2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Культуральные_методы_диагностики_туберкулеза
.pdfПриложение 1
Списки оборудования и расходных материалов для микробиологической лаборатории противотуберкулезной службы
Т а б л и ц а 1
Минимальный стандартный список оборудования, необходимого для выполнения микробиологических (микроскопических и культуральных) исследований
по диагностике и контролю химиотерапии туберкулеза
№ |
Наименование оборудования |
Кол- |
|
и его основные технические характеристики |
во |
||
|
|||
|
|
|
|
|
Ламинарный шкаф для защиты персонала и окружающей среды I класса биологи- |
|
|
1 |
ческой безопасности с вертикальным потоком воздуха и фильтром «HEPA» (для |
1 |
|
проведения процесса пробоподготовки). |
|||
|
Рекомендуемая ширина рабочей поверхности шкафа – 1200–1500 мм, |
|
|
|
2 электрические розетки, освещение, УФ-лампа |
|
|
|
Ламинарный бокс (для защиты персонала, окружающей среды и продукта) |
|
|
2 |
II класса биологической безопасности с вертикальным потоком воздуха и филь- |
1 |
|
тром «HEPA» (для проведения посевов и приготовления мазков). |
|||
|
Рекомендуемая ширина рабочей поверхности бокса – 1500 мм, |
|
|
|
2 электрические розетки, освещение, УФ-лампа |
|
|
|
Ламинарный бокс (для защиты персонала, окружающей среды и продукта) |
|
|
|
II класса биологической безопасности с вертикальным потоком воздуха и филь- |
|
|
3 |
тром «HEPA» (для проведения тестов на лекарственную чувствительность и для |
1 |
|
процессов с использованием жидких питательных сред и автоматизированных |
|||
|
или полуавтоматизированных систем). |
|
|
|
Рекомендуемая ширина рабочей поверхности бокса – 1500–1800 мм, |
|
|
|
2 электрические розетки, освещение, УФ-лампа |
|
|
|
Вытяжной шкаф (для окраски мазков). |
|
|
4 |
Рекомендуемая ширина рабочей поверхности шкафа – 1200 мм. |
1 |
|
В шкафу должен быть подвод воды и отвод для канализационного стока; реко- |
|||
|
мендуется наличие встроенной в шкаф двухсекционной раковины для окраски |
|
|
|
мазков, размер каждой из секций раковины приблизительно равен 400×400 мм |
|
|
5 |
Микроскоп световой бинокулярный с иммерсионным объективом (×90–100) и |
1 |
|
окулярами (×8 или ×10) и функционирующим предметным столиком |
|||
|
|
||
|
|
|
|
6 |
Микроскоп люминесцентный |
1 |
|
|
|
|
|
|
Центрифуга антиаэрозольная рефрижераторная с ускорением 3000 g (рекоменду- |
|
|
|
ется модель, имеющая максимально возможное количество гнезд для центрифу- |
|
|
|
гирования пробирок объемом 50 мл). |
|
|
|
Комплектование центрифуги: |
|
|
7 |
бакет-ротором (с 4 подстаканниками) с адаптерами для каждого из стаканов |
1 |
|
ротора, позволяющими разместить в каждом стакане по 4 пластиковые цент- |
|||
|
|
||
|
рифужные пробирки на 50 мл; крышками с зажимами для каждого стакана ро- |
|
|
|
тора, или |
|
|
|
угловым ротором на 14 гнезд для вышеуказанных центрифужных пробирок |
|
|
|
на 50 мл |
|
|
|
|
|
170 Культуральные методы диагностики туберкулеза
|
Аппарат для свертывания питательных сред типа «АСПС» (коагулятор), однока- |
|
8 |
мерный или предпочтительнее двухкамерный (t до 90 °С, принудительная венти- |
1 |
ляция, таймер 24 ч). |
||
|
Рекомендуется заказывать в качестве комплектации к аппарату четыре кассеты, |
|
|
каждая из которых предназначена только для пробирок диаметром 16 мм |
|
|
