II. Культуральный (бактериологический) метод:

1 этап: материал (не позднее 1-2 часов с момента забора) засевают на кровяной агар, и культивируют сутки при температуре 37°С;

2 этап: отбор подозрительных колонии, дающих а-гемолиз, микроскопирование (окраска по Граму, на капсулу), отсев в сывороточный бульон;

3 этап: определяют чистоту культуры (окраска по Гр).

Идентификация по морфологическим, серологическим (РА на стекле с поливалентной противокапсульной сывороткой), культуральным, биологическим свойствам. Последние проводят путем посева в среду с оптохином (нет роста), в желчный бульон (лизис), внутрибрюшинного заражения мышей (гибель). При необходимости доказывают этиологическую значимость пневмококка. Определяют также чувствительность к антибиотикам.

Культуральный метод является ведущим методом диагностики, так как он ранний, точный, чувствительный и позволяет выбрать адекватное этиотропное лечение.

III. Серологический метод: определение противокапсульных АТ и их динамики в сыворотке крови с помощью РНИФ (с аутоштаммами), РСК и РИГА (с эталонными штаммами пневмококка). Чаще используют при хронических формах инфекции. Применение метода ограничивается более поздними сроками получения результата и отсутствием готовых диагностикумов.

IV. Биологический метод: внутрибрюшинное заражение белых мышей исследуемым материалом (чаще мокротой). Погибших мышей вскрывают, делают мазки-отпечатки, посевы крови и органов на кровяной агар с последующей идентификацией возбудителя. Метод вспомогательный, ограничивается трудоемкостью, наличием в материале других видов микроорганизмов, патогенных для мышей, низкой чувствительностью мышей к некоторым сероварам пневмококка.

89. Возбудитель менингококковых инфекций.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. I. Кокки, c. Neisseriaceae, р. Neisseria, N. gonorrhoeae, N. meningitidis, N Sicca, N. flava.

2. Морфология: Гр-, диплококки, сферическая или овоидная форма, есть микрокапсула, жгутиков нет, спор не образует, неподвижен.

3. Тип питания: хемоорганотроф, аэроб.

4. Биологические свойства:

а) требовательны к питательным средам

б) растет на нормальной сыворотке или дефибринированнной крови

в) рост стимулируется повышенной концентрацией СО₂ и повышенной влажностью

г) слабая сахаролитическая активность, расщепляют гл и мальтозу до кислоты

5. АГ структура: К-АГ, белки наружной мембраны КС.

6. Факторы патогенности и патогенез:

1) адгезины (пили, белки наружной мембраны КС)

2) инвазины (нейраминидаза, гиалуронидаза)

3) антифагоцитарные (капсульные полисахариды)

4) эндотоксин (ЛПС) – вызывает эндотоксический шок, снижает фракцию комплемента.

Попадание на слизистые носоглотки  развитию воспаления (10-15%)  массивная бактериемия с интенсивным распадом микробов и токсинемией (эндотоксиновый удар  расстройства гемодинамики) проникновение в мозговые оболочки  развитие  менингита или менингоэнцефалита.

7. Клинические проявления: выделяют: локализованные формы (менингококконосительство и острый назофарингит); генерализованные формы (менингококкемия, менингит, менингоэнцефалит и смешанная);редкие формы (эндокардит, полиартрит, пневмония, иридоциклит). 8. Иммунитет: при генерализованных формах напряженный, в основном ГИО (АТ от иммунизированной матери передаются плоду)

9. Эпидемиология. Антропонозная инфекция. Источник – больной или носитель. ОПЗ – аэрозольно.

10. Профилактика: менингококковая химическая вакцина

11. Лечение: АБ (пенициллины, цефалоспорины)

12. Диагностика:

Материалы для исследования: ликвор, слизь, из зева и носа, кровь, гной, экссудат.

1. Бактериоскопия: Мазок по Гр. Люминесцентная микроскопия мазков, обработанных флюоресцирующей сыворотка.

2. Бактериологическое исследование:

1-ый этап: посев на сывороточный питательный агар, оценка характера колоний, мазок по Гр.

2-ой этап: посев на сывороточный питательный агар для выделения чистой культуры. Идентификация МБ: посев на «пестрый ряд», серотипирование, определение чувствительности к АБ.

Материал: ликвор. Обнаружение АГ в реакции встречного иммуноэлектрофореза с преципитирующими антименингококковыми сыворотками.

Материал: кровь. Серодиагностика в РПГА с парными сыворотками.

90. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. I. Кокки, c. Neisseriaceae, р. Neisseria, N. gonorrhoeae.

