Новиков Д.К. Медицинская микробиология

лями, грамотрицательны, при окраске по Романовскому-Гимзе приобретают бледно-розовый цвет, поэтому и называются бледными спирохетами.

Культуральные свойства. По типу дыхания анаэробы или микроаэрофилы, оптимум температуры роста – 350С. На искусственных питательных средах растут плохо. Их можно культивировать на сывороточных средах с добавлением кусочков яичек кролика или печеночной ткани. При этом возбудители теряют вирулентность и называются культуральными трепонемами. Лучше размножаются в яичке кролика или в курином эмбрионе, где вирулентность сохраняется, свойства возбудителя при этом не меняются, и такие трепонемы называют тканевыми.

Антигены. Выявлено 4 антигенных фракции: белковая термолабильная, полисахаридная термостабильная и 2 липидных фракции, одна из них – фосфолипидная, идентична кардиолипиновому антигену сердца быка и имеет диагностическое значение, т.к. вступает в реакцию с антителами, образовавшимися у больного при сифилисе (антигенная мимикрия). При распаде выделяют эндотоксин.

Устойчивость в окружающей среде. Устойчивы к низким температурам, чувствительны к высоким. Разрушаются уже при 550С. Чувствительны к растворам ртути, мышьяка, сулемы, антибиотикам.

Характеристика заболевания

Источник инфекции – больной человек.

Пути передачи: половой, трансплацентарный, трансфузионный (после переливания крови) и контактно-бытовой.

Входные ворота – поврежденные кожа и слизистые, откуда возбудитель попадает в лимфу, кровь, развивается генерализованный процесс, после чего поражаются внутренние органы и ЦНС. Заболевание протекает циклично.

Инкубационный период – 24 дня (до 90 дней).

Патогенез. Первичный серонегативный сифилис. После проник-

новения в ткани спирохеты размножаются, частично гибнут, выделяют антигены и эндотоксин, вызывают местное воспаление. У входных ворот (на слизистой оболочке половых органов) возникает уплотнение, инфильтрат, в центре которого образуется безболезненная язва с твердым дном со скудным серозным отделяемым – «твердый шанкр», увеличиваются и воспаляются паховые лимфоузлы, возникает лимфоаденит. Эта стадия длится 5-6 недель. Из лимфоузлов возбудитель проникает в кровь и органы.

Вторичный генерализованный сифилис. Возбудители циркули-

руют в крови, разрушаются, выделяется эндотоксин, антигены трепонем вызывают образование антител и развитие аллергии, на коже и слизистых оболочках появляются полиморфные аллергические высы-

271

пания, развивается полилимфоаденит. Это серопозитивный период, когда в организме уже обнаруживаются антитела. Он может продолжаться 2-3 года.

Третичный сифилис. В результате аллергических высыпаний во внутренних органах и нервной системе появляются деструктивные инфекционные поражения в виде гранулем (гумм), которые распадаются, образуются язвы с последующим рубцеванием. Из-за общности фосфолипидов трепонем и тканей человека антитела против антигенов возбудителя вызывают аутоиммунные реакции. Без лечения этот период продолжается десятки лет и может перейти в нейросифилис, который сопровождается дегенеративными изменениями в ЦНС и приводит к глубокой инвалидности («спинная сухотка»).

Возможны и другие формы сифилиса: скрытый серопозитивный сифилис без клинических проявлений; врожденный сифилис, передающийся трансплацентарно плоду от матери; трансфузионный сифилис после переливания крови от инфицированных доноров.

Иммунитет. После заболевания иммунитет нестойкий, нестерильный, только при наличии антигенов спирохет. Его называют шанкерным. При повторном заражении шанкерная стадия отсутствует, развиваются сразу последующие стадии заболевания. Антитела защитной роли не играют. Они способствуют фиксации трепонем в тканях и образованию гранулем. Выражен незавершенный фагоцитоз. В процессе заболевания формируется инфекционная аллергия, сопровождаемая высыпаниями на коже, и вторичный иммунодефицит.