Автоклав вертикальной (или горизонтальной) загрузки для автоклавирования |
|
9 |
текучим паром на 75 л (или на 100 л). |
2 |
Рекомендуется иметь отдельный автоклав (или автоклавы) для обеззараживания |
||
|
инфицированных материалов и посуды и отдельный автоклав – для стерилиза- |
|
|
ции солевых растворов и др. |
|
10 |
Сушильно-стерилизационный (сухожаровой) шкаф для фиксации мазков. Тем- |
1 |
пературный диапазон – максимум до 200 °С, рекомендуемый объем – 40 л |
||
|
Сушильно-стерилизационный (сухожаровой) шкаф для стерилизации посуды |
|
11 |
(в комплекте с напольной подставкой). |
1 |
Температура до 200 °С минимум, вентиляция, рекомендуемый объем – не менее |
||
|
160 л |
|
12 |
Аквадистиллятор. |
1 |
Рекомендуемая производительность – 25 л/ч |
||
13 |
Весы лабораторные электронные, 500 г / 0,01 г |
1 |
|
|
|
14 |
Весы аналитические электронные, 50 г / 0,1 мг; класс точности 2 |
1 |
|
|
|
15 |
Миксер (с контейнером для миксера объемом 2 л) или турбомешалка для переме- |
1 |
шивания яичной массы при приготовлении питательных сред |
||
16 |
Лабораторный холодильник большого размера для хранения питательных сред |
1 |
(рекомендуемый объем – 800–1000 л, температура 0ѕ+4°С), со стеклянной или |
||
|
металлической дверью |
|
17 |
Двухкамерный бытовой холодильник (0ѕ+8 °С) с морозильной камерой (на –20 °С) |
1 |
для хранения инфицированных материалов и культур. Рекомендуемый объем хо- |
||
|
лодильной камеры – 200–300 л, морозильной камеры – не более 100 л |
|
|
Оборудование для термальной комнаты или термостаты на 35–37 °С для культи- |
|
18 |
вирования МБ (рекомендуемый объем термостатов – 500 л, микропроцессорное |
|
управление, принудительная вентиляция). Количество термостатов определяется |
|
|
|
в зависимости от их объема и нагрузки лаборатории |
|
19 |
Термостат электрический суховоздушный в комплекте с напольной подставкой |
2 |
для видовой идентификации МБ: один – для температуры 22 °С и второй – для |
||
|
45 °С. Рекомендуемый объем термостатов – 80 л |
|
|
Встряхиватель для гомогенизации проб диагностического материала. Рекомен- |
|
20 |
дуемая модель – скоростной платформенный встряхиватель с возвратно-посту- |
1 |
пательным движением и адаптерами для встряхивания контейнеров с мокротой |
||
|
(примерное число колебаний – 100–400 двойных ходов в минуту, амплитуда ко- |
|
|
лебаний – 20 мм) |
|
21 |
Машина для изготовления ватных пробок (рекомендуемая модель – «Тампон-1») |
1 |
|
|
|
22 |
Горелка Бунзена или спиртовка |
3 |
|
|
|
23 |
Таймер 0–60 мин или набор песочных часов на 5, 3 и 1 мин |
1 |
|
|
|
24 |
Облучатель бактерицидный переносной (рекомендуемая модель – с 6 лампами |
1 |
«Филипс») |
||
25 |
Облучатель бактерицидный настенный (рекомендуемая модель – с двумя лампа- |
|
ми «Филипс»). Минимальное количество облучателей должно соответствовать |
|
|
|
количеству имеющихся в лаборатории помещений |
|
|
|
|
Учебное пособие для проведения базового курса обучения |
|
|
|
|
|
|
|
171 |
|
|
|
|
|
|
|
специалистов бактериологических лабораторий учреждений противотуберкулезной службы |
|
|
|
|
|
|
|
|
Т а б л и ц а 2 |
||
|
|
Рекомендуемый список дополнительного оборудования, желательного |
|
|
|
для выполнения микробиологических (микроскопических и культуральных) |
|||
|
|
исследований по диагностике и контролю химиотерапии туберкулеза |
|
|
|
|
|
|
|
№ |
|
