4 курс / Оториноларингология / Иммуноцитологические_исследования_в_оториноларингологии_Арефьева

ноглобулины и компоненты комплемента, которые, опсонизируя микроор-

ганизмы, делают более доступным захват возбудителя. У нейтрофилов на по-

верхности клеток имеются рецепторы к иммуноглобулинам и компонентам комплемента: СЗb и C3b/C4b, к хематтрактантам (С5а), а также формилме-

тионилпептидам, лейкотриену В4, гидроксиэйкозатетраеновой кислоте, ре-

цепторы к лимфокинам. Наиболее специфичным опсонином является IgG

(Хахалин Л.Н., 1981), для которого у 72–94% нейтрофилов на мембране имеются Fc-рецепторы (Пауков B.C., Кауфман О.Я., 1983).

Исследователи B.C. Пауков и О.Х. Кауфманн (1983) отмечают, что нейтрофилы выделяют фактор, стимулирующий фагоцитоз. В настоящее время показано, что нейтрофил в ответ на стимуляцию способен выраба-

тывать множество цитокинов разнонаправленного действия (ИЛ-1, ИЛ-8,

ФНО-альфа, ИЛ-10, ИЛ-4, ИЛ-2, ИЛ-17, ИФ-гамма) (Зурочка А.В. с соавт.,

2016).

Процесс секреции содержимого гранул в окружающую среду и про-

цесс фагоцитоза тесно связаны друг с другом. Авторы считают, что выброс содержимого гранул начинается уже в момент сближения нейтрофила с объ-

ектом фагоцитоза. Следует отметить, что поглощение во многом зависит от поглощаемого объекта. Объект должен активировать нейтрофил, возбуждая его функциональную трансформацию.

Существует два механизма разрушения поглощенного материала в фа-

гоцитах: зависящий от кислорода и связанный с ферментами лизосом. Де-

грануляция вторичных гранул начинается через 10–30 секунд, первич-

ных – через 3 минуты после контакта мембраны фагоцита с объектом фа-

гоцитоза. Максимальная дегрануляция развивается примерно через 15 ми-

нут после активации мембраны. Если дегрануляция произошла до закрытия псевдоподий и образования фагосомы, ферменты лизосом секретируются во внешнюю среду. Другой важный механизм бактерицидности фагоцити-

рующих клеток – окислительный взрыв, развивающийся через 30–60 се-

20

кунд после активции мембраны. Мощная бактерицидная система фагоци-

тов включает также перекись водорода и ионы галидов. Реакция между ними катализируется миелопероксидазой (Редькин А., 1991).

Уничтожение микробного патогена является конечным результатом сложной цепи событий, нарушение в каждом звене которой ведет к сниже-

нию активности защиты (Ахкямов Э.М., 1998). Однако не всегда поглощен-

ный материал подвергается полной биодеградации. Многие из микроорга-

низмов в процессе эволюции выработали механизмы защиты от цитотокси-

ческих продуктов нейтрофила. Незавершенный фагоцитоз имеет место при ряде инфекций, вызванных возбудителями острых и хронических забо-

леваний (Коротяев А.И., Бабичев С.А., 1998; Долгушин И.И., Буха-

рин О.В., 2001; Кильсенбаева Ф.А. с соавт., 2002).

Нейтрофил очень тесно взаимодействует практически со всеми гумо-

ральными и клеточными системами крови. В кооперативных процессах нейтрофил, с одной стороны, выступает как клетка-мишень, с другой – как клетка-регулятор. В качестве клетки-мишени нейтрофил выступает для мо-

нонуклеарных лейкоцитов (Плехова Н.Г., Исачкова Л.М., 1997).

А.Н. Маянский (1987) отмечает, что, погибая, нейтрофил оставляет запас бактерицидных веществ, которые высвобождаясь из разрушенной клетки, продолжают борьбу, образуя внеклеточные нейтрофильные ло-

вушки. Продукты распада клеток оказывают повреждающее действие на слизистые оболочки (Арефьева Н.А., 1990). Выполняя защитную роль,

нейтрофил способен причинить вред, вызывая альтерацию той ткани, ко-

торую он инфильтрирует (Алмазов В.А. и соавт., 1979; Маянский А.Н., Ма-

янский Д.Н., 1983). Сами нейтрофильные внеклеточные ловушки (НВЛ)