Лабораторная диагностика

Материал для исследования. При первичном сифилисе исследуют экссудат (отделяемое) из язвы-шанкра, соскоб из элементов сыпи и пунктат из лимфоузлов на наличие возбудителя.

Бактериоскопический метод. Из материала готовят препарат «висячая» или «раздавленная капля» и микроскопируют его в «темном» поле или в фазово-контрастном микроскопе. Дифференцируют от трепонем-сапрофитов: T.refringens не имеет сгибательных движений, колонизирует половые органы, T.denticola персистирует в слизистой оболочке рта, имеет короткие завитки. Далее готовят мазки, фиксируют формалином, окрашивают по Романовскому-Гимзе или Граму и микроскопируют. Выявляют розовые спирали с мелкими однородными завитками (8-12). Сапрофиты окрашиваются в синий или фиолетовый цвет. При окраске методом серебрения выявляют серебристые извитые нити, т.к. нитрат серебра восстанавливается в металлическое серебро.

Серологический метод включает в себя несколько реакций.

Ускоренные отборочные реакции для выявления антител при массовом обследовании больных и доноров. Обычно с этой целью ис-

272

пользуют реакцию микропреципитации с сывороткой больного и кардиолипиновым антигеном (жировая вытяжка из сердца быка), холестерином и лецитином (учитывая общность фосфолипидов с трепонемами). Реакцию учитывают через несколько минут по просветлению жидкости и появлению хлопьев. Можно использовать реакцию коагглютинации с частицами угля или целлюлозы, нагруженными кардиолипином. Такой диагностикум прибавляют к исследуемой сыворотке крови и через 5-7 минут оценивают реакцию по наличию или отсутствию агглютинации.

Стандартная реакция Вассермана (РСК) ставится с кардиоли-

пиновым антигеном, а также может выполняться со специфическим трепонемным антигеном.

Основное значение в постановке диагноза имеют специфические реакции с трепонемами, в которых определяют специфические антитрепонемные антитела, в частности, реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ).

Для РИБТ используют сыворотку больного, живые тканевые трепонемы и комплемент. Реакцию ставят в стерильных пробирках и через 20 часов инкубации в термостате оценивают в темном поле результаты по проценту обездвиженных трепонем. Если обездвижены более 50% трепонем, реакция положительная, 31-50% – слабоположительная, меньше 30% – отрицательная.

Непрямая реакция иммунофлюоресценции: на препарат с фикси-

рованными трепонемами наносят сыворотку больного, антитела связываются, после инкубации и промывания добавляют антитела против человеческого иммуноглобулина, меченные ФИТЦ. При положительной реакции наблюдается свечение трепонем.

Реакция иммунного прилипания (РИП): вирулентные тканевые трепонемы сенсибилизируют сывороткой больного в присутствии комплемента и эритроцитов. При наличии антител в сыворотке больного трепонемы в комплексе с антителами, комплементом и эритроцитами исчезают из надосадочной жидкости в результате прилипания и осаждения.

Используют также РПГА с трепонемным эритроцитарным диа-

гностикумом, ИФА с трепонемным антигеном.

Аллергический метод – вводят внутрикожно аллерген люетин. Через 24-48 часов выявляют гиперемию и инфильтрацию у лиц с ПЧЗТ.

Профилактика только неспецифическая: выявление, изоляция и лечение больных полным курсом антибиотикотерапии; контроль за эффективностью лечения; обязательное выявление источника инфекции и контактных с ним лиц; применение уголовных санкций к лицам, уклоняющимся от лечения и заражающим граждан.

273

Лечение. Пенициллины или цефалоспорины назначают курсом до полного излечения, также применяют другие антибиотики (доксициклин, азитромицин). Дополнительно используют стимуляторы иммунитета, витамины.