Наименование оборудования |
|
Кол- |
|
и его основные технические характеристики |
|
во |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
1 |
|
Автоматическая система регистрации роста микобактерий (для процессов с ис- |
|
1 |
|
пользованием жидких питательных сред и автоматизированных систем). |
|
||
|
|
Рекомендуемая модель – BACTEC MGIT 960 |
|
|
2 |
|
Система регистрации флуоресценции (для процессов с использованием жидких |
|
1 |
|
питательных сред и полуавтоматизированных систем). |
|
||
|
|
Рекомендуемая модель – MGIT (manual) |
|
|
3 |
|
Ламинарный шкаф для защиты продукта при приготовлении питательных сред |
|
1 |
|
(с горизонтальным или вертикальным ламинарным потоком воздуха и с УФ-лам- |
|
||
|
|
пой), рекомендуемая ширина рабочей поверхности шкафа – 1200 мм |
|
|
4 |
|
Шкаф сушильно-стерилизационный (сухожаровой) для стерилизации неболь- |
|
1 |
|
ших объемов посуды (в комплекте с напольной подставкой). Объем шкафа – 80 л, |
|
||
|
|
t – до 200 °С |
|
|
5 |
|
Шкаф сушильно-стерилизационный для подсушивания посуды в комплекте с на- |
|
1 |
|
польной подставкой. Рекомендуемый объем – 160 л |
|
||
|
|
|
|
|
6 |
|
Термостат электрический суховоздушный на 35–37 °С для инкубации образцов в |
|
1 |
|
процессе предобработки диагностического материала (в комплекте с напольной |
|
||
|
|
подставкой) |
|
|
7 |
|
Уравновешиватель центрифужных стаканов (центрифужные весы механические) |
|
1 |
8 |
|
Печка для обжига микробиологической петли (Bacti-Cinerator) |
|
1 |
9 |
|
Встряхиватель Vortex-Genie-2 (с регулировкой оборотов) |
|
1 |
10 |
|
рН-метр, класс 2 |
|
1 |
11 |
|
Плита электрическая (одна – для кипячения посуды и стекол, вторая – для вар- |
|
2 |
|
ки сред) |
|
||
12 |
|
Электрическая водяная баня с терморегулятором |
|
1 |
13 |
|
Магнитная мешалка с подогревом, с комплектом магнитов |
|
1 |
14 |
|
Лабораторная морозильная камера, от –20 до –40 °С. Рекомендуемый объем – 100 л |
|
1 |
15 |
|
Тележка лабораторная, нержавеющая сталь, 2 полки, грузоподъемность 50 кг |
|
2 |
|
|
Настольный бутылочный дозатор для розлива среды в пробирки (в комплекта- |
|
|
16 |
|
ции с бутылями). |
|
1 |
|
Рекомендуемая модель: флакон-диспенсер переменного объема (диапазон дози- |
|
||
|
|
рования 5–25 мл) с бутылями на 1 л и на 2,5 л |
|
|
17 |
|
Автоматическая пипетка, одноканальная, с переменным объемом до 200 мкл, |
|
1 |
|
со сбрасывателем, с комплектом наконечников (5000 шт.) |
|
||
18 |
|
Автоматическая пипетка, одноканальная, с переменным объемом от 200 |
|
1 |
|
до 1000 мкл, со сбрасывателем, с наконечниками (5000 шт.) |
|
||
19 |
|
Автоматическая пипетка, одноканальная, с переменным объемом от 1 до 5 мл, со |
|
1 |
|
сбрасывателем, с наконечниками (5000 шт.) |
|
||
20 |
|
Автоматическая пипетка, одноканальная, с переменным объемом от 1 до |
|
1 |
|
10 мл, со сбрасывателем, с наконечниками (5000 шт.) |
|
||
|
|
Пипеточный дозатор (ручной мини-насос для работы с любыми стеклянны- |
|
|
21 |
|
ми или пластиковыми пипетками объемом от 1 до 50 мл, диапазон дозирования |
|
1 |
|
от 0,1 до 50 мл) с набором пластиковых одноразовых пипеток на 25 и 50 мл |
|
||
|
|
(по 100 шт.) |
|
|
22 |
|
Моечная машина для лабораторной стеклянной посуды |
|
1 |
172 Культуральные методы диагностики туберкулеза
Т а б л и ц а 3
