1. Морфология и классификация бактерий. Назначение окрасок по Граму, Бурри, Циль-Нильсену, Нейссеру. Способы изучения и назначение препаратов "раздавленная" или 'висячая капля".

Бактерии – одноклеточные прокариотические микроорганизмы. Имеют палочковидную, шаровидную или спиралевидную форму. Размеры от 0,1 до 10 мкм. Имеют капсулу, клеточную стенку, ЦПМ, цитоплазму с нуклеоидом, рибосомами, мезосомами и включениями. Некоторые снабжены жгутиками (монотрихи, лофотрихи, амфитрихи и перитрихи) и ворсинками (общего типа и пили), могут образовывать споры при неблагоприятных условиях (1 клетка – 1 спора). Тинкториальные свойства – способность воспринимать и удерживать красители – зависят от особенностей строения и химического состава бактериальной клетки.

Окраска по Граму определяет толщину пептидогликана клеточной стенки. У грамположительных бактерий пептидогликан однослоен, они окрашиваются в фиолетовый цвет (стафилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии, микобактерии туберкулёза). Грамотрицательные бактерии имеют 3х слойное строение – окрашиваются в красный цвет (гонококки, менингококки, кишечная палочка).

Метод Бурри-Гинса используют для обнаружения капсул. При этом бактерии окрашиваются в красный цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются на чёрно-розовом фоне.

По Циль-Нильсену окрашивают кислотоустойчивые бактерии в красный цвет, а некислотоустойчивые окрашиваются в синий цвет.

По методу Нейссера окрашивают зёрна волютина (включения полифосфатов). Они окрашиваются в тёмно-синий цвет, а цитоплазма клетки – в жёлтый.

Приготовление нативных препаратов для прижизненного изучения микроорганизмов

Метод «висячей» капли. Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. Капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь её дна или края. Для микроскопии вначале используют объектив малого увеличения (8× или 10×), находят край капли, а затем устанавливают объектив 40× или иммерсионный и исследуют препарат. Определяют подвижность бактерий.

Метод «раздавленной» капли. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала и покрывают её покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей за край покровного стекла.

2. Р-я агглютинации (РА). – это склеивание и выпадение в осадок микробных кл-к в присутствии специфич. АТ. АТ –агглютинины,Аг-агглютиноген,осадок- агглютинат.

Способ постановки р-ии: 1)макроскопич-ая объемная агглют-я в пробирках( классический метод).

2)ускореннаяориентировоч. р-я агг-ии на предметном стекле.

Для постановки РА требуется:а) сыворотка крови(больного/ диагностическая сыворотка); б) изотонич. р-р NaCl; в)корпускулярный Аг (взвесь живых бактерий или диагностикум).

Из сыворотки для РА готовят ряд последовательных двухкрат. развед-ий в ряду агглютинац-х пробирок. На пробирке обознач. степень разведения сыворотки в ней. 2 последние пробирки-контроль АГ и АТ. Разведение сыворотки производят градуир-ой пипеткой по 1 мл изотон р-раNaCl. По оконч-ииразвед-я в каждую пробирку добав по 1-3 капли АГ(2 млрд жив /убитых микроб. тел в 1мл). Штатив с пробирками встрях. и ставят на 2 ч в термостат при t=37С.Окончат. результ. учитывают ч/з 18-20ч стояния пробирок при комнатной t . «+» результ-т- образовнание осадка на дне пробирки и просветление надосадоч. жид-ти.

Титр р-ии–последнее разведение сыворотки,в кот. наблюд-ся агглютинация.

РА с целью серодиагностики «+» если она прошла в разведениии,равном условному диагностическому титру( 1:200 и выше)

РА с целью сероидентифик-ии «+» ,если она прошла в титре или в ½ титра сыворотки,указанного на ампуле.

Результ-т пластической РА на предметном стекле учитывают ч/з 5-10 мин при комнат. t. При «+» р-ии в капле с сывороткой отмечают склеивание бактерий в виде хлопьев. РА на стекле ставят с адсорбированной сывороткой,кот. не содержит групповых АТ. Ее получ из неадсорбирсыв методом истощения по Кастеллани. Удаляют из сыв групп АТ и сохрспецифич-ие. Адсорбир-ыесывм.б. монорецепторными(только 1 вид агглютининов) и поливалентными(2 рецептора и более)

Билет №37