2. Морфология: Гр-, диплококки, бобовидная форма (кофейные зерна), есть микрокапсула, есть пили, жгутиков не имеют, спор не образуют.

3. Тип питания: хемоорганотроф

4. Биологические свойства:

а) культивируются на средах с белком, лучше при повышенном содержании СО₂.

б) ферментируют только гл

5. АГ структура: белки наружной мембраны, АГ пилей

6. Факторы патогенности и патогенез:

1) адгезины (пили и белки наружной мембраны КС)

2) эндотоксин (липоолигосахарид)

3) антифагоцитарные факторы (капсулярные полисахариды)

  Адгезия на эпителии уретры, шейке матки, прямой кишке, коньюктиве глаза, сперматозоидах, простейших  размножение на поверхности эпителия и его деструкция  (инвазия в эпителий)  попадание в поверхностные лимфатические и кровеносные сосуды, выделение эндотоксина.

7. Клинические проявления: от бессимптомного воспалительного процесса на слизистых оболочках до гонорейного сепсиса и гнойного менингита. Острый уретрит, цервицит, поражение у женщин труб и яичников, у мужчин – семенных пузырьков и предстательной железы. Возможно поражение прямой кишки, миндалин, бленнорея новорожденных.

8. Иммунитет: ГИО (АТ не протективны). Возможны реинфекции, рецидивы, переходы заболевания в хроническую форму.

9. Эпидемиология. Источник – ч-к, больной или носитель. ОПЗ – половой, возможен контактно-бытовой, вертикальный (от матери плоду)

10. Профилактика: вакцинопрофилактика не проводится. Для предупреждения бленнореи новорожденным закапывают раствор АБ на коньюктиву глаза

11. Лечение: АБ (пенициллины, цефалоспорины)

12. Диагностика:

Материал: гной из мочеполовых органов, осадок мочи, гной из конъюктивы глаза при бленнорее.

1. Бактериоскопия: мазок по Гр и метиленовым синим.

2. Бактериологическое исследование:

1-ый этап: посев на сывороточный питательный агар и КДС в чашку Петри. Учет характера колоний, мазок по Гр.

2-ой этап: пересев на сывороточный питательный агар для выделения чистой культуры. Идентификация МБ: посев на «пестрый ряд», определение чувствительности к АБ.

Материал: сыворотка крови. Серодиагностика в реакциях РСК.

91. Общая характеристика ОКИ. Классификация и общая характеристика семейства энтеробактерий.

ОКИ – многочисленная полиэтиологическая группа острых заболеваний человека с преимущественной локализацией патологического процесса в кишечнике.

Возбудители ОКИ:

1. Бактерии: представители энтеробактерий, семейства вибрионов (холерный), кампилобактерий, микрококков, неспорообразующих анаэробных бактерий.

2. Вирусы: ротавирусы, вирус гепатита А.

3. Простейшие: дизенерийная амеба, балантидий, лямблия.

4. Грибы: род Кандида.

Основные черты ОКИ:

1. Повсеместное распространение.

2. Высокая заболеваемость.

3. Высокая смертность.

4. ОКИ мало регулируются человеком.

5. Заболеваемость ОКИ и смертность связана с социальными условиями жизни.

6. Большие экономические потери.

Классификация энтеробактерий:

• p. Escherichia, в. E. coli

• p. Salmonella, в. S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B, S. enteritidis, S. typhimurium, S. anatum, S. infantis, S. Haifa, S.panama

• p. Shigella, в. S. dysenteriae, S. sonnei, S. flexneri, S. boydii

• p. Klebsiella, в. K. pneumoniae, K. rhinoscuromatis, K. ozaenae

• p. Proteus, в. P. vulgaris, P. mirabilis

• p. Yersinea, Y. pestis, Y. enterocolitica, Y. psevdotuberculosis

условно-патогенные токсико-пищевые инфекции:

• p. Citrobacter

• p. Enterobacter

• p. Hafnia

Общая характеристика энтеробактерий.

1. Главное место обитания – кишечник человека и животных. При определенных условиях могут покидать данный биотоп и вызывать другие заболевания.

2. Сохраняют жизнеспособность во внешней среде на протяжении определенного срока.

3. Гр-, ФАН, мезофиллы, оптимум роста 37°С. Хорошо растут на простых питательных средах. Формируют R- или S-формы колоний.

4. Биохимические свойства вариабельны у разных родов и видов. Различия используются для классификации энтеробактерий. Чем менее выражены биохимические свойства, тем более патогенен.