Список лабораторной посуды, инструментов и расходных материалов, необходимых для исследования 10 000 образцов в год
№ |
Наименование |
Коли- |
|
чество |
|||
|
|
||
|
|
|
|
|
Лабораторная посуда и инструменты |
|
|
|
|
|
|
1 |
Пробирка биологическая ПБ-16, диаметром 16 мм (16×150 мм) с неразверну- |
12 000 |
|
|
тым краем, толстостенная |
|
|
2 |
Пробка силиконовая двухконусная ПС 14,5 (для пробирок см. п. 1) |
6 000 |
|
|
Колбы стеклянные (желательно из боросиликатного стекла), конические, гра- |
|
|
3 |
дуированные, термостойкие (Эрленмейера), с узким горлом: |
|
|
на 250 мл |
30 |
||
|
на 500 мл |
20 |
|
|
на 1000 мл |
10 |
|
4 |
Колбы круглые плоскодонные: |
2 |
|
на 250 мл |
|||
|
на 500 мл |
2 |
|
|
Стаканы стеклянные мерные, градуированные, термостойкие (желательно из |
|
|
|
боросиликатного стекла): |
5 |
|
5 |
на 100 мл |
||
на 250–300 мл |
5 |
||
|
|||
|
на 500–600 мл |
5 |
|
|
на 1000 мл |
5 |
|
|
Цилиндры мерные, стекло или автоклавируемый пластик: |
2 |
|
|
на 25 мл |
||
6 |
на 100 мл |
2 |
|
на 250 мл |
2 |
||
|
|||
|
на 500 мл |
2 |
|
|
на 1000 мл |
2 |
|
|
Воронки химические (лабораторные), конические, стеклянные, с узким но- |
|
|
7 |
сиком: |
2 |
|
диаметром 75–110 мм |
|||
|
|||
|
диаметром 100–150 мм |
4 |
|
|
Бутыль, коричневое стекло, с завинчивающейся крышкой: |
3 |
|
8 |
на 200 мл |
||
на 500 мл |
5 |
||
|
|||
|
на 1000 мл |
5 |
|
|
Флаконы для реагентов: |
10 |
|
|
на 50 мл |
||
9 |
на 100 мл |
10 |
|
на 250 мл |
5 |
||
|
|||
|
на 500 мл |
5 |
|
|
на 1000 мл |
2 |
|
|
Пипетки стеклянные, измерительные, градуированные, на полный слив: |
300 |
|
|
на 1 мл |
||
10 |
на 2 мл |
200 |
|
|
на 5 мл |
100 |
|
|
на 10 мл |
100 |
|
11 |
Промывочная бутыль Nalgene, пластиковая, автоклавируемая, на 500 мл |
5 |
|
(возможна замена российским аналогом) |
|||
12 |
Промывочная бутыль LDPE, пластиковая, на 250 мл (возможна замена |
10 |
|
российским аналогом) |
Учебное пособие для проведения базового курса обучения |
|
|
|
|
|
|
|
173 |
|
|
|
|
|
|
|
специалистов бактериологических лабораторий учреждений противотуберкулезной службы |
|
|
|
|
|
|
13 |
Дозировочная бутыль, пластиковая, на 100 мл |
5 |
14 |
Капельница пластиковая, 10 мл |
5 |
|
Кружки пластиковые: |
2 |
15 |
на 500 мл |
|
на 1000 мл |
2 |
|
|
на 2000 мл |
2 |
16 |
Штативы пластиковые, автоклавируемые, на 24 гнезда, для центрифужных |
8 |
пробирок объемом 50 мл, диаметром 30 мм |
||
17 |
Штативы пластиковые на 72 гнезда, автоклавируемые, для пробирок диамет- |
10 |
ром 16 мм |
||
18 |
Груша силиконовая для пипеток |
5 |
19 |
Стандарт мутности № 5 (ГИСК им. Л.А. Тарасевича) |
1 |
20 |
Жестяные пеналы для стерилизации пипеток |
4 |
21 |
Термометр, стекло, 20–110° |
2 |
22 |
Стеклянные палочки, 250 мм |
100 |
23 |
Лопаточка бактериологическая из нихрома с держателем |
50 |
24 |
Петля микробиологическая из нихрома с держателем (диаметром 3 мм) |
10 |
25 |
Пинцет, 15–20 см (анатомический, без лапок) |
2 |
26 |
Ножницы, нержавеющая сталь, 25 см |
4 |
27 |
Штатив (салазки) для окраски мазков |
2 |
28 |
Штатив для сушки мазков на 12–25 мазков |
6 |
29 |
Коробка для хранения мазков на 25–100 мазков |
20 |
30 |
Эмалированный поддон |
2 |
31 |
Контейнер для жидких отходов, термостойкий |
2 |
32 |
Поддон для твердых отходов из нержавеющей стали или пластиковый |
2 |
33 |
Шпатели для взвешивания навесок, из нержавеющей стали: |
2 |
с лопаточкой на 15 см |
