4 курс / Дерматовенерология / Клиническая_дерматология_и_венерология_2019_04
.pdf
Патоморфология кожи |
Skin pathomorphology |
Клиническая дерматология и венерология |
Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology = |
2019, т. 18, № 4, с. 491-500 |
Klinicheskaya dermatologiya i venerologiya 2019, vol. 18, no 4, pp. 491-500 |
https://doi.org/10.17116/klinderma201918041491 |
https://doi.org/10.17116/klinderma201918041491 |
Морфофункциональные изменения в коже и лимфатических узлах в ответ на введение татуировочного пигмента: экспериментальное исследование
© О.Н. КАРЫМОВ1, А.А. ВОРОБЬЕВ2, С.А. КАЛАШНИКОВА3, Л.В. ПОЛЯКОВА3
1ГБУЗ «Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии» Департамента здравоохранения Москвы, Москва, Россия;
2ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России, Волгоград, Россия;
3Пятигорский медико-фармацевтический институт — филиал ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, Пятигорск, Россия
РЕЗЮМЕ Цель: выявить динамику морфофункциональных изменений в коже и лимфатических узлах в ответ на введение татуировочного
пигмента.
Материал и методы. Эксперимент проведен с использованием 20 нелинейных крыс-самцов, материалом для исследования послужило
60 фрагментов кожи с татуажем и 45 близлежащих лимфатических узлов. Серийные срезы лимфатических узлов, окрашенные
гематоксилином и эозином, подвергли морфо- и цитоморфометрии, достоверность различий оценивали по критерию Стьюдента (t), показателю достоверности (р). Статистически значимыми различия считали при р<0,05.
Результаты. Установлено, что очаговое накопление пигментного красителя в коже крыс при выполнении татуажа наблюдалось
преимущественно в сосочковом слое дермы. Регионарные лимфатические узлы макроскопически были увеличены в размерах и имели
черный цвет; микроскопически определяли утолщение капсулы, расширение синусов, накопление пигмента в клетках ретикуло-
эндотелиальной системы и макрофагах. При морфометрии выявлено увеличение корково-медуллярного индекса в 2,53 раза по сравнению с интактной группой (p<0,05). Количество макрофагов было максимальным на 30-е сутки, превышая таковой показатель в интактной группе в 4,31 раза (p<0,05). Число дегенеративно измененных клеток уменьшалось, и на 90-е сутки количество
поврежденных клеток составило 24,63±4,95 клеток/мкм2, превышая таковой показатель в группе интактных крыс в 1,8 раза (p<0,05). Заключение. В результате комплексного динамического гистологического, цитологического, морфометрического исследования установлено, что при выполнении татуировок происходят выраженные изменения как со стороны кожи непосредственно в зоне татуажа, так и со стороны регионарных лимфатических узлов. Полученные данные свидетельствуют о вовлечении лимфатических
узлов как органов иммунной системы и формировании иммунного ответа на введение татуировочного пигмента.
Ключевые слова: татуировка кожи, татуировочный пигмент, лимфатические узлы, гистологическое исследование, морфометрический анализ.
Карымов О.Н. — https://orcid.org/0000-0002-7048-3605 Воробьев А.А. — https://orcid.org/0000-0001-8378-0505 Калашникова С.А. — https://orcid.org/0000-0002-7688-9366 Полякова Л.В. — https://orcid.org/0000-0002-5349-1435
КАК ЦИТИРОВАТЬ:
Карымов О.Н., Воробьев А.А., Калашникова С.А., Полякова Л.В. Морфофункциональные изменения в коже и лимфатических узлах в ответ на ведение татуировочного пигмента: экспериментальное исследование. Клиническая дерматология и венерология. 2019;18(4):491500. https://doi.org/10.17116/klinderma201918041491
Morphofunctional changes in the skin and lymph nodes in response to the introduction of tattoo pigment
© O.N. KARYMOV1, A.A. VOROBEV2, S.A. KALASHNIKOVA3, L.V. POLYAKOVA3
1Moscow Research and Practical Center for Dermatovenereology and Cosmetology, Department of Healthcare, Moscow, Russia;
2Volgograd State Medical University, Volgograd, Russia;
3Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute (Volgograd State Medical University), Pyatigorsk, Russia
ABSTRACT
The purpose of the study is to identify the types of morphofunctional changes in the skin and lymph nodes in response to the introduction of tattoo pigment.
Material and methods. The experiment was conducted using 20 non-linear male rats, the material for the study was 60 skin patches with tattoo and 45 nearby lymph nodes. Serial sections of the lymph nodes stained with hematoxylin and eosin were subjected to morphoand cytomorphometry, and the significance of differences was assessed by Student’s t-test (t) and a reliability index (p). Statistically significant differences were considered at p<0.05.
Results. It was established that focal accumulation of pigment dye in the skin of rats when administering tattoos was observed mainly in the papillary layer of the dermis. The regional lymph nodes were macroscopically enlarged and black in color. Microscopically determined mea-
Автор, ответственный за переписку: Калашникова С.А. — e-mail: kalashnikova-sa@yandex.ru
Corresponding author: Kalashnikova S.A. — e-mail: kalashnikova-sa@yandex.ru
Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2