Новиков Д.К. Медицинская микробиология

При легких формах выявляют ПЧЗТ. При тяжелых реакция на лепромин отрицательная (вторичный иммунодефицит). Учет пробы производится через 8-24 дня (поздняя реакция).

Серологический метод. Используют РПГА с эритроцитарным диагностикумом (эритроциты, нагруженные лепромином, или туберкулином или вакцинным штаммом БЦЖ), ИФА, непрямую РИФ, преципитацию в агаре (метод двойной диффузии) или ВИЭФ.

Профилактика. Неспецифическая – изоляция больных многобациллярными формами лепры и лечение до перевода в малобациллярные формы. Изоляция детей от больных родителей, многократная вакцинация их вакциной БЦЖ. Полной защиты от проказы нет, но заболевание у вакцинированнх детей протекает в более легкой форме.

В целях специфической профилактики испытывается вакцина, полученная на принципах генной инженерии (ген M. leprae встраивают в плазмиду кишечной палочки, получая специфические белки – протективные антигены). Испытывается действие убитой лепроматозной вакцины вместе с вакциной БЦЖ для групп риска. Эффект вакцинации можно проследить только через 5-10 лет.

Лечение. Используют химиотерапевтические препараты: дапсон, рифампицин, дифенилсульфон. С целью коррекции иммунодефицита применяют гамма-интерферон, гретую лепрозную вакцину с БЦЖ, моноклональные антитела. Лечение длится от 3-х до 10 лет и более.

Вставка из книги. Микобактериозы.

Кроме возбудителей туберкулеза и лепры известно множество микобактерий, которые обычно живут как сапрофиты в почве и воде. Поэтому иногда их называют «микобактериями окружающей среды» ( англ. enviromental mycobacteria). Некоторые из них вызывают оппортунистические инфекции у животных и человека, которые принято называть микобакте-риозами.

Клиническая значимость. Основные виды микобактерийсапрофитов, которые могут вызывать заболевания у человека, приведены в табл. .

Таблица

Основные возбудители микобактериозов человека

261

Фотохромогенные виды. Эта группа содержит три вида — Mycobacterium kansasii, М. simiae и М. marinum. Первые два хорошо рас-

тут при 37°С и выделяются преимущественно при легочных заболеваниях. М. marinum (ранее называвшийся «бациллами туберкулеза рыб») является причиной бородавчатой кожной инфекции, известной как «гранулема плавательных бассейнов». Этот вид плохо или совсем не растет при 37°С, и поэтому культуры из кожных повреждений должны инкубироваться при 33°С. При микроскопии М. kansasii и М. marinum часто выглядят как удлиненные палочки, расчлененные на бусинки.

Скотохромогенные виды. Основной патоген этой группы — М. scrofulaceum. Как следует из названия, он вызывает золотуху, или шейный лимфаденит, хотя может поражать и легкие. М. szulgai изредка вызывает заболевания легких и бурсит. Он скотохромоге-нен при 37°С, но фотохромогенен при 25°С. М. gordonae (paнее М. aguae) - редкая причина патологии легких, но часто обнаруживается в воде и контаминирует клинический материал.

Нефотохромогенные виды. Наиболее распространенные и важные для людей патогены — М. avium и близкородственный ему М. intracellulare. Эти виды обычно классифицируют вместе как М. avium- комплекс или М. avium-intracellulare. Большинство клинических изолятов дают гладкие, легко эмульгируемые колонии, которые легко типируются в реакции агглютинации. Известно 28 серотипов, хотя нередко встречаются и нетипируемые штаммы. Этот комплекс является причиной лимфаденитов, легочных и диссеминированных поражений, особенно у больных СПИДом. М. avium вызывает туберкулез у птиц, лимфаденит у свиней, а также изредка у других диких и домашних животных. М. avium-комплекс близко связан с тремя видами микобактерий, патогенных для животных: М. paratuberculosis — возбудителем хронического гипертрофического энтерита крупного рогато-

262

го скота (Johne'disease), М. sylvaticum — причиной туберкулеза лесных голубей и М. lepraemurium — возбудителем проказоподобной болезни крыс, мышей и кошек. М. paratu-berculosis и М. sylvaticum

продуцируют мало (или вовсе не продуцируют) микобактина — липидорастворимого железосвязывающего фактора (сидерофора), способствующего бактериальному росту. Поэтому его необходимо добавлять в среду, используемую для культивирования этих микобактерий.