15.1.2. Возбудители бытовых трепонематозов Эндемический сифилис – хронический генерализованный спи-

рохетоз беджель. Вызывает его T.pallidum, субвид endemicum. Морфологические и культуральные свойства аналогичны

T.pallidum, субвид pallidum. Дифференцируют их по ДНК-гомологии, путям передачи, клиническим проявлениям и возрасту больных (эндемическим сифилисом чаще болеют дети). Заболевание связано с плохими санитарно-гигиеническими условиями.

Характеристика заболевания

Источник инфекции – больные люди.

Пути передачи: контактный через поврежденную кожу и слизистые, очень редко возможно заражение половым путем.

Патогенез и клинические проявления. Первичного очага нет, возбудитель от входных ворот гематогенно распространяется по организму. Первые проявления начинаются с сыпи на коже и слизистых оболочках. Характер сыпи сходен с сыпью при вторичном генерализованном венерическом сифилисе, но дополнительно могут появиться кондиломы вокруг анального отверстия. Без лечения этот период продолжается около одного года. Затем на коже появляются изменения типа гуммозных, могут поражаться нервная и костная системы, остальные внутренние органы не вовлекаются в процесс.

Иммунитет не формируется.

Лабораторная диагностика

Материал для исследования. Исследуют пунктат лимфоузлов в первом периоде заболевания и сыворотку в серопозитивном периоде. Используют те же методы, что и при сифилисе.

Бактериоскопический метод. Окраска мазка по РомановскомуГимзе или методом серебрения, или по Граму с целью выявления типичной морфологии трепонем. Чаще микроскопируют нативный материал в фазово-контрастном или темнопольном микроскопах. Метод носит ориентировочный характер, т.к. все подвиды T.pallidum имеют одинаковую морфологию.

Серологические методы – РИФ, РИБТ, непрямая РИФ, реакция Вассермана с соответствующим антигеном, но титр антител ниже, чем при венерическом сифилисе.

В настоящее время основным методом идентификации является

генодиагностика (ПЦР и др.).

274

Лечение и профилактика такая же, как и при венерическом сифилисе.

Фрамбезия – эндемический хронический генерализованный спирохетоз или тропическая гранулема. Широкое распространение он получил, начиная с ХVI-XVII веках в Африке, Южной Америке, Южной Азии.

Возбудитель фрамбезии – T.pallidum, подвид pertenue. Морфологические и культуральные свойства такие же, как у воз-

будителя венерического сифилиса.

Характеристика заболевания.

Источник инфекции – больной человек.

Пути передачи: контактный, очень редко половой, может передаваться пассивно через мух, клещей и тараканов. Очень восприимчивы дети 2-14 лет.

Входные ворота – поврежденная кожа и слизистые.

Клинические проявления. Инкубационный период продолжается 3-4 недели, после чего появляются первичные признаки заболевания. Этот период называется фрамбезиома. На коже конечностей, реже туловища появляется первичный очаг в виде крупных бляшек (фрамбезиом), которые сливаются в один очаг, напоминающий ягоду малины. Одновременно поднимается температура, появляется головная боль, боль в суставах, кожный зуд.

Вторичный генерализованный сифилис. Появляются многочис-

ленные полиморфные высыпания. Элементы сыпи окружены очагами гиперемии – фрамбезиды. Они постепенно трансформируются, превращаются в гуммоподобные узлы размером до 0,5-1 см, могут подвергаться распаду. Этот период продолжается у детей 3-6 месяцев, у взрослых до 12 месяцев.

Третичный сифилис. Развивается без лечения через 15-20 лет. Он сопровождается распадом тканей, тяжелым деструктивным поражением костей. Внутренние органы не поражаются.

Иммунитет после заболевания стойкий.

Лабораторная диагностика

Материал: пунктат лимфоузлов, отделяемое фрамбезиом, скарификат фрамбезид. Для выявления типичной морфологии трепонем используют бактериоскопический метод.

В основе диагностики лежит клиническая картина заболевания и генетический анализ структуры ДНК и РНК.

Серологические методы: те же реакции, что и при венерическом сифилисе.

