2.1.1. Позначити на площині групу крові зліва направо "0", "A", "B".

• 2.1.2. Під відповідними позначками нанести по одній великій краплі (0,1 мл) кожної сироватки двох серій.

• 2.1.3. Поряд з кожною сироваткою нанести по 1 маленькій краплі (0,01 мл) досліджуваної крові (еритроцитів).

• 2.1.4. Змішати окремими скляними паличками кожну краплю крові (еритроцитів) з відповідною сироваткою.

• 2.1.5. Змішавши всі краплі, пластину погойдують, потім на 1 - 2 хв. залишають у спокої і знову погойдують. Спостереження за ходом реакції проводять не менше як 5 хв., хоча аглютинація починається вже протягом перших 10 - 30 с. Спостереження необхідно продовжувати далі - до 5 хв., тому що можлива пізня аглютинація, наприклад, з еритроцитами групи A2.

• 2.1.6. Через 3 - 4 хв. до крапель суміші сироватки з еритроцитами, де відбулась аглютинація, додають по 1 краплі (0,05 мл) 0,9% розчину натрію хлориду і продовжують спостерігати до 5 хв. при періодичному погойдуванні пластини.

2.2. Трактування результатів реакції під час визначення груп крові за допомогою стандартних сироваток

Реакція ізогемаглютинації в кожній краплі може бути позитивною і негативною.

У разі позитивної реакції (звичайно протягом перших 10 - 30 сек. від початку змішування) в суміші з'являються видимі неозброєним оком дрібні червоні зернятка (аглютинати), які складаються з склеєних еритроцитів. Дрібні зернятка поступово склеюються в більш великі зерна, а інколи - в пластівці неправильної форми, в результаті чого сироватка зовсім або частково знебарвлюється.

У разі негативної реакції рідина весь час (5 хв.) залишається рівномірно забарвленою і в ній не спостерігається зернистості (аглютинатів).

Результати реакції в краплях з сироватками однієї і тієї ж групи (двох серій) мають співпадати.

Результати реакцій з сироватками трьох груп: 0(I), A(II) і B(III) можуть дати чотири різні комбінації (табл. 1).

Таблиця 1. Трактування результатів реакції при визначенні груп крові за допомогою алоімунних стандартних групоспецифічних сироваток

----------------------------------------------------------

| Результати реакції з сироватками | Досліджувана кров |

|------------------------------------| належить до групи |

| 0(I) | А(II) | B(III) | |

|---------+-----------+--------------+-------------------|

| - | - | - | 0(I) |

|---------+-----------+--------------+-------------------|

| + | - | + | A(II) |

|---------+-----------+--------------+-------------------|

| + | + | - | B(III) |

|---------+-----------+--------------+-------------------|

| + | + | + | AB(IV) |

----------------------------------------------------------