М. xenopi, первоначально изолированный от жабы Xenopus, является термофилом и хорошо растет при 45°С. Он связан главным образом с поражениями легких, и имеет ограниченное географическое распространение. Самые известные случаи были зарегистрированы в Лондоне, юго-восточной Англии и на севере Франции. Недавно описаны два фенотипически сходных вида — М. celatum и М. branderi.

М. malmoеnse — причина легочных поражений и лимфаденита. Растит очень, медленно (для получения первичных культур часто требуется 10 недель) и может быть легко потерян, если культуры не выдерживаются длительное время. По неизвестным причинам, выделение этого вида возросло в ряде Европейских стран. В некоторых регионах (например, в северной Англии) он стал одним из наиболее распространенных видов микобактерий-сапрофитов, связанных с патологией легких.

М. ulcerans (возбудитель язвы Бурули - англ. Buruli ulcer) — очень медленно растущие микобактерий, требующие жестко лимитированного температурного режима — 31°-34°С. Колонии неокрашены или имеют бледный, лимонно-желтый цвет. В отличие от других болезнетворных микобактерий, М. ulcerans продуцирует токсин, который вызывает патогенеически значимый некроз тканей. Заражение мышей путем введения М. ulcerans в подушечки лап вызывает отек, переходящий в изъязвление и даже самоампутацию. По неизвестным причинам, в ряде случаев развивается генерализованный отек — «синдром жирной мыши».

К другим редко встречающимся патогенам этой группы относят-

ся М. tefrae, М. nonchromogenicum и М. triviale. Их иногда объединяют

вкомплекс М. terrae. М. haemophilum характеризуется потребностью

вростовых факторах (геме или других источниках железа) и изредка связан с гранулема-тозно-язвенными поражениями кожи у реципиентов ксенотрансплантатов и у других иммунокомпромитированных индивидов.

Быстрорастущие виды. Только два из быстрорастущих видов, М. chelonae и М. fortuitum, официально признаны болезнетворными для человека. Эти виды были первоначально идентифицированы соответственно как возбудители туберкулеза черепахи и лягушки. Ино-

263

гда они вызывают патологию легких или диссеминированные поражения, но в основном служат причиной постинъкционных абсцессов и раневых инфекций, включая роговичные язвы. Оба вида нехромогенны. Некоторые авторы подразделяют М. chelonae на два вида —

М. chelonae и М. absccssus, а М. fortuitum – на М. fortuitum и

М. peregrinuin. Впрочем, такая детализация с клинической точки зрения непринципиальна.

Известно и много других быстрорастущих видов микобактерий, большинство из которых пигментированы. Они очень редко ассоциированы с заболеваниями, но часто контаминируют клинический материал. Их присутствие на гениталиях и в моче, имитирует причастность к патологии. Вопреки распространенному мнению, М. smegmatis редко обнаруживается в мочеполовом тракте и, скорее всего случайно контаминирует мочу, попадая из внешней среды. Вид М. vaccae является мощным иммуномодулятором. Он ослабляет деструктивный потенциал, но усиливает протективность гарнулематозных реакций при туберкулезе. Не исключено, что убитая нагреванием вакцина из данного вида микобактерий может стать дополнением к химиотерапии туберкулеза.

14.4. Патогенные актиномицеты

Актиномикоз – хроническое гранулематозное гнойное поражение различных систем и органов, которое характеризуется инфильтрацией тканей с последующим нагноением и образованием свищей.

Таксономия. Порядок Actinomycetales, семейство

Actinomycetaceae, род Actinomyces, виды: A.israelii, A.bovis, A.naeslundii, A.viscosus и др.

Первое описание этого заболевания у людей в 1845 г. было сделано В. Лангенбеком, в чистой культуре возбудитель был выделен в 1887 г. К. Гарцем и в 1888 г. М. Афанасьевым.

По уровню организации, способу размножения актиномицеты имеют сходство с грибами, но ядерный аппарат представлен нуклеоидом, они чувствительны к действию бактериофагов, антибиотиков, хорошо растут на искусственных питательных средах со слабощелочной реакцией, относятся к прокариотам и являются бактериями (хотя название «Actinomyces» состоит из двух слов: actis – луч и myces – гриб).

