- •Общая вирусология методические указания
- •111801-65 - «Ветеринария» и 111900.62 – «Ветеринарно-
- •Занятие №1
- •Для выполнения этих требований необходимо:
- •Заражение
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №2
- •Транспортировка и хранение проб.
- •Подготовка вируссодержащего материала для исследования.
- •Подготовка органов и тканей.
- •Подготовка выделений из носа, глаз.
- •Подготовка фекалий.
- •Подготовка крови.
- •Отбор крови для серологических исследований.
- •Методы очистки вируссодержащего материала.
- •Биологический метод очистки.
- •Методы концентрации вирусов в рабочей суспензии.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №3 Световая вирусоскопия.
- •Окраска по Романовскому
- •Окраска по методу Муромцева
- •Окраска по методу Михина
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №4 Люминесцентная вирусоскопия и методы флуорохромирования препаратов.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие №5 Электронная вирусоскопия.
- •Устройство микроскопа (основные узлы)
- •Приготовление объекта и требования, предъявляемые к нему в связи с электронной микроскопией.
- •Общая схема препарирования состоит из операций:
- •Приготовление подложек
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие 6 Культивирование вирусов в организме лабораторных животных. Культивирование вирусов в эмбрионах кур. Схема эмбрионов кур. Освоение методов заражения эмбрионов кур.
- •Лабораторные животные должны отвечать определенным требованиям:
- •Лабораторных животных используют для:
- •Методы экспериментального заражения лабораторных животных.
- •Методы заражения куриных эмбрионов
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие 7 Отбор вирусосодержащего материала от погибших эмбрионов кур и дальнейшая работа с вирусосодержащим материалом.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Занятие № 8 Культивирование вирусов на культуре клеток.
- •Культуры клеток применяются для:
- •Техника приготовления однослойной первично трипсинизированной культуры клеток из фибробластов 9-10 суточных куриных эмбрионов.
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Занятие 9 Методы заражения культур клеток. Цитопатогенное действие вируса на клетку.
- •Подбор культур клеток.
- •Техника заражения культур клеток.
- •Применяют 2 способа заражения.
- •Цпд используется для:
- •Самостоятельная работа студентов:
- •Контрольные вопросы:
- •Литература
- •Оглавление
Окраска по Романовскому
Этим методом окрашивают элементарные тельца Пашена, Боллингера
другие.
Мазки-отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют 3-5 мин. Метиловым спиртом или 10-15 мин. В смеси эфира со спиртом (1:1). Затем их погружают в раствор краски Романовского. Приготовленный по следующей прописи: 1 каплю основного раствора краски смешивают с 1 мл дистиллированной воды. Окрашивание проводят на предметном стекле, в специальных ванночках или чашках Петри методом подливания краски под препарат, красят 30-40 минут, затем мазок промывают, высушивают фильтровальной бумагой, ополаскивают спиртом, снова промывают и высушивают. При микроскопии на голубом фоне препарата элементарные тельца Пашена будут красные, а тельца-включения - темно-фиолетовые.
Элементарные тельца Пашена хорошо обнаруживаются при окраске препарата по Морозову. Это сложный метод окраски, в основе которого лежит обработка препарата солями серебра.
При микроскопии препаратов, окрашенных этим методом, элементарные тельца на светло-коричневом фоне клеток имеют вид темно-коричневых округлых зерен. Они могут располагаться группами, одиночно или в виде цепочек.
Окраска по методу Муромцева
Чаще применяется для обнаружения телец-включений Бабеша-Негри
при бешенстве.
Мазки фиксируют в метиловом спирте 3-5 минут, теплой смесью спирта с эфиром напополам. Фиксирующие жидкости не оказывают негативного действия на качество окрашивания в течение 2-3 недель, поэтому их сохраняют в фиксирующей жидкости.
После фиксации мазок ополаскивают в дистиллированной воде и погружают на 10 минут в синьку Мансона (100 мл дистиллированной воды добавляют 5-8г буры, 2 грамма кристаллической метиленовой сини, которую разбавляют дистиллированной водой 1:40). Непромытый мазок выдерживают в 10% растворе танина до перехода цвета мазка из сине-фиолетового в светло-голубой. Затем мазок промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой. Мазок микроскопируют в иммерсионной системе без покровного стекла. Цитоплазма нервных клеток светло-голубого цвета, ядра клеток синие, тельца Бабеша-Негри розово-фиолетовые или красные с темными включениями.
Окраска по методу Михина
Мазки фиксируют в фиксирующей жидкости, высушивают
фильтровальной бумагой и окрашивают 30-40 минут краской Романовского, разведенной 1:10. Затем мазки промывают подкисленным спиртом (1 капля ледяной уксусной кислоты на 30 мл 960 спирта), а затем водой. Мазки высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют. Фон мазка должен быть фиолетово- розовый, нервные клетки голубого цвета, ядра клеток темно-фиолетовые, а тельца Бабеша-Негри розово-красные с точечными включениями темно-синего цвета.
Самостоятельная работа студентов:
Студенты просматривают готовые препараты из патматериала с тельцами Бабеша-Негри, Пашена, Руборта, окрашенные по методу Муромцева и Морозова.
Студенты готовят мазки из патматериала, окрашивают их по методу Романовского и микроскопируют.
Контрольные вопросы:
Что такое элементарные тельца, у каких вирусов их можно обнаружить?
Что такое тельца-включения, у каких вирусов их можно обнаружить?
Каким образом и для чего окрашивают препараты по методу Романовского?
Каким образом и для чего окрашивают препараты по методу Муромцева?
Каким образом и для чего окрашивают препараты по методу Михина?