Профилактика. Неспецифическая: санпросветработа, улучшение санитарного состояния, изоляция и лечение больных, детям в очагах инфекции вводят антибиотики.

275

Лечение. Такое же, как при венерическом сифилисе.

Болезнь пинта – хронический генерализованный спирохетоз,

который характеризуется эндемичностью очагов в прибрежных районах Центральной и Южной Америки. Спорадические случаи есть в Экваториальной Африке и на юге Азии.

Возбудитель – T.pallidum, подвид carateum.

Характеристика заболевания

Источник инфекции – больной человек.

Пути передачи контактный и через укусы мошек и клопов. Входные ворота – поврежденная кожа.

Клинические проявления. Инкубационный период 7-30 дней, после чего начинаются первичные проявления. Появляются папулы с красным ободком с последующим шелушением. При вторичной генерализованной инфекции наблюдается пестрая картина – одни пятна обесцвечиваются, а другие остаются яркими. Третичные проявления – поражается костная и нервная системы.

Диагностика, профилактика и лечение проводятся так же, как при остальных трепонематозах.

15.2. Боррелии

Таксономия. Семейство Spirochaetaceae, род Borrelia. Вызывают

эпидемический и эндемический возвратные тифы, болезнь Лайма.

Эпидемический возвратный тиф – антропонозное, трансмис-

сивное заболевание с чередованием периодов лихорадки и апирексии, сопровождающееся увеличением печени и селезенки. Возбудитель эпидемического возвратного тифа Borrelia recurrentis открыт О.Обермеером (1868.). Этиологическая роль этого возбудителя была установлена Г.Н. Минхом в 1874 г. путем самозаражения. Им было высказано предположение о трансмиссивности этого заболевания (переносчики – вши).

Общие свойства боррелий

Морфологические свойства. Крупные спиралевидные микроорганизмы, имеющие 3-8 неравномерных крупных завитков, не образуют спор, капсул, имеют фибриллы, которые, переплетаясь, образуют осевую нить, на концах клеток имеют по 7-30 наружных фибрилл. Боррелии очень подвижны, совершают сгибательные, вращательные, поступательные движения. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, особенно после протравливания фенолом, т.к. имеют много нуклеопротеидов. По Романовскому-Гимзе – сине-фиолетового цвета, грамотрицательны.

Культуральные свойства. Строгие анаэробы или микроаэрофилы, растут на средах с сывороткой крови и кусочками тканей. Лучше

276

культивируются в куриных эмбрионах и на среде АристовскогоГельцера. Рост скудный, видимым становится через 4-7 суток.

Характеристика заболевания

Источник инфекции – больной человек. Переносчики – вши. Патогенез. Вши насасывают кровь больного человека в лихора-

дочном периоде. Боррелии накапливаются у вшей в гемолимфе. Через 4-12 дней они способны заражать человека. При укусе здорового человека возникает зуд. Человек при почесывании места укуса раздавливает вошь и втирает содержимое гемолимфы в кожу. Инкубационный период – 7-8 дней. Боррелии захватываются лейкоцитами, размножаются и поступают в кровь. В крови они разрушаются антителами, выделяется эндотоксин (ЛПС), под его влиянием из макрофагов выделяется ИЛ-1 и другие цитокины, повышается температура, появляется головная боль. Повреждаются клетки ЦНС, кровеносной системы, паренхиматозные органы. Нарушается местное кровоснабжение в капиллярах внутренних органов, что приводит к развитию геморрагических инфарктов. Лихорадочный период продолжается 5-7 дней. Часть боррелий в тканях изменяют антигенную структуру и снова выходят в кровь. Возникает новый приступ лихорадки. Образующиеся новые антитела действуют как фактор селекции для боррелий: в организме сохраняются варианты бореллий, имеющие антигенные отличия, остальные лизируются. Постепенно межлихорадочный период удлиняется, а лихорадочный становится короче. Если в течение 25 дней лихорадка не повторяется, считают, что человек выздоровел.