Свойства

Морфологические. Актиномицеты могут быть представлены прямыми или изогнутыми палочками, часто образуют нити. Имеют ветвистый несептированный субстратный или воздушный мицелий со спорами. Грамположительны, есть варианты кислотоустойчивые и

264

кислоточувствительные, неподвижны, размножаются спорами, почкованием, фрагментацией. Некоторые актиномицеты могут образовывать полисахаридную капсулу вокруг нитей мицелия. В поражённых тканях они образуют друзы (переплетающийся мицелий).

Культуральные. Среди актиномицетов встречаются факультативные и строгие анаэробы, последние чаще являются патогенными. Для своего роста актиномицеты нуждаются в СО2. Хорошо растут на кровяном, сывороточном агаре, среде Сабуро. На кровяном агаре дают гемолиз, на других плотных средах молодые колонии плоские, легко снимающиеся с агара, зрелые культуры могут быть бугристыми, восковидными, крошковидными, более плотно связаны со средой. Актиномицеты могут иметь различные, растворимые в воде, спирте, и нерастворимые пигменты различного цвета (красного, фиолетового, зеленого). Рост медленный, от 7 до 14 дней. Могут диссоциировать на R- и S-формы, давать гладкие и паукообразные колонии.

Антигены. Имеют видовой антиген клеточной стенки. Актиномицеты разделены на 5 серогрупп, обозначаемых большими буквами алфавита (А, В, D, Е, F).

Биохимические свойства. A.israelii – строгие анаэробы, колонии паукообразные, метаболизируют ксилозу, маннозу, маннит. A.bovis – строгие анаэробы, группа F, колонии гладкие, разлагают крахмал, остальные биохимические свойства непостоянные.

Распространение и экология. Основной возбудитель актиномикоза человека – это A.israelii, реже A.bovis. Актиномицеты входят в состав нормальной анаэробной микрофлоры ротовой полости, ЖКТ, влагалища, много их в строме зубного камня, криптах миндалин, слюнных железах, в конкрементах (камнях) желчевыводящих и мочевых путей. Они естественным путём выделяются в окружающую среду, где могут сохраняться длительное время, нечувствительны к высушиванию, замораживанию и оттаиванию. Антисептики действуют на актиномицеты в высоких концентрациях, как на споровые культуры. Они могут размножаться в окружающей среде при температуре от 3-70С до 400С. Оптимальная температура роста 35-370С. В окружающей среде находятся и другие виды актиномицетов, выделяемые животными и человеком. В природе они встречаются во всех географических широтах. Среди актиномицетов есть штаммы, которые участвуют в образовании витаминов группы В, обладают антагонистической активностью, продуцируют антибиотики (стрептомицин). Они, как правило, являются факультативными анаэробами, а строгие анаэробы (A.israelii) вызывают патологические изменения.

Характеристика заболевания

265

Актиномикоз может развиваться в результате экзогенного и эндогенного инфицирования, чаще в результате аутоинфекции на фоне иммунодефицитов, травм, гнойно-воспалительных заболеваний.

Источник инфекции – люди и многие животные.

Пути передачи – воздушно-капельный, контактный, аутоиммунный, реже алиментарный.

Входные ворота – кожа и слизистые Патогенез. Возбудитель распространяется гематогенно и лимфо-

генно. В тканях актиномицеты образуют друзы, вокруг них скапливаются лейкоциты, формируется грануляционная ткань, в которой много плазматических, эпителиоидных клеток и фибробластов. В центре этого образования происходит некроз клеток, распад тканей. В очаги проникают фагоциты, поглощают кусочки мицелия и мигрируют в другие ткани, вызывая образование вторичных друз. Могут присоединяться вторичные инфекции за счет гноеродных кокков. При метастазировании актиномицетов в головной мозг, средостение заболевание часто заканчивается летально (рис. 16).

Выделяют несколько клинических форм заболевания: острую и хроническую; шейно-лицевую, торакальную, абдоминальную и др. Течение заболевания утяжеляется иммунодефицитами, аутоиммунными реакциями и ПЧЗТ.

Иммунитет не формируется. Антитела не выполняют защитной функции.

Лабораторная диагностика

Материал для исследования: гной из свищей, мокрота, моча, трупный материал и т.д.

Методы исследования.

Бактериоскопический метод. Готовят препарат «раздавленная капля», эмульгируя материал в 10-20% щёлочи и слегка подогревая препарат. Можно готовить мазки и окрашивать их по РомановскомуГимзе. Обнаруживаются друзы или нити тонкого несептированного неветвящегося мицелия. Друзы представляют собой агрегаты мицелия, имеют вид округлых или овальных базофильных масс с эозинофильными структурами на поверхности.