представляют собой нити ДНК с адсорбированными на них антимикроб-

ными факторами гранул и обеспечивают внеклеточный захват патогенов

(Brinkmann V. et al., 2004). Процесс формирования нейтрофилами внекле-

точных ловушек является функцией альтернативной фагоцитозу (Долгу-

шин И.И. с соавт., 2009), осуществляется только активными клетками и

21

является механизмом антимикробной защиты (Fuchs Т.A. et al., 2007; Medina Е., 2009; Долгушин И.И. с соавт., 2009; Савочкина А.Ю., 2012). Фор-

мирование НВЛ может происходить двумя способами: везикулярным и ли-

тическим. Сначала формируются везикулы с ДНК, которые окружены ядерной мембраной, перемещаются в межклеточное пространство, без раз-

рушения плазматической мембраны и за пределами клетки, мембраны ве-

зикул разрываются, высвобождая хроматин с образованием экстрацеллю-

лярной сети. Этот процесс разворачивается в течение нескольких минут после стимуляции нейтрофила. При этом нейтрофилы сохраняют свою жизнеспособность (Савочкина А.Ю., 2012). Если действие активатора про-

должается, запускаются механизмы литического образования ловушек.

При литическом варианте нейтрофил претерпевает морфологические изме-

нения – ядерная мембрана разрушается и хроматин занимает всю клетку.

Гранулы растворяются и компоненты будущей ловушки распределяются по всему объему, клетка сокращается до тех пор, пока ее мембрана не лоп-

нет, нейтрофил погибает, а высокоактивная смесь выбрасывается наружу

(Brinkmann V., 2004; Martinelli S., 2004; Fuchs T.A. et al., 2007). Попав в ловушки, микроорганизмы погибают под влиянием бактерицидных ве-

ществ, входящих в состав экстрацеллюлярной сети (Urban C.F. et al., 2006; Wartha F. et al., 2007). Однако некоторые бактерии способны выживать в НВЛ (Sumby P. et al., 2005; Buchanan J.T. et al., 2006; Wartha F. et al., 2007).

Таким образом, нейтрофилы обладают богатым арсеналом цитоток-

сических продуктов, которые, несмотря на определенные механизмы дей-

ствия каждого из них, способны в целом обеспечивать с большим запасом широкий спектр антимикробной активности. Дефект одного или несколь-

ких механизмов может существенно не сказаться на антимикробном потен-

циале клетки, поскольку компенсируется другими факторами. Однако гру-

бые врожденные или приобретенные повреждения ключевых звеньев бак-

терицидности снижают цитотоксичность нейтрофила (Долгушин И.И., Бу-

харин О.В., 2001).

22

Нейтрофил является движущим началом воспаления, о котором можно говорить только тогда, когда появится скопление нейтрофилов в од-

ном месте в форме инфильтрата (Маянский Д.Н., 1991). Степень вовлече-

ния нейтрофилов отражает глубину патологического процесса (Маян-

ский A.M., Маянский Д.Н., 1983). Экссудативные нейтрофилы отличаются по ряду признаков от клеток, находящихся в кровеносном русле, что можно объяснить рядом причин. Покидая кровь, лейкоциты вступают во взаимо-

действие с эндотелиальными клетками, активно влияющими на их функци-

ональное состояние. Немаловажную роль играет своеобразие микросреды,

с которой нейтрофилы сталкиваются во внесосудистом русле. Здесь (осо-

бенно в зоне воспаления) формируется концентрат медиаторных молекул,

побуждающих клетки к peaлизации их эффекторного потенциала. Наконец,

не проходит бесследно и контакт с соединительно-тканным матриксом, на котором происходит закрепление – адгезия нейтрофилов после выхода из сосудов (Маянский А.Н. с соавт., 1999).

1.2. Моноциты / макрофаги

Моноциты впервые были описаны П. Эрлихом в 1891 году. Они пред-

ставляют собой клетки диаметром 9–15 мкм, ядро круглое, овальное или бо-

бовидной формы с одним или двумя ядрышками, обильная цитоплазма имеет гранулярную структуру благодаря обильному содержанию лизосом и митохондрий (рис. 6, 7). Моноциты ведут свое происхождение от общих грануломоноцитарных клеток – предшественников, которые в свою очередь происходят от единой полипотентной гемопоэтической стволовой клетки

(Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000).

23

Рис. 6. Моноцит венозной крови (х630)

Рис. 7. Моноциты капиллярной крови (х630)

24

В костном мозге клетки проходят стадии монобласта, промоноцита и,

дозревая до стадии моноцита, поступают в кровоток (Ярилин А.А., 1999).