||
|
с двумя микролопаточками |
2 |
34 |
Контейнер стеклянный широкогорлый для сбора диагностического мате- |
3000 |
риала из прозрачного (предпочтительно) или темного стекла объемом 100– |
||
|
125 мл |
|
|
Биксы для транспортировки и обеззараживания инфекционного материала |
|
35 |
(коробки стерилизационные без фильтров – КСК): |
10 |
объемом 6 л |
||
|
объемом 9 л |
10 |
|
объемом 12 л |
5 |
36 |
Пластиковая канистра для дистиллированной воды, 50 л |
1 |
37 |
Увеличительное стекло ×10 |
1 |
38 |
Маркеры водостойкие |
10 |
39 |
Пробирки боросиликатные на 30 мл с крышкой – винт (для постановки тес- |
500 |
тов на ЛЧ МБТ) |
||
40 |
Бусы – шарики стеклянные, боросиликатные, диаметром 3 мм (для постанов- |
1 кг |
ки тестов на ЛЧ МБТ) |
(2 уп.) |
|
|
Расходные материалы |
|
|
|
|
|
Центрифужная пробирка пластиковая, объемом 50 мл, коническая, стериль- |
|
1 |
ная, с завинчивающейся крышкой, размер пробирок 114×28 мм (по размерам |
12 000 |
должны быть совместимы с закупаемой центрифугой). Пробирки упакованы |
||
|
по 25–50 штук в полиэтиленовые пакеты (без штативов) |
|
|
|
|
2 |
Контейнеры для мокроты пластиковые, одноразовые |
12 000 |
|
|
|
174 Культуральные методы диагностики туберкулеза
3 |
Пастеровские пипетки для посевов, пластиковые, одноразовые, стерильные |
12 000 |
||
на 3–3,5 мл, градуированные, 0,25 мл (уп./10 шт.) |
||||
|
|
|
||
4 |
Стекла предметные для микроскопа (25×75×1,2 мм) |
15 000 |
||
5 |
Фильтровальная бумага или фильтры диаметром 15 см № 1 |
15 кор. |
||
6 |
Салфетки для протирания линз микроскопа |
8 |
кор. |
|
|
Бумага для взвешивания, пергаментная: |
|
|
|
7 |
размер 150×150 мм, 500 листов в упаковке |
1 |
уп. |
|
|
размер 75×75 мм, 500 листов в упаковке |
1 |
уп. |
|
8 |
Лента для автоклава индикаторная |
2 |
уп. |
|
(12 шт.) |
||||
|
|
|||
9 |
рН-бумага или лента |
2 |
рулона |
|
10 |
Парафильм |
1 |
|
|
11 |
Восковые карандаши |
10 |
||
12 |
Ручка шариковая, черная или синяя |
24 |
||
13 |
Ручка шариковая, красная |
12 |
||
14 |
Вата хлопковая |
4 |
кг |
|
15 |
Марля |
10 м |
||
16 |
Перчатки латекс, одноразовые, medium, размер № 7 |
2 |
000 |
|
17 |
Халаты одноразовые |
250/ |
||
человека |
||||
|
|
|||
18 |
Шапочки одноразовые |
250/ |
||
человека |
||||
|
|
|||
19 |
Бахилы одноразовые |
250/ |
||
человека |
||||
|
|
|||
20 |
Маски защитные (противоаэрозольные респираторы) одноразовые марки |
300 |
||
3M 9332 |
Учебное пособие для проведения базового курса обучения |
|
|
|
|
|
|
|
175 |
|
|
|
|
|
|
|
специалистов бактериологических лабораторий учреждений противотуберкулезной службы |
|
|
|
|
|
|
Приложение 2
Прописи дополнительных сред для культивирования микобактерий
Среда Попеску
Состав среды |
|
|
|
1) Раствор минеральных солей |
|
|
|
|
Квасцы железоаммонийные |
0,05г |
|
|
Магний сернокислый |
0,5 г |
|
|
Натрий лимоннокислый однозамещенный |
1,0 г |
|
|
Калий фосфорнокислый однозамещенный |
15,0 |
г |
|
Глутаминовая кислота |
10,0 |
г |
|
Глицерин |
20,0 |
мл |
|
Вода дистиллированная |
до 1000 мл |
Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в дистиллированной воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) на водяной бане. Доводят рН до 6,8–7,2 с помощью 40% NaOH. Затем солевую основу разливают в колбы по 600 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. в течение 30 минут.