Бактериологический метод. Материал засевают на кровяной, сывороточный агары, среду Сабуро или бульоны. Посевы инкубируют 1- 2 недели в аэробных и анаэробных условиях. Идентификацию проводят с учётом культуральных, биохимических и антигенных свойств.

Аллергический метод. Выявляют ПЧЗТ с актинолизатом. Серологический метод. В парных сыворотках определяют нарас-

тание титра антител в ИФА, РСК, ВИЭФ, РИФ (непрямой вариант метода). Параллельно используют реакцию торможения миграции лейкоцитов с актинолизатом для оценки клеточного иммунитета.

266

Профилактика только неспецифическая.

Лечение. Антибиотики тетрациклинового ряда, клиндамицин, эритромицин. Длительность приёма лекарственных препаратов составляет не менее 4-6 недель. Используют и хирургические методы – иссечение пораженных тканей. Применяют актинолизат из аутоштаммов, иммуностимуляторы (левамизол, продигиозан), лазеро- и физиотерапию.

14.5. Листерии

Листерии – возбудители зоонозного заболевания, которое сопровождается поражением нервной системы, лимфатических узлов и септицемией.

Первое описание возбудителя листериоза в 1911 г. было сделано Халфесом. В 1929 г. А. Нифельдт выделил возбудителя от человека с ангиной и высоким моноцитозом. В 1940 г. возбудитель был переименован в Listeria monocytogenes, а заболевание получило название листериоза.

Таксономия. Семейство Corynebacteriaceae, род Listeria, виды L.grayi, L.ivanovii, L.monocytogenes, L.murrayi, L.seeligeri и др., типовой вид L.monocytogenes.

Свойства

Морфологические. Листерии представляют собой мелкие грамположительные коккобактерии. Они не имеют спор, капсул, являются перитрихами. В мазках могут располагаться беспорядочно, под углом друг к другу, цепочками или параллельными рядами.

Культуральные. Листерии факультативные анаэробы, культивируются на слабощелочных питательных средах. Рост скудный. При посеве сплошным газоном дают голубоватый тонкий налет, который легко смывается. Смыв имеет слизистый характер, обладающий запахом творога или молочной сыворотки за счет накопления продуктов углеводного обмена. Хорошо растут на средах с глюкозой, диссоциируя на S- и R-формы. На кровяном агаре дают зоны -гемолиза. Селективной средой является кровяной агар с трипафлавином и налидиксовой кислотой. Оптимальная температура роста 370С, но могут расти и при низких температурах. S-формы – мелкие, круглые, слабовыпуклые, полупрозрачные колонии. R-формы – шероховатые, грубозернистые колонии с неровными краями.

На жидких средах листерии дают равномерное помутнение с последующим образованием осадка.

Биохимические. Выражена сахаролитическая активность. Разлагают до кислоты глюкозу, мальтозу. Медленно разлагают сахарозу, глицерин и лактозу. Не ферментируют маннит и крахмал, не дают ин-

267

дола и сероводорода, не восстанавливают нитраты. Выделяют каталазу.

Антигены. Листерии имеют О- соматический, термостабильный антиген и Н- жгутиковый, термолабильный антиген. Выделяют 7 серовариантов листерий.

Факторы патогенности.

Выделяют - и -гемолизины, моноцитозстимулирующий фактор, эндотоксин, фосфолипазы, которые способствуют растворению клеточных мембран и проникновению возбудителя в макрофаги и клетки эпителия. Выражен внутриклеточный паразитизм.

Листериоз – зоонозное заболевание с природной очаговостью. Резервуаром возбудителя в природе являются многие виды грызунов. Источниками инфекции могут быть многие домашние и дикие животные, птицы.

Пути передачи. Человек заражается чаще алиментарным путём через загрязнённую возбудителем воду и пищевые продукты, реже – воздушно-капельным и контактным при разделывании мяса, обработке шкур и даже транссмиссивно через клещей и других кровососущих членистоногих. Возможен и вертикальный путь заражения плода от больной матери.

Патогенез и клинические проявления.

Листерии попадают в организм человека через воздухоносные пути, желудочно-кишечный тракт, слизистые зева, глаз, через поврежденную кожу. Благодаря факторам вирулентности распространяются в организме, проникают в кровь, лимфу. Могут поражать миндалины, печень, селезёнку, надпочечники, центральную нервную систему. В результате клинические проявления заболевания очень разнообраз-

ны. Чаще встречается ангино-септическая форма, реже нервная, гла- зо-железистая и септико-гранулематозная у новорожденных. Про-

гноз чаще благоприятный, но листериоз у беременных приводит к гибели плода.