После непродолжительной циркуляции (от 36 до 104 часов) клетки перехо-

дят в ткани, где приобретают структуру и свойства, характерные для них

(Кисляк Н.С., Ленская Р.В., 1978; Козинец Г.И., 1997). После превращения в макрофаг размеры клетки увеличиваются, диаметр достигает от 20–25 до

60 мкм, ядро сравнительно небольшое, округлое с нежной структурой, мо-

жет содержать ядрышко (рис. 8, 9, 10).

Рис. 8. Макрофаги назальной слизи больного хроническим гнойным риносинуситом (х630)

25

Рис. 9. Макрофаги промывной жидкости из воспаленной пазухи больного хроническим гнойным риносинуситом (х630)

Рис. 10. Макрофаг из лакуны небной миндалины больного хроническим тонзиллитом (х630)

26

Цитоплазма макрофагов значительно превосходит размеры ядра, со-

держит включения в виде частиц, поврежденные ядра, обрывки цито-

плазмы, иногда целые клетки (Абрамов М.Г., 1979). Цитоплазма также со-

держит большое количество лизосом, среди которых различают незрелые и азурофильные гранулы, более развитым становится аппарат Гольджи и эн-

доплазматический ретикулюм (Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000).

В тканях процесс трансформации моноцитов в макрофаги сопровож-

дается возрастанием числа неровностей на наружной мембране, что по-

вышает способность клетки прочно прилипать к чужеродной поверхности

(Луговская С.А., 1997).

Очень незначительная часть макрофагов (менее 5%) проявляет спо-

собность к однократному делению. В основном обновление пула тканевых макрофагов происходит за счет притока моноцитов из кровяного русла.

Быстрый прирост числа макрофагов в очаге острого воспаления также обеспечивается в основном притоком моноцитов из кровяного русла, хотя способность макрофагов к делению в очаге воспаления возрастает. На месте хронического воспаления нередко образуется гранулома, которая содержит макрофаги, происходящие из моноцитов и являющиеся результатом мест-

ного деления мононуклеарных фагоцитов. Активированные макрофаги грануломы могут трансформироваться в «эпителиоидные клетки», а за счет слияния макрофагов образуются характерные для гранулем гигантские многоядерные клетки (Маянский Д.Н., 1991; Тотолян А.А., Фрейдлин И.С.,

2000).

Макрофаги – долгоживущие клетки, продолжительность их жизни составляет от 20 суток до 7 месяцев. Если не происходит их мобилизация в очаг воспаления, они могут погибать, мигрируя в селезенку или в лимфати-

ческие узлы (Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000).

Моноциты, так же как и нейтрофилы, способны к передвижению, но более прямолинейно и медленнее (Карр Я., 1978). По своим функциональ-

27

ным свойствам макрофаги делятся на два основных класса: антигенперера-

батывающие (профессиональные фагоциты) и антигенпредставляющие

(клетки, помощники в реализации иммунного ответа, иммунные аксцес-

соры) (Луговская С.А., 1997).

Основной функцией профессиональных фагоцитов являются погло-

щение и уничтожение внедрившихся микроорганизмов, поврежденных, де-

генерирующих, вирусинфицированных и опухолевых клеток, циркулирую-

щих иммунных комплексов и других антигенов (Тотолян А.А., Фрей-

длин И.С., 2000).

Микробицидная функция макрофага реализуется через дыхатель-

ный взрыв и продукцию специфических молекул, которые направлены на киллинг внеклеточных объектов и деструкцию фагоцитированных микро-

организмов. Представление антигена осуществляется менее эффективно,

чем у антигенпредставляющнх макрофагов (Луговская С.А., 1997).

К антигенпредставляюшим клеткам относят фолликулярные денд-

ритные клетки, интердигитирующие клетки, клетки Лангерганса. В неболь-

ших количествах эти клетки присутствуют практически во всех зонах (Лу-

говская С.А. 1997; Cline M.J. 1994; Rosenzwajg M., Cangue В., 1996). Отли-

чительными признаками иммунных акспессеров являются низкая способ-

ность к фагоцитозу, отсутствие в цитоплазме лизоцима, наличие протеина S-

100 и АТФ-азы. Представление и связь между макрофагом и Т-лимфоцитами

– хелперами осуществляются с помощью адгезионной молекулы ICAM и

др.

Рядом авторов (Яворковский Л.И., 1987; Фрейдлин И.С, 1995;

Фролова О.Е., 1998) показано, что активированные мононуклеарные фаго-

циты секретируют более 100 биологически активных вешеств, которые об-

ладают эффекторной и регуляторной активностью и способны запускать дополнительные каскады воспалительных реакций: системы комплемента,

кининов и свёртывания крови (Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000).

Участие макрофагов в противоопухолевой и противовирусной защите

28