Бактериологический метод.

Материал для исследования: кровь, фекальные массы. Кровь берется из локтевой вены в количестве 10-15 мл до начала антибактериальной терапии.

1-й этап: посев венозной крови на среду обогащения Рапопорта (МПБ, глюкоза, желчь) + индикатор.

2-й этап:

а) учет среды Рапопорта (покраснение среды без газа в поплавке -возбудитель брюшного тифа, покраснение с газом в поплавке -возбудители паратифов или сальмонеллезов);

б) микроскопия роста;

в) пересев на дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина или Плоскирева;

3-й этап:

а) обнаружение бесцветных колоний на этих средах;

б) микроскопия подозрительных колоний (бесцветные, т.к. не ферментируют лактозу)

в) пересев на среду Олькеницкого или Кливлера.

4-й этап:

а) учет роста на среде Олькеницкого или Кливлера;

б) определение чистоты выделенной культуры;

в) установление антигенной структуры. Сначала в РА на стекле с монорецепторными сыворотками к О-антигенам, затем в такой же реакции с сыворотками к специфическим антигенам (в пределах данной группы);

г) определение дополнительных биохимических и морфологических свойств (разложение индола, подвижность);

д) определение чувствительности к поливалентным видоспецифическим бактериофагам;

е) определение чувствительности к антибиотикам (методом бумажных дисков, серийных разведений или Е-тестом – аналогом диско-диффузионного метода)

Серологическая диагностика.

Иммунитет стойкий, повторные заболевания редки. Появляются сначала IgM, затем IgG, на 5-6-ой день – геммаглютинины.

В начале болезни в сыворотке определяются О-АТ. В разгар много О-АТ и Н-АТ диагностического титра. Можно выявить Vi-АТ. В конце болезни много Н-АТ и мало О-АТ. К выздоровлению титр О-АТ падает. Если человек переболел брюшным тифом, в сыворотке остаются Н-АТ.

Реакция Видаля.

Ставится с четырьмя диагностикумами. Готовят разведения сыворотки от 1/50 до 1/800, контроль сыворотки и АГ. В 1-й ряд добавляют тифозный диагностикум для выявления О-АТ, во 2-й – тифозный Н_D- диагностикум, в 3-й – паратифозный А диагностикум, в 4-й – паратифозный В диагностикум. Учет РА. Диагностический титр 1:200.

96. Возбудитель дизентерии.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, семейство Enterobacteriaceae, р. Shigella, в. S. dysenteriae, S. flexieri, S. boydii, S. sonnei.

2. Морфология: Гр-, палочка, нет жгутиков, есть пили, есть капсула, споронеобразующие, подвижны.

3. Тип питания: хемоорганотроф, ФАН.

4. Биологические свойства:

а) нетребовательны к питательным средам

б) колонии двух типов (R- и S-)

в) ферментируют сахара до кислот.

5. АГ структура: О-АГ, К-АГ (шигеллы Флекснера). Есть перекрестно-реагирующие АГ с другими энтеробактериями.

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) адгезины (микрокапсула, пили)

б) инвазины (муциназа, третья секреторная система – также предотвращает переваривание шигелл внутри клеток)

в) эндотоксин (ЛПС) – диарея, поражение НС и ССС.

г) цитотоксин – поражает энтероциты, нейроны, кл миокарда.

Адгезия на энтероцитах толстой кишки  инвазия в энтероциты  фагоцитоз макрофагами в подслизистом слое  гибель макрофагов, выделение цитокинов  воспалительный процесс в подслизистой  нарушение межклеточных контактов  попадание МБ в активированные ими энтероциты  распространение по соседним клеткам  разрушение слизистой с образованием язв, продукция токсинов.

7. Клинические проявления: диарея с примесью крови и гноя, общие признаки интоксикации.

8. Иммунитет: местный (микрофаги, Т—лимфоциты, sIgA) и общий. Постинфекционный иммунитет непродолжительный видо- и типоспецифический.

9. Эпидемиология. Источник – больные люди и бактерионосители. ОПЗ – алиментарный, иногда контактно-бытовой. Быстро изменяют чувствительность к разным антибактериальным средствам в зависимости от частоты их применения в том или ином регионе

10. Профилактика: специфическая – гретые, формалинизированные, химические вакцины – не решили проблему.

11. Лечение: Фторхинолоны, реже АБ.

12. Диагностика:

Материал для исследования: испражнения, сыворотка крови.

Бактериологический метод.

1-ый этап: посев на дифференциально-диагностические среды (Плоскирева и т.д.). Оценка характера и цвета колоний, мазок по Гр, РА на стекле со смесями дизентерийных сывороток.