5. АГ структура:

а) О-АГ – ЛПС КС, термостабилен, имеется у всех представителей семейства (эндотоксин)

б) Н-АГ – есть у подвижных видов, белковый, термолабильный, обладает высокой иммуногенностью, но не токсичен.

в) К-АГ – гетерополисахарид, АГ структура используется для систематики энтеробактерий для выделения родов, видов, сероваров, субсероваров.

6. Патогенность: 1) облигатно-патогенные – способны вызывать заболевания у здорового человека 2) условно-патогенные – вызывают заболевания при попадании в большом количестве в нехарактерный для них биотоп и у лиц со сниженным иммунитетом 3) непатогенные.

Общие принципы диагностики острых кишечных инфекций.

К ОКИ относятся: эшерихиозы, вызываемые условно-патогенными и патогенными (энтеропатогенными, энтерогеморрагическими, энтероинвазивными и энтеротоксигенными) кишечными палочками, брюшной тиф, паратифы А и Б, сальмонеллезы, дизентерия, кишечные клебсиеллезы и кишечные иерсиниозы.

Методы их микробиологической диагностики включают следующие принципы:

1. Микроскопический метод диагностики, как правило, не приемлем, так как патогенные и непатогенные энтеробактерии имеют общие морфологические характеристики.

2. Для диагностики применяют бактериологический и серологический методы. Выбор метода диагностики зависит от клинических проявлений, места локализации возбудителя и фазы патогенеза болезни

Бактериологическая диагностика.

1. Забор материала. Характер материала зависит от первичной или вторичной локализации микроба-возбудителя. Если материалом служат испражнения, что чаще всего бывает, то их берут до начала или после суточного перерыва в антибактериальной терапии. Материал лучше забирать ректальной трубкой, тампоном со стерильной пеленки или стерильной пергаментной бумаги, специальным устройством для забора фекалий (ни в коем случае не допуская его контакта с дезинфектантами). Если материалом служит кровь, то забирают 10,0 мл крови из вены локтевого сгиба.

2. Транспортировка материала осуществляется медицинским работником в системе "стекло, металл" в течение не более трех часов после его забора или в консерванте с сопровождающими документами.

3. Питательные среды, используемые для бактериологического исследования, можно подразделить на три группы:

а) среды обогащения, создающие условия преимущественного размножения выделяемого возбудителя и основанные либо на принципе наличия в среде факторов активации роста данного микроба, либо на принципе подавления роста сопутствующих микробов-антагонистов. Первой группе соответствует среда Рапопорт, второй - селенитовая, магниевая, Мюллера, с пенициллином и т.д.;

б) средь/ дифференциально-диагностические - плотные питательные среды, содержащие дифференцирующий углевод - лактозу и индикатор. Кишечные палочки, разлагающие лактозу (лактозоположительные), растут в виде окрашенных колоний в зависимости от типа среды - в малиново-красный и розовый (среда Эндо, Плоскирева) или темно-синий (среда Левина) цвет. Клебсиеллы пневмонии разлагают лактозу в среде с индикатором бромтимоловым синим и образуют колонии желтого цвета, в то время как колонии лактозоотрицательных биоваров формируют колонии цвета среды. Сальмонеллы и шигеллы на средах Эндо, Левина, Плоскирева также не разлагают лактозу и дают бесцветные колонии;

в) среды накопления чистой культуры. Чаще применяется среда Олькеницкого (трехсахарный агар). Она состоит из столбика, скошенной части и включает лактозу, глюкозу и сахарозу, индикатор, реагенты для определения сероводорода и уреазы. Посев производят уколом в столбик и штрихом по поверхности скошенной части. При росте микробов глюкоза лучше разлагается в столбике, лактоза - на скосе, в результате чего дифференцированно меняется цвет среды. При образовании газа - формируются пузырьки и разрывы в среде, при продукции сероводорода - наблюдается почернение по ходу укола, при продукции уреазы - изменение цвета среды на оранжевый.

4. Идентификация выделенных культур основана на определении:

• общего для семейства признака - грам- палочки;

• наличия капсулы (у клебсиелл);

• цвета колоний на чашечных средах;

• подвижности (сальмонеллы и эшерихии подвижны, шигеллы и клебсиеллы

• неподвижны);

• биохимических свойств;

• антигенной структуры;

• чувствительности к антибактериальным препаратам;

• чувствительности к бактериофагам.

Антигенную структуру определяют по предварительному установлению

серогруппы, чаще с монорецепторными адсорбированными сыворотками,

а затем серовара тоже с адсорбированными сыворотками.

