- •Общая вирусология методические указания
- •111801-65 - «Ветеринария» и 111900.62 – «Ветеринарно-
- •Занятие №1
- •Для выполнения этих требований необходимо:
- •Заражение
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №2
- •Транспортировка и хранение проб.
- •Подготовка вируссодержащего материала для исследования.
- •Подготовка органов и тканей.
- •Подготовка выделений из носа, глаз.
- •Подготовка фекалий.
- •Подготовка крови.
- •Отбор крови для серологических исследований.
- •Методы очистки вируссодержащего материала.
- •Биологический метод очистки.
- •Методы концентрации вирусов в рабочей суспензии.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №3 Световая вирусоскопия.
- •Окраска по Романовскому
- •Окраска по методу Муромцева
- •Окраска по методу Михина
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №4 Люминесцентная вирусоскопия и методы флуорохромирования препаратов.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №5 Электронная вирусоскопия.
- •Устройство микроскопа (основные узлы)
- •Приготовление объекта и требования, предъявляемые к нему в связи с электронной микроскопией.
- •Общая схема препарирования состоит из операций:
- •Приготовление подложек
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие 6 Культивирование вирусов в организме лабораторных животных. Культивирование вирусов в эмбрионах кур. Схема эмбрионов кур. Освоение методов заражения эмбрионов кур.
- •Лабораторные животные должны отвечать определенным требованиям:
- •Лабораторных животных используют для:
- •Методы экспериментального заражения лабораторных животных.
- •Методы заражения куриных эмбрионов
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие 7 Отбор вирусосодержащего материала от погибших эмбрионов кур и дальнейшая работа с вирусосодержащим материалом.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие № 8 Культивирование вирусов на культуре клеток.
- •Культуры клеток применяются для:
- •Техника приготовления однослойной первично трипсинизированной культуры клеток из фибробластов 9-10 суточных куриных эмбрионов.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Занятие 9 Методы заражения культур клеток. Цитопатогенное действие вируса на клетку.
- •Подбор культур клеток.
- •Техника заражения культур клеток.
- •Применяют 2 способа заражения.
- •Цпд используется для:
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Литература
- •Оглавление
Цпд используется для:
1.Обнаружения вируса в исследуемом материале.
2.Титрация или количественного определения вируса (ЦПД 50).
3.Определения титра специфических антител в исследуемых сыворотках крови по реакции нейтрализации. (РН).
Однако есть вирусы, которые вызывают латентную (скрытую) вирусную инфекцию в клетке. Они размножаются в клетках, но видимой дегенерации в клетках при световой микроскопии обнаружить не удается. ЦПД или запаздывает или отсутствует. Для обнаружения таких вирусов в культурах клеток применяют люминисцентную вирусоскопию или ставят реакцию гемадсорбции (РГАд).
Самостоятельная работа студентов:
1.Студенты знакомятся с оборудованием бокса.
Студенты знакомятся с методами заражения культур клеток вирусом.
Студенты проводят микроскопию погибших зараженных культур клеток.
Студенты знакомятся с методами заражения культур клеток вирусом.
Студенты проводят микроскопию нормального монослоя культур клеток.
Студенты оценивают ЦПД монослоя культур клеток под действием вируса.
Контрольные вопросы:
Как проводят подбор культур клеток для заражения их вирусом?
Каковы методы заражения культур клеток вирусом?
Какие культуры клеток используют при нкубировании определенных вирусов?
Что такое ЦПД вируса?
Каковы изменения в монослое клеток под действием вируса?
Как оценивается ЦПД вирусов?
Литература
а) основная литература
Белоусова, Р.В. Ветеринарная вирусология: Учеб. [для вузов] / Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская, И.В. Третьякова.– М.: КолосС, 2007. – 423 с.
Белоусова, Р.В. Практикум по ветеринарной вирусологии / Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская, И.В. Третьякова. – М.: КолоС, 2006. – 248 с.
Госманов, Р.Г. Ветеринарная вирусология / Р.Г. Госманов, Н.М. Колычев, В.И. Плешакова – С.-П.: «Лань», 2010. - 480 с.
Тихонов, И.В. Биотехнология: Учебник / Е.А. Рубан, Т.Н. Грязнева, А.Я. Самуйленко, В.А. Гаврилов. – СПб: Гиорд, 2005. – 780 с.
Тихонов, И.В. Практикум по биотехнологии: Учебно-методич. пос.
/ В.А. Гаврилов, Д.А. Девришов и др. – М.: Изд-во «Киселева Н.В.», 2010. – 330 с.
б) дополнительная литература
1. Дорофеев, В.И. Использование метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) для диагностики инфекционных заболеваний. Учебно-методическое пособие / В.И. Дорофеев, Веревкина М.Н., Светлакова Е.В, Ожередова Н.А. – Ставрополь «АГРУС», 2008. – 32 с.
2. Дорофеев, В.И. Методы иммуноферментного анализа и применение их в вирусологических исследованиях. Методические указания / В.И. Дорофеев, Веревкина М.Н., Светлакова Е.В, Ожередова Н.А. – Ставрополь «АГРУС», 2008. – 36 с.
3. Щелкунов, С.Н. Генетическая инженерия / С.Н. Щелкунов. Новосибирск: Сибирское университетское издательство, 2004. – 496 с.
Оглавление
Занятие 1. Знакомство с работой и оборудованием вирусологической лаборатории. Техника безопасности при работе с вирусами. Схема вирусологических исследований……………………
Занятие 2. Отбор, консервирование и транспортировка патологического материала.Приготовление рабочей суспензии. Методы очистки и концентрации вирусов в исследуемом материале.
Занятие 3. Световая вирусоскопия.
Занятие 4. Люминесцентная вирусоскопия и методы флуорохромирования препаратов.
Занятие 5. Электронная вирусоскопия
Занятие 6. Культивирование вирусов в организме лабораторных животных. Культивирование вирусов в эмбрионах кур. Схема эмбрионов кур. Освоение методов заражения эмбрионов кур.
Занятие 7. Отбор вирусосодержащего материала от погибших эмбрионов кур и дальнейшая работа с вирусосодержащим материалом.
Занятие 8. Культивирование вирусов на культуре клеток.
Занятие 9. Методы заражения культур клеток. Цитопатогенное действие вируса на клетку.
ЛИТЕРАТУРА