2) Раствор малахитового зеленого |
|
|
|
Малахитовый зеленый |
2 г |
|
Стерильная дистиллированная вода |
100 мл |
Раствор малахитового зеленого готовится так же, как и для среды Левенштейна– Йенсена (см. аналогичный раздел в описании среды Левенштейна–Йенсена).
3) Яичная масса
Яичная масса для среды Попеску готовится так же, как и для среды Левенштейна– Йенсена (см. аналогичный раздел в описании среды Левенштейна–Йенсена).
Приготовление среды
В большую стерильную емкость, соблюдая правила стерильности, помещают сле-
дующие растворы: |
|
|
|
раствор минеральных солей |
600 мл |
|
гомогенизированная яичная масса |
1000 мл |
Смесь тщательно перемешивают и фильтруют через 4-слойный стерильный марлевый фильтр. Добавляют 20 мл раствора малахитового зеленого, тщательно перемешивают, избегая образования пены, и в течение не более 15 минут разливают в пробирки приблизительно по 5 мл, следя за тем, чтобы в растворе не сформировался осадок. Не допускайте попадания пены в пробирки!
Свертывание среды
Свертывание среды проводят в аппаратах-свертывателях «АСПС» при 85 °С в течение 20 минут.
176 Культуральные методы диагностики туберкулеза
Среда «Новая»
Реактивы
Магний сернокислый MgSO4 × 7H2O – ГОСТ 4523-77;
Натрий лимоннокислый C6H5O7Na3 × 5,5H2O – ГОСТ 22280-86;
Калий фосфорнокислый однозамещенный KH2PO4 – ТУ 6-09-5324-87;
Натрий пировинограднокислый – ТУ 6-09-08-990-83;
Глицерин C3H8O3 – ГОСТ 6259-75;
Малахитовый зеленый C52H54O12N4 – ТУ 6-09-1557-77;
Вода дистиллированная – ГОСТ 6709-77.
В |
состав питательной среды «Новая» входят следующие компоненты (в весо- |
|
вых %): |
|
|
|
Калий фосфорнокислый одноосновной |
0,05 |
|
Натрий лимоннокислый |
0,05 |
|
Магний сернокислый |
0,05 |
|
Натрий пировинограднокислый (гликокол) |
0,2 |
|
Глицерин |
3,6 |
|
Малахитовая зелень |
0,036 |
|
Желтки |
50,0 |
|
Дистиллированная вода |
до 100,0 |
Способ получения концентрированной питательной среды заключается в смешивании сухих навесок ингредиентов солей (кроме бактерицидного красителя) с желточной массой, стерилизации ингредиентов 70° этиловым спиртом, растворении бактерицидного красителя в глицерине и соединении всех компонентов среды.
Получение 1 литра концентрированной питательной среды
1)Сделать навески: однозамещенного фосфорнокислого калия – 1 г, лимоннокислого натрия – 1 г, сернокислой магнезии – 1 г, натрий пировинограднокислого (гликокола) – 4 г; каждую навеску поместить в стерильную фарфоровую ступку.
2)Простерилизовать навески путем смачивания каждой навески 1 мл 70° этилового спирта. Затем поместить ступки с навесками в термостат при температуре 37 °С и высушить при периодическом помешивании в течение 45 минут.
3)Приготовить 1 литр желточной массы. 50 штук куриных яиц обработать с целью обеззараживания 70°спиртом. Затем отделить белок от желтка. Перенести желточную массу в мерную колбу и тщательно гомогенизировать вручную.
4)Приготовить желточно-солевую смесь. К 1 литру желточной массы (по п. 3)
добавить стерильные навески (по п. 2) и перемешать.
5)Приготовить раствор бактерицидного красителя. Навеску 700 мг малахито-
вой зелени смочить 1 мл 70° спирта и соединить с 70 мл глицерина (это соответствует 1% раствору малахитового зеленого в глицерине).
6)Получение концентрированной питательной смеси. Производят соединение
1 л желточно-солевой смеси с 70 мл 1% раствора малахитового зеленого в глицерине (по п. 5) и тщательно гомогенизируют.