Иммунитет гуморальный, нестойкий, не перекрестный с другими боррелиозами.

Лабораторная диагностика

Микроскопический метод. Готовят мазок крови и препарат «толстой капли крови» с целью выявления типичной морфологии возбудителя.

Для выявления антигена в исследуемом материале можно использовать РИФ, ИФА.

Для выявления генов боррелий в крови применяют полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Серологический метод. Используют реакцию иммобилизации боррелий (РИБ). Если в сыворотке больного есть АТ, то через 18-20 часов после инкубации в термостате наступает обездвиживание боррелий. Если процент обездвиживания более 50%, реакция считается положительной. Для выявления антител можно использовать ИФА или непрямую РИФ.

Профилактика неспецифическая: уничтожение вшей. Лечение – антибиотики с учетом чувствительности к ним.

277

Возбудители эндемического возвратного тифа – Borrelia duttoni, Borrelia caucasica, Borrelia persica, Borrelia hispanica, Borrelia parkeri и другие – вызывают острое природно-очаговое трансмиссивное заболевание, протекающее в виде лихорадочных приступов, чередующихся с периодами нормальной температуры. Заболевание распространено в странах с жарким климатом.

Морфология такая же, что и у B.recurrentis.

Характеристика заболевания

Источник инфекции – грызуны; переносчики – клещи из рода Ornithodorus, у которых происходит трансовариальная передача инфекции, что обеспечивает ее эндемичность. У клещей после укуса больных грызунов в слюне накапливаются боррелии. При укусе здорового человека возбудитель выделяется со слюной. Больной втирает его в скарифицированную поверхность кожи. На месте укуса появляется очаг воспаления – розовое пятно, затем узелок с геморрагическим ободком, из него спирохеты поступают в кровь.

Клинические проявления сходны с возвратным эпидемическим тифом, но лихорадочные периоды более короткие. К возбудителям тифа чувствительны морские свинки.

Иммунитет гуморальный, стойкий. Чаще болеют приезжие, у местного населения прочный иммунитет за счет бытовой иммунизации.

Методы диагностики такие же, как предыдущего тифа.

Для дифференцирования от эпидемического возвратного тифа

проводят биопробу на морских свинках. У них через 5-7 дней после заражения в крови обнаруживается много спирохет.

Профилактика неспецифическая – дератизация, дезинсекция, защита людей от укуса клещей.

Лечение. Назначают антибиотики широкого спектра действия.

Возбудитель болезни Лайма – Borrelia burgdorferi вызывает си-

стемную природно-очаговую трансмиссивную инфекцию, характеризующуюся эритемой, лихорадкой, поражением центральной и периферической нервной системы, суставов, сердца и крупных сосудов. Впервые болезнь Лайма описана в 1975 г. как воспалительная артропатия, связанная с укусом иксодовых клещей в населенном пункте Лайм (США). Боррелии были выделены из клещей Ixodes dammini (современное название – Ixodes scapularis) У. Бургдорфером, отсюда они получили название Borrelia burgdorferi.

Таксономия и номенклатура. С использованием современных методов геносистематики боррелий было показано, что вид B. burgdorferi является весьма гетерогенным. Из него было выделено более 10 новых видов. У человека Лайм-боррелиоз вызывают следующие ви-

ды: собственно B. burgdorferi, а также B. afzelii, B. garinii, B. bissettii.

278

Кроме того, оказалось, что они вызывают и разные клинические формы заболевания.

Морфология и культуральные свойства возбудителей системного клещевого боррелиоза Лайма общие со всеми боррелиями. Медленно растут на сложной среде Келли с дрожжевым гидролизатом, аминокислотами, витаминами.

Антигенные свойства: имеют липопротеиновые АГ наружной мембраны – OspA, OspB, OspC; белковый антиген.

Факторы патогенности: – эндотоксин.

Характеристика заболевания

Источник и резервуар инфекции – мелкие и крупные грызуны, олени, птицы, кошки, собаки, овцы, крупный рогатый скот.