2-ой этап: пересев бесцветных колоний на среду Ресселя или трехсахарную среду. Мазок по Гр, регистрация изменений цвета среды. Посев на пестрый ряд. РА со смесями дизентерийных сывороток, затем – с видовыми и типовыми сыворотками.

Серодиагностика.

РА по типу реакции Видаля с дизентерийными диагностикумами, РПГА с эритроцитарными диагностикумами.

97. Возбудители клебсиеллезов.

1. Классификация: ФАН палочки, с.Enterobacteriaceae, р. Klebsiella, в. K.pneumoniae, K. rhinoscleromatis, K.ozaenae

2. Морфология: Гр-, короткие толстые палочки, жгутиков нет, имеют выраженную капсулу, споронеобразующие, неподвижны

3. Тип питания: хемоорганотрофы

4. Биологические свойства:

а) растут на простых средах

б) ферментируют гл с кислотой и газом, сорбит.

5. АГ структура: К-АГ, О-АГ.

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) полисахаридная капсула

б) адгезины (пили, поверхностные белки адгезии)

в) инвазины (белки-порины)

г) сидерофорная система (хелаторы железа аэробактин, энтеробактин) – связывает ионы железа

д) система секреции 3-его типа

е) термо- и кислотостабильный токсин – активирует гуанилатциклазу

ж) термолабильный токсин (цитотоксин) – опосредует проникновение в кровоток

з) β-лактамаза – устойчивость к лактамным АБ

Адгезия, размножение и колонизация энтероцитов  секреция токсинов, обеспечивающих разнообразные патологии.

7. Клинические проявления:

I. К.pneumoniae: долевые пневмонии (деструкция легочной паренхимы с формированием абсцессов, эмпием и плевральных спаек), госпитальные бронхиты, бронхопневмонии. Возможны вторичные поражения мочевыводящих путей, мозговых оболочек, суставов, глаз, бактериемии и септикопиемии.

II. K.ozaenae: озена (хронический атрофический зловонный насморк): атрофия слизистой носа и подлежащего костного скелета, образование плотных корок, неприятный запах из носа, потеря обоняния.

III. K. rhinoscleromatis: риносклерома (хроническое гранулематозное заболевание дыхательных путей): нарушение дыхания  истощение.

8. Иммунитет: ГИО (АТ не обладают протективными свойствами), КИО, ГЗТ.

9. Эпидемиология. Источник – больные и носители. ОПЗ – аэрозольно. Резистентны к факторам окружающей среды, размножаются в холодильнике, чувствительны к растворам обычных дезинфектантов.

10. Профилактика: специфическая вакцинопрофилактика не разработана.

11. Лечение: цефалоспорины третьего поколения.

12. Диагностика:

Лабораторная диагностика проводится двумя методами: бактериологический

и серологический.

Питательные среды:

1. Дифференциально-диагностическая среда - ЛБТА (лактозобромтимоловый агар с пенициллином). Содержит МПА+ лактоза+бромтимоловый синий. К.склеромы, не разлагающая лактозу, дает колонии цвета среды, К.пневмонии - желтые, К.озены - либо желтые, либо цвета среды.

2. Модифицированная среда Ресселя кроме глюкозы (в столбике) и лактозы (в скосе) содержит индикатор бромтимоловый синий, соль Мора и гипосульфит (на H₂S). К. склеромы дает пожелтение только столбика, К. пневмонии - пожелтение и разрыв всей среды, К. озены - различные варианты.

3. Среда Симмонса для утилизации цитрата натрия (индикатор бромтимоловый синий). В положительных случаях появляется рост и среда синеет, в отрицательных случаях роста нет и среда не изменяется.

4. Среда с малонатом натрия (индикатор бромтимоловый синий). При утилизации малоната - среда интенсивно синего цвета, отрицательная реакция - среда желтая.

Бактериологическая диагностика.

Материал для исследования: содержимое носа, глотки, носоглотки.

Схема исследования:

1-й этап - посев материала петлей или тампоном на ЛБТА, или на пенициллиновый агар;

2-й этап:

а) учет роста на чашках. Колонии клебсиелл - крупные, выпуклые, влажные, блестящие. На ЛБТА цвет колоний зависит от вида клебсиелл;

б) посев колоний на модифицированную среду Ресселя или косой агар;

3-й этап - идентификация выделенной культуры:

а) мазок по Граму;

б) препарат по Гинса-Бурри;

в) определение биохимических свойств (см. таблицу); г) определение антигенной формулы с помощью клебсиеллезных сывороток О и К (р. агглютинации на стекле, РА в пробирках, РИФ).

Серологическая диагностика: используют РСК и РПГА со склеромным и

озенозным диагностикумами.