7)Выдерживание смеси. Полученную концентрированную питательную смесь выдерживают в течение суток при комнатной температуре.
8)Разлив концентрированной питательной среды. Разливают среду во флаконы емкостью 250 мл, которые герметично упаковывают и маркируют.
Учебное пособие для проведения базового курса обучения |
|
|
|
|
|
|
|
177 |
|
|
|
|
|
|
|
специалистов бактериологических лабораторий учреждений противотуберкулезной службы |
|
|
|
|
|
|
9)Хранение. Укупоренные флаконы с концентрированной питательной средой хранят в холодильнике при 3–5 °С.
10)Приготовление рабочей плотной питательной среды. К концентрирован-
ной питательной среде добавляют равный объем стерильной дистиллированной воды (1:1), гомогенизируют, разливают по 5 мл в пробирки. Для образования скоса питательной среды пробирки укладывают в наклонном положении в свертыватель, предварительно нагретый до 90 °С. Среду коагулируют 20 минут при температуре 82–83 °С.
11)Хранение пробирок с питательной средой. Пробирки с питательной средой могут храниться в холодильнике при температуре 5 °С в течение 4 недель. При длительном хранении необходимо пробирки герметично укупорить и поместить в полиэтиленовые пакеты, чтобы предотвратить высыхание среды.
178 Культуральные методы диагностики туберкулеза
Приложение 3
Приготовление питательных сред с противотуберкулезными препаратами
Примеры расчета чистоты и активности противотуберкулезных препаратов
Изониазид.Химическая формула C6H7N3O, М.В. 137,14. Обычно продается чистая, сухая субстанция (чистота >99%). В этом случае нет необходимости вводить дополнительные коэффициенты для расчета навески.
Рифампицин. Химическая формула C43H58N4O12, М.В. 822.94. Обычно продается сухая субстанция темно-красного цвета (чистота варьирует от лота к лоту и в зависимости от производителя 95–97%). Соответственно, поправочный коэффициент может варьировать. Для определения величины навески разделите рассчитанную величину для чистого вещества со 100% активностью на 0,95 или 0,97 или умножьте на 1,052 или 1,031 соответственно.
Этамбутол. Химическая формула C10H24N2O2 · 2HCl, М.В. 277,23.
Чистота субстанции составляет >99% сухого порошка. Химическая субстанция может адсорбировать влагу из воздуха.
Активный компонент в молекуле – C10H24N2O2. М.В. активного компонента состав-
ляет 204,30.
Молекулярныйвеснеактивногокомпонента2HClсоставляет:2×1,008+2×35,457 = = 72,93.
Общий М.В. составляет 277,3. Активность субстанции составляет: Fакт = = 204,3/277,23 = 0,737.
При содержании активного вещества более 95% введения дополнительного коэффициента на чистоту не требуется. Для определения требуемой навески разделите рассчитанную величину для чистого вещества со 100% активностью на 0,737 или умножьте на 1,357.
Дигидрострептомицин сульфат. Химическая формула C21H41N7O12 · 3/2 H2SO4, или
(эквивалентно) 2 C21H41N7O12 · 3 H2SO4, М.В. 730,71. Продаваемая субстанция представляет собой белый порошок с чистотой обычно 95–98%.
Активный компонент в молекуле C21H41N7O12, М.В. акт. = 583,37.
Неактивный компонент в молекуле – 3/2 H2SO4, М.В. неактивного компонента
1,5 × (2 × 1,008 + 32,066 + 4 × 16) = 147,36.
Молекулярный вес всей молекулы М.В. = 730,71.
Активность вещества Fакт. = 583,37 / 730,71 = 0,798, или поправочный коэффици-
ент 1,25.
В случае этого препарата необходимо учитывать также чистоту и долю адсорбированной воды. Обычно доля загрязнений и воды составляет 4–7%, соответственно, чистота вещества – 96–93%. Коэффициент коррекции, с учетом активности, в этом случае рассчитывается по формуле 1/(Fакт. × Fчист.)и составляет 1/0742 = 1,35 или
1/0,766 = 1,3.
Учебное пособие для проведения базового курса обучения |
|
|
|
|
|
|
|
179 |
|
|
|
|
|
|
|
специалистов бактериологических лабораторий учреждений противотуберкулезной службы |
|
|
|
|
|
|