Путь передачи – трансмиссивный через укусы клещей Ixodes scapularis, в России и Беларуси – через укусы I. ricinus и I. persulcatus,

у которых возможна трансовариальная передача возбудителя. Это обеспечивает эндемичность заболевания. Выражена сезонность, чаще люди болеют в мае-августе после посещения леса, дачи.

Патогенез и клинические проявления. От места укуса клеща боррелии проникают в кожу, где развивается пятно кольцевидной эритемы вокруг места укуса, которая постепенно увеличивается, образуется мигрирующая эритема более 5 см в диаметре. Возбудитель попадает в кровь и разносится во внутренние органы, вызывает там очаги деструкции. Параллельно возбудители адсорбируются на клетках, взаимодействуют с мембранными гликолипидами поверхности нейроглии. Выражены аутоиммунные процессы и артриты, особенно у пациентов, имеющих HLA-DR2 и HLA-DR4 антигены. Все это обеспечивает полиморфизм клинических проявлений и цикличность заболевания.

I фаза длится от 7 до 30 дней после укуса клеща. Появляется эритема у входных ворот. В пораженной ткани много лимфоцитов, плазмоцитов, развивается васкулит. Кожные проявления более характерны при инфицировании B. afzelii.

II фаза проявляется неврологическими (развиваются менингиты, менингоэнцефалиты) и кардиальными расстройствами. Длится несколько месяцев. Характерна для инфекции B. garinii.

III фаза – артритическая. Поражаются суставы. Продолжается несколько месяцев или лет (B. burgdorferi).

Иммунитет – антительный, неперекрестный с другими боррелиозами.

Лабораторная диагностика

Основной метод диагностики – клинический.

Материал для лабораторных исследований: кровь, ликвор, синовиальная жидкость.

279

Микроскопический метод предусматривает несколько вариантов: микроскопия нативного материала в «темном» поле или в фазовоконтрастном микроскопе, приготовление мазков с окраской по Граму или по Романовскому-Гимзе.

Серологический метод. Выявляют антитела в непрямой РИФ или ИФА, начиная с 3-6 недели заболевания. До 4-6 недель находят антитела IgМ, диагностический титр их 1:64, к 8-10 неделям определяют IgG, диагностический титр 1:128. В течение года после заболевания титр антител нарастает.

ПЦР выявляет в крови больных гены боррелий.

Профилактика неспецифическая: защита от укусов клещей при посещении леса, дачи. Также рекомендуется профилактический прием антибиотиков после укуса.

Специфическая профилактика.

В настоящее время разрабатываются субъединичные, рекомбинантные и ДНК-вакцины на основе белков OspA и OspС.

Лечение – назначение антибиотикотерапии (доксициклин, беталактамные антибиотики, азитромицин).

15.3. Лептоспиры

Лептоспироз (водная лихорадка) – острое природно-очаговое, зоонозное инфекционное заболевание. Для него характерны интоксикация, миалгии, поражение почек, печени, нервной и сосудистой систем. Выражен геморрагический синдром, часто бывает желтуха.

Таксономия. Семейство Leptospiraceae до 1989 г. включало два вида: Leptospira interrogans (патогенен для людей и животных) и

L.biflexa – сапрофит.

К настоящему времени на основании методов геносистематики выделено более 20 генетических видов лептоспир (L. interrogans, L.biflexa, L.noguchii, L.alexanderi и т.д.).

L.interrogans включает в себя более 200 сероваров, разделенных на 23 серогруппы. В СНГ встречаются представители 13 групп, 27 серовариантов. Основные серовары: L.icterohaemorragiae, L.grippotyphosa, L.canicola, L.pomona и др.

Возбудитель был выделен в 1915 г. японским исследователем А. Инада.

Свойства

Морфология. Длинные извитые нити, много (12-20) равномерных плотно прилегающих друг к другу завитков.

Имеют форму латинской буквы «S» с крючками на концах. Спор и капсул нет, подвижны – имеют фибриллы (периплазматические

280