- •Общая вирусология методические указания
- •111801-65 - «Ветеринария» и 111900.62 – «Ветеринарно-
- •Занятие №1
- •Для выполнения этих требований необходимо:
- •Заражение
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №2
- •Транспортировка и хранение проб.
- •Подготовка вируссодержащего материала для исследования.
- •Подготовка органов и тканей.
- •Подготовка выделений из носа, глаз.
- •Подготовка фекалий.
- •Подготовка крови.
- •Отбор крови для серологических исследований.
- •Методы очистки вируссодержащего материала.
- •Биологический метод очистки.
- •Методы концентрации вирусов в рабочей суспензии.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №3 Световая вирусоскопия.
- •Окраска по Романовскому
- •Окраска по методу Муромцева
- •Окраска по методу Михина
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №4 Люминесцентная вирусоскопия и методы флуорохромирования препаратов.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №5 Электронная вирусоскопия.
- •Устройство микроскопа (основные узлы)
- •Приготовление объекта и требования, предъявляемые к нему в связи с электронной микроскопией.
- •Общая схема препарирования состоит из операций:
- •Приготовление подложек
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие 6 Культивирование вирусов в организме лабораторных животных. Культивирование вирусов в эмбрионах кур. Схема эмбрионов кур. Освоение методов заражения эмбрионов кур.
- •Лабораторные животные должны отвечать определенным требованиям:
- •Лабораторных животных используют для:
- •Методы экспериментального заражения лабораторных животных.
- •Методы заражения куриных эмбрионов
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие 7 Отбор вирусосодержащего материала от погибших эмбрионов кур и дальнейшая работа с вирусосодержащим материалом.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие № 8 Культивирование вирусов на культуре клеток.
- •Культуры клеток применяются для:
- •Техника приготовления однослойной первично трипсинизированной культуры клеток из фибробластов 9-10 суточных куриных эмбрионов.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Занятие 9 Методы заражения культур клеток. Цитопатогенное действие вируса на клетку.
- •Подбор культур клеток.
- •Техника заражения культур клеток.
- •Применяют 2 способа заражения.
- •Цпд используется для:
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Литература
- •Оглавление
Методы заражения куриных эмбрионов
Перед заражением КЭ скорлупа на месте вскрытия или инъекции обрабатывается спиртом, обжигается, затем обрабатывается 5% раствором йода и вновь обжигается. Можно обрабатывать йодированным спиртом. Только после этого делаем прокол или вскрытие скорлупы. Методов заражения КЭ много, основные из них следующие:
1. Заражение на хорион- аллантоисную оболочку. КЭ должен быть 7-10 дневного возраста. На хорион-аллантоисной оболочке можно культивировать вирусы оспы, ящура. Доза заражения - 0,1 мл. Имеются три метода заражения на хорионаллантоисную оболочку:
А. Со стороны пути. Ножницами вскрывают пугу, иглой или пинцетом отпрепаровываем второй листок подскорлуповой оболочки в месте хорошо развитых кровеносных сосудов, наносим вирусосодержащий материал и тем же листком прикрываем. Окошечко в скорлупе закрывается покровным стеклом (или мелким часовым стеклом) и заливаем парафином.
Б. На границе пуги выпиливается скорлупа - 5x5x5 мм, отпрепаровывается подскорлуповая оболочка, а затем все также как в пункте "а".
С. Окошечко делается сбоку против зародыша. В этом случае иногда надо делать противоотверстие со стороны пуги и с помощью груши отсасывать воздух.
2. Заражение в аллантоисную полость. Применяется чаще других. Возраст эмбриона 9-11 дней. Доза заражения - 0,1 мл. Можно культивировать вирус гриппа, чумы птиц, чумы собак, инфлуэнцы. Существует два способа.
А. Через пугу. Делаем отверстие для иглы. Иглу погружаем настолько, чтобы попасть в аллантоисную полость. После введения вируссодержащего материала отверстие закрываем расплавленным парафином.
Б. Против предлежания К.Э. Яйцо фиксируем крестиком вверх, отступив от крестика 2-3 мм вверх делаем прокол иглой приблизительно на 0,5 см. Отверстие закрываем парафином.
3. Заражение в амниотическую полость. Возраст эмбриона 9-11 дней. Доза заражения - 0,1 мл. Существует два способа.
А. Через пугу. Делаем отверстие для иглы. Иглу погружаем настолько, чтобы попасть в амниотическую полость. После введения вируссодержащего материала отверстие закрываем расплавленным парафином.
Б. Против предлежания К.Э. Яйцо фиксируем крестиком вверх, отступив от крестика 2-3 мм вверх делаем прокол иглой приблизительно на 1,5 см. Отверстие закрываем парафином.
3. В желточный мешок. В этом случае используют 5-7 дневные эмбрионы. Доза заражения 0,5-1,0 мл. Применяют при орнитозе, пситтакозе, энцефалитах, риккетсиозах, бруцеллезе. Существует два способа.
А. Яйцо фиксируется крестиком вниз, сверху в центре яйца делается прокол скорлупы и вводится игла на 1,5-2 см, чтобы попасть в желточный мешок. Отверстие закрывается парафином.
Б. Яйцо оставляют в том же положении, прокол делают со стороны пути, иглу вводим с уклоном вверх, чтобы попасть в желточный мешок на 3-4 см. Отверстие закрывается парафином.
Зараженные куриные эмбрионы помещают в термостат для дальнейшей инкубации при температуре +37°С - +38°С в процессе которой происходит культивирование вирусов.