1.Спирохеты. Особенности морфологии и ультраструктуры. Принципы классификации. Способы микроскопического изучения.

Спирохеты (speira – виток, изгиб, chaite – волосы) – спиралевидные прокариоты, животной природы, не имеют ядра, не имеют клеточной стенки, движутся за счет осевой нити, при неблагоприятных условиях образуют цисты.

Патогенностью обладают спирохеты из родов Treponema (сифилис), Borellia (эпидемический и клещевой возвратный тиф), Leptospira (лептоспироз). Обладают способностью к активному движению – в клеточной стенке содержатся упорядоченно расположенные микрофибриллы – эндофлагеллы. Клетка спирохеты в структурном отношении представляет собой цитоплазматический цилиндр, ограниченный ЦПМ и покрытый клеточной стенкой. В цитоплазме содержатся нуклеоид, рибосомы, мезосомы, включения. Клеточная стенка тонкая, состоит из наружной мембраны и пептидогликанового слоя, тесно прилежащего к ЦПМ.

Микроскопия: Морфологию спирохет изучают в световом микроскопе в окрашенных препаратах, в живом состоянии в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе. Спирохеты различаются по способности окрашиваться: одни хорошо окрашиваются обычными анилиновыми красителями - фуксином (боррелии – грамотрицательные), другие требуют специальных методов окраски (чаще всего по Романовскому-Гимзе).

Род	Число и характер завитков	Характер движения	Окраска по методу Романовского-Гимзе
Borellia	3-6, крупные, неравномерные	толчкообразное, сгибательно-поступательное	сине-фиолетовая
Treponema	8-10, мелкие, равномерные	плавное, сгибательно-поступательное	бледно-розовая
Leptospira	16-20 мелкие	очень активное, вращательно-поступательное	розово-сиреневая

2.Реакция преципитации (РП). Ускроенные серологические р-ии. Высокая чувств-ть. А: гаптен ,токсин. АТ содержатся в преципитирующей сыворотке. С пом. РП определяют видовую принадлежность белковых и кровяных пятен (в суд.медицине),вид. специфич-ть белковых добавок в пищ . продуктах.

Способ получения гаптена: суточную агаровую културу бактерий сываютизотонич. р-ром NaCl,кипятят,фильтруют и титруют. В резуль-те преципитации при титровании разводят не сыворотку,а АГ. Титр преципитир. р-ии–наименьшее кол-во АГ(наиб. его разведение) ,дающее видимую р-ю.

Способ постановки р-ии: 1)р-я кольципитации. На преципитир. сыворотку наслаивают гаптен. При «+» р-ии на гр-це 2-х сред появляется мутное кольцо; 2) р-я преципит-ии в геле. Ингредиенты р-ии (АГ+АТ) помещают в отдельные лунки в прозрачном агаре. При «+» р-и в местах встречи диффундир-их в среду АГ и АТ образ-ся белые линии преципитата.

Варианты РП в геле: А) радиальная иммунодиффузия по Манчини. Использ-ся для определения ур-я Ig в сыворотке кр. больного пприопредел-иииммун. статуса. Для поставноуи р-ии необходимы наборы моноспецифических диагностич. сывороток протиIg-ов человека: IgA(H), IgG(H+L), IgM(H). Эти сыворотки получ. гипериммуниз-ей кроликов,овец или коз иммуноглоб-амиIgG ,A ,M чел-ка.

Способ постановки: На стеклянную пластинку,покрытую тонки слоем агара с лунками, вносят сыворотку больного и диагностическую монорецепторные сыворотки. Пластинки выдерж во влажной камере при t 24 С’- 48часов. учет результатов произв. по изм-ю диаметра колец преципит-ии.Кол-во Igпроизв-ят по колибровочной кривой: на оси абсцисс-диметр кольца преципит-ии,на оси ординат-ур-ньIg в МЕ/мл.

Б)Иммуноэлектрофорез. Метод иммуноблоттинга. АГ нанос-ся на нитроцеллюлозную мембр,добав. АТ сыворотки кр. больного,кот. разгоняют в электрофарезе. В случае «+» р-ииАГ+АТ образ-ся полоски преципитата. Эту р-ю использ. для выявл-я у больного с ВИЧ-инфекцией различ. анти ВИЧ-АТ к разным белкам вируса.

Билет №38