2. Иммуноферментный и радиоиммунный анализ: сущность, условия, направления, способы постановки и учета, диагностическое значение.

Иммуноферментный анализ. Этот метод для выявления,как АГ с помощью соответсвующих им АТ, конъюгированных с ферментом, так и АТ сыворотки крови больного.

Для поставноки р-иинеобх:

А)сыворотка кр(исследуемая сыв,антиглобулиноваясыв.,меченная ферментом)

Б)АГ(очищ-ийАгвируса,бактериальный АГ);

В) субстрат/хромоген для фермента

Способ постановки:

Реакцию ставят в лунках полистероловых пластин. Разведение сыворотки проводят микропипетками.

При выявлении АГ к нему добавляют соответствующие АТ, конъюгированы ферментом-меткой. После соединения АГ с меченной ферментом иммунной сыворотки в смесь добавляют субстрат-хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяет цвет реакции. Результат учитывают спектрофотометрически.

Применяют для бактериальных, паразитарных и вирусных болезней(ВИЧ, гепатит В…)

Радиоиммунный анализ.Радиоиммунный анализ (РИА) является чрезвычайно чувствительным методом, который мо­жет быть использован для количественного определения лю­бого антигена. Чувствительность метода позволяет выявлять незначительные количества антигена. Основан на р-ии АГ+АТ ,с применением АГ и Ат ,меченных радиоактивными изотопами(радионуклидами). После их взамимодействия определяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (b- и гамма излвуч-я). Интенсивность излуч-я прямо пропорц. кол-ву связавшихся молекул АГ+АТ.

Более современный метод — твердофазный РИА, при кото­ром специфические антитела фиксируются на твердой фазе, к ним добавляется исследуемый антиген, а затем меченый стан­дартный антиген. Определение связанной и несвязанной метки позволяет построить калибровочную кривую и определить ко­личество исследуемого антигена.

РИА широко применяют для количественного определения

различных веществ: гормонов (инсулина, гормона роста, адренокортикотропного гормона, трийодтиронина, тироксина, эст­рогена), белков сыворотки крови (IgE, а-фетопротеина и др.), метаболитов (фолиевой кислоты, циклических нуклеотидов и др.), лекарственных препаратов (дигоксина, дигитоксина, мор­фина), микробных антигенов (HBsAg).

Билет №41

1. Вирусы. Ультраструктура и химический состав. Принципы классификации.

Вирусы (Vira) – паратрофные элементарные тельца, лишенные автономного генетического аппарата, неклеточные микроорганизмы, не растут на искусственных питательных средах, т.к. не имеют собственных метаболических систем, для размножения используют рибосомы клетки хозяина, содержат только один тип нуклеиновой к-ты , упакованной в белковую оболочку – капсид (некоторые могут иметь внешнюю оболочку – суперкапсид). Абсолютные внутриклеточные паразиты. Внеклеточная форма существования называется вирионом. Могут иметь палочковидную, цилиндрическую, нитевидную, сферическую, кубовидную форму и величину: самые мелкие ви­русы близки к размерам крупных белковых молекул, самые крупные — мельчайшим бактериям

Капсид – специальный симметричный футляр, в который «упакован» генетический материал вирусов; состоит из структурных белковых субъединиц— капсомеров, уложенных в виде спирали вокруг осей симметрии (палочко- и нитевидые) либо по осям симметрии икосаэдра (сферические). Основные ф-ии капсида - обеспечивают защиту нуклеиновой кислоты, а также адсорбцию вириона на поверхности клетки хозяина, проникновение его в клетку путем взаимодействия с клеточными рецепторами.

Суперкапсид – особая оболочка поверх капсида, организованная двойным слоем липидов и специфичными вирусными белками, наиболее часто образующими выросты-шипы, пронизывающие липидный бислой. Образование суперкапсида происходит на поздних этапах репродуктивного цикла, обычно при отпочковывании дочерних популяций.

Классификация (принцип содержание ДНК или РНК):

ДНК содержащие: Poxviridae (натуральная оспа), Herpetoviridae (ветрянка, цитомегаловирус, герпес инфекция), Adenoviridae (орви, диарея, коньюктивиты, опухолевые заболевания), Parvoviridae (инфекционная эритема, хронич. Гемолитическая анемия), Hepadnaviridae (возб. Гепатита В), Papovaviridae (возб. Бородавок, папиллом).

РНК содержащие: Reoviridae (ОРВИ, гастроэнтериты), Paramyxoviridae (корь, паротит, ОРВИ), Rhabdoviridae (бешенство), Togaviridae (клещевые энцефалиты, краснуха), Orthomyxoviridae (грипп), Picornaviridae (полиомиелит, гепатит А, ЕСНО), Bunyaviridae (геморрагическая лихорадка с поченым синдромом), Arenaviridae ( лимфоцитарный хориоменингит), Coronaviridae (ОРВИ), Caliciviridae (гастроэнтерит, гепатит Е), Retroviridae (иммунодефицит, ВИЧ).

2.Р-я непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА)- р-я с участием эритрацитар. диагностикума и АТ сыворотки кр. больного. В основе р-ии лежит способ-тьэритроц-овадсорбир-ть на себе АГ. При взаимод-ии со специфич АТ происхсклеив-есенсибилизир-ыхэритроц-ов и выпад-е их в осадок с образованием гемагглютината. Р-я ставится с целью серодиагностики. Применяют при инфекциях, вызванных бактериями и риккетсиями.

Способ постановки: Р-я ставится в пластинках с лунками из органич. стекла. Из исследуемой сыворотки с пом-ю пипетки готовят ряд последовательных разведений по 0,5 мл с использ-ем изотоническ. р-раNaCl. К каждому развед-. добав. 0,5 мл 1% взвеси сенсибилизир-ыхэритроц-ов барана(эритроцитар. диагностикум). В р-яхиспольз. эритроц-ты животных ( баран,обезьяна) и чел-ка( с 1 гр крови) с нагруженными на них АГ. Результат оценивают по осадку эритр-ов в лунках. «+» результ-т- равномерное оседание в виде зонтика. «-»- пуговка.

Билет №42