Иммунитет носит клеточный характер, в меньшей степени – гуморальный. Активированные Т4-лимфоциты и естественные киллеры выделяют гамма-интерферон, который стимулирует макрофаги. Последние выделяют ИЛ-12, оказывающий активирующее действие на Т4-лимфоциты, естественные киллеры и их пролиферацию. После заболевания формируется долгоживущий клон клеток памяти, это обеспечивает стойкий иммунитет.

Лабораторная диагностика

Материал зависит от стадии и формы заболевания. Исследуют слизь из зева, пунктат увеличенных лимфоузлов, кровь, ликвор, у новорожденных – пуповинную кровь. При гибели плода исследуют секционный материал.

268

Бактериологический метод. Исследуемый материал засевают на глюкозо-печёночный или глюкозо-глицериновый бульон. Культивируют при 370С до трёх недель. Суточные колонии, имеющие зоны гемолиза, изучают под микроскопом. Затем пересевают на глюкозокровяной агар или другие плотные среды. Они имеют сине-зелёную окраску. Выделенную культуру идентифицируют по морфологическим, культуральным, тинкториальным, биохимическим и антигенным свойствам в реакции агглютинации.

Серологический метод используют со второй недели заболевания в динамике. Ставят РСК, реакцию агглютинации, ИФА или непрямую РИФ.

Экспресс-диагностика. Для выявления антигена в исследуемом материале используют РИФ. Можно использовать полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Реже применяют биологическую пробу на белых мышах. После гибели мышей делают протокольные посевы из внутренних органов трупа, выделяют и идентифицируют культуру.

Профилактика только неспецифическая. Она сводится к комплексу санитарно-ветеринарных мероприятий, проводимых в животноводческих хозяйствах, на бойнях. В очагах проводят дератизацию, уничтожение бродячих кошек и собак. В неблагоприятных по листериозу районах молочные продукты подлежат обязательной термической обработке.

Лечение. Проводится антибиотиками ( -лактамы, макролиды) и витаминами.

269

XV. ПАТОГЕННЫЕ СПИРОХЕТЫ

Таксономия. Представители патогенных спирохет относятся к 2-

м семействам – Spirochaetaceae и Leptospiraceae, которые входят в порядок Spirochaetales. Возбудителями болезней у человека являются представители родов Borrelia и Treponema, входящие в первое семейство. Семейство Leptospiraceae включает род Leptospira, который также содержит патогенных представителей.

15.1. Трепонемы

Таксономия. Семейство Spirochaetaceae, род Treponema, вид

T.рallidum. Этот вид включает в себя несколько подвидов (субвидов): T.pallidum вызывает венерический и врожденный сифилис во

всех странах мира.

T.endemicum bejel (беджель) – возбудители невенерического сифилиса в арабских странах, где находятся эндемические очаги этой инфекции.

T.carateum вызывает хронический трепонематоз (пинта). Заболевание распространено в Центральной и Южной Америке.

T.pertenuе вызывает фрамбезию или тропический сифилис в странах Африки, Центральной Америки, Индии, Индонезии и других.

T.vincentii – участник смешанной инфекции, приводящей к развитию язвенно-некротической ангины.

15.1.1. Возбудитель сифилиса Сифилис – хроническое венерическое заболевание с вариабель-

ным и цикличным течением, при котором поражаются все органы. Возбудитель был открыт в 1905 г. (Э.Гофман, Ф.Шаудин) при микроскопии в «темном» поле отделяемого из сифилитической язвы.

Свойства

Морфология и структура. Трепонемы имеют извитую форму, 8- 12 равномерных мелких завитков, их структура представлена цитоплазматическим цилиндром, который снаружи покрыт чехлом, под ним располагаются трехслойная наружная клеточная стенка и цитоплазматическая мембрана. Спор и капсул не имеют, но могут в неблагоприятных условиях образовывать цисты (трепонема скручивается и покрывается плотной оболочкой), переходить в L-форму. Подвижны, имеют глубокие и поверхностные фибриллы с двух концов (периплазматические жгутики), которые располагаются между клеточной стенкой и ЦПМ.

Трепонемы содержат около 40% липидов, очень мало нуклеопротеидов, вследствие чего плохо окрашиваются анилиновыми красите-

270