- •Рецензенты:
- •1.2. Статус клинико-диагностической лаборатории
- •1.4. Организация рабочих мест и оснащение клинико-диагностической лаборатории
- •1.5. Правила безопасной работы в лаборатории
- •1.5.1. Санитарно-противоэпидемический режим в клинико-диагностической лаборатории
- •1.5.2. Средства индивидуальной защиты
- •1.5.3. Правила обеззараживания использованного биологического материала
- •1.5.4. Способы и средства дезинфекции и стерилизации изделий медицинского назначения в кдл
- •1.5.5. Противопожарная безопасность в кдл
- •1.5.6. Правила безопасной работы с едкими веществами (кислоты, щелочи)
- •1.5.7. Первая помощь пострадавшим в лаборатории
- •2.2. Средства пробоподготовки в лаборатории. Дозирующие устройства
- •2.3. Центрифугирование
- •2.4. Перемешивающие и термостатирующие устройства
- •2.5. Весоизмерительная техника
- •2.6. Лабораторные реагенты
- •Правила хранения химических реактивов
- •2.7. Правила приготовления растворов
- •Например, широко используемый для работы с клетками крови фосфатный буфер (рН 5,8-8,2) приготавливается следующим образом:
- •2.7.1. Определение рН растворов
- •2.7.2. Фильтрование
- •2.7.3. Определение плотности растворов
- •2.7.4. Измерение температуры растворов
- •2.8. Оборудование клинико-диагностической лаборатории
- •3.2. Запрос на анализ
- •3.3. Взятие материала
- •3.6. Выбор метода и режима исследования
- •3.7. Обеспечение качества лабораторных исследований
- •3.7.1. Система управления качеством лабораторных исследований
- •3.8. Представление результатов лабораторных исследований
- •3.9. Принципы оценки результатов лабораторных исследований
- •3.9.2. Референтные интервалы лабораторных показателей
- •4.1.1. Основные условия измерений при работе с фотометрической аппаратурой
- •4.1.2. Способы измерений, расчета и представления результатов фотометрии
- •4.2.1. Способы детекции результатов иммунохимической реакции
- •4.2.2. Краткий обзор некоторых иммунохимических тестов
- •4.2.3. Радиоиммунологический анализ
- •4.2.4. Иммуноферментный анализ
- •4.2.5. Иммуноблотинг
- •4.3. Методы фракционирования биологических жидкостей
- •4.3.2. Электрофорез
- •Иммуноэлектрофорез
- •Электрофорез с последующей иммунофиксацией
- •4.4. Методы микроскопии в клинико-диагностической лаборатории
- •4.4.1. Методы световой микроскопии
- •4.4.2. Современные микроскопические приборы
- •Инвертированные микроскопы проходящего света
- •Люминесцентный микроскоп
- •4.4.3. Уход за микроскопом
- •4.5. Сухая химия
- •4.6. Молекулярно-биологические методы исследований
- •4.6.1. Применение пцр в клинической практике
- •4.6.2. Пцр в реальном времени
- •Глава 1. Введение
- •Глава 2. Цель, задачи, критерии контроля качаства
- •Глава 3. Контрольные материалы
- •Глава 4. Этапы лабораторных исследований, подлежащие контролю качества
- •Глава 5. Проведение внутрилабораторного контроля
- •Глава 6. Стадии внутрилабораторного контроля
- •Глава 1. Введение
- •Глава 2. Цель и задачи
- •Глава 3. Организация внешнего контроля качества
- •Глава 4. Мероприятия внешнего контроля качества
- •Глава 5. Статистическая обработка и оценка результатов внешнего контроля качества
4.6.1. Применение пцр в клинической практике
Наиболее широко молекулярно-биологические методы используются в микробиологии, вирусологии и в онкологии.
В микробиологии и вирусологии этим методом определяют клинически важные виды бактерий, грибов, вирусов, а также оценивают их вирулентность и устойчивость штаммов к лекарствам. Применение ПЦР как метода микробиологической диагностики имеет ряд преимуществ по сравнению с традиционными методами:
Прямое определение наличия возбудителей
Высокая чувствительность
Чувствительность ПЦР тест-систем составляет 10–1000 клеток возбудителя в анализируемой пробе, в то время как чувствительность иммунологических, паразитологических тестов колеблется в пределах 103–105 клеток.
Следует, однако, отметить, что высокая чувствительность ПЦР создает и определенные клинические проблемы. В частности, встает вопрос о клиническом значении выявляемых ПЦР чрезвычайно низких количеств патогена. Кроме того, метод ПЦР сложно использовать для мониторирования эффективности терапии, в связи с тем, что метод детектирует как живые, так и погибшие микроорганизмы.
Высокая специфичность
Высокая специфичность метода обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного вида фрагмент ДНК либо РНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью специфических праймеров и специально отрабатываемыми жесткими условиями их присоединения или «отжига» к искомой молекуле ДНК.
Простота исполнения, возможность полной автоматизации и быстрота получения результатов
Использование для анализа непосредственно клинического и патологического материала
Метод ПЦР позволяет проводить определение возбудителя заболеваний непосредственно в клиническом материале (кровь, мазки, смывы, соскобы, слюна, мокрота, спинномозговая жидкость, желудочный сок, биоптаты и т.д.). Для проведения анализа не требуется выделения и выращивания культуры возбудителя.
Малое количество используемого материала для исследований
Количество исследуемого материала может составлять несколько десятков микролитров, так как в результате проведения ПЦР концентрация анализируемого участка ДНК (РНК) выявляемого возбудителя увеличивается в сотни и тысячи раз.
Возможность выявления некультивируемых, труднокультивируемых или персистирующих форм патогенных организмов
Особенно это важно при обследовании серонегативных пациентов на самых ранних стадиях развития патологического процесса, когда лечение наиболее эффективно. При диагностике с помощью ПЦР достигается размножение не тестируемого организма, а только специфического фрагмента его ДНК, являющегося маркерным для данного вида.
Исключение возможности инфицирования персонала в процессе проведения ПЦР
Исследуемый материал может быть дезинфицирован химической или термической обработкой в момент его взятия, следовательно, исключается возможность инфицирования персонала в процессе проведения ПЦР.
В онкологии метод используется для поиска клинически значимых маркеров злокачественности и определения их количества у пациентов, для определения микрометастазов и минимальной остаточной болезни, а также для контроля за результатами терапии. Метод хорошо зарекомендовал себя как очень чувствительный (~1 раковая клетка на 106 нормальных клеток) и высокоточный метод для детекции раковых клеток в жидкостях организма.
В акушерстве перспективно использование ПЦР в предимплантационной и пренатальной диагностике, скрининге новорожденных. В терапевтической практике – для оценки генетической предрасположенности к различным заболеваниям, генотипирования ферментов метаболизма лекарственных средств и выявления степени чувствительности или резистентности к определенным препаратам.