Серологическая диагностика: начинается с получения сывороток от

больных. В них обнаруживаются антитела в реакции агглютинации,

гемагглютинации, латекс-агглютинации или РСК. Диагноз основан на

обнаружении антител в диагностическом титре или нарастании титра антител

в динамике болезни.

92. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, семейство Enterobacteriaceae, р. Escherichia, E.coli

2. Морфология: Гр-, палочка, иногда капсула или микрокапсула, иногда есть перитрихии, подвижна или неподвижна, споронеобразующая

3. Тип питания: хемоорганотроф.

4. Биологические свойства:

а) хорошо растут на простых питательных средах

б) ферментируют гл и лактозу до кислоты и газа

5. АГ структура: О-антиген, К-антиген и Н-антиген.

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) адгезины (капсула – также угнетает фагоцитоз, пили)

б) третья секреторная система

в) ферменты инвазии

г) эндотоксин (ЛПС)

д) энтеротоксин - активирует аденилатциклазу, приводит к водянистой диарее.

е) экзотоксины (шигоподобный, холероподобный)

ж)нуклеопротеиды – вызывают повышенную чувствительность к МБ

Адгезия на энтероцитах  активный захват энтероцитами и их колонизация, фагоцитоз пейеровыми бляшками и разрушение лимфоцитов  изменению функции энтероцитов, продукция гемолизинов, энтеротоксинов  увеличение кол-ва цАМФ (водянистая диарея), иногда развитие колитов.

7. Клинические проявления:

а) эндогенные инфекции – гнойно-воспалительные процессов различных локализации (пиелиты, циститы, холециститы).

б) ОКИ: ЭПКП – сальмонеллоподобные инфекции, ЭТКП – холероподобные инфекции, ЭИКП – дизентериеподобные инфекции, ЭГКП – геморрагический колит.

8. Иммунитет: ГИО (АТ не обладает протективным действием).

9. Эпидемиология. Источник – больные люди или бактерионосители. ОПЗ – алиментарный. Используется как санитарный показатель для оценки загрязнений (коли-титр, коли-индекс). Устойчивы во внешней среде, месяцами сохраняются в почве, воде, испражнениях.

10. Профилактика: специфической нет. Неспецифическая: выявление больных и носителей, их изоляция, лечение.

11. Лечение: бифидобактерин, лактобактерин – для детей раннего возраста, АБ (хлорамфеникол, цефалоспорины, фторхинолон).

12. Диагностика:

Цель: выделение чистой культуры и отличие ее от УПН.

Материал для исследования: фекальные массы.

Бактериологический метод:

1-й этап - посев на среду Эндо (Левина);

2-й этап:

а) обнаружение окрашенных колоний, микроскопия их по Граму;

б) РА на стекле со смесью сывороток к патогенным серогруппам (предварительная дифференциация патогенных эшерихии от условнопатогенных)

в) отсев положительно реагирующей в РА колонии на среду Олькеницкого;

3-й этап:

а) учет изменения среды Олькеницкого (посинение и разрыв всей среды);

б) определение чистоты выделенной культуры;

в) определение серовара патогенной эшерихии (путем постановки РА с отдельными ОК-сыворотками на стекле и в пробирках с живой (определение К-антигена) и убитой кипячением (определение О-антигена) культурой;

г) проба на индол, подвижность и чувствительность к антибиотикам.

Серологический метод - постановка РА с сывороткой больного (на 2-ой неделе заболевания).

93. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, семейство Enterobacteriaceae, р. Salmonella, в. S. typhi, S. parathyphi A, S. parathyphi B, S. typhimurium, S. enteritis, S. haifa, S. panama, S. anatuma

2. Морфология: Гр-, палочка, мелкая, есть микрокапсула, перитрихии, споронеобразующая, подвижна

3. Тип питания: хемоорганотроф

4. Биологические свойства:

а) лактозоотрицательные (диагностический признак)

б) ферментируют сахара до кислоты и газа (кроме S. thyphi)

в) протеолитические свойства слабо выражены

5. АГ структура: О- (ЛПС), Н- (в двух фазах – специфической и не специфической), иногда Vi-AГ (особый К-АГ).

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) капсула, пили

б) третья секреторная система – препятствует слиянию фагосом и лизосом в макрофагах

в) эндотоксин (ЛПС) – индукция лихорадки, нарушение микроциркуляции

г) холероподобный энтеротоксин – активация аденилатциклазы, водянистая диарея

Адгезия на энтероцитах и их колонизация  проникают в макрофаги  размножение  бактериемия (возможно интенсивное разрушение бактерий с высвобождением энтеротоксина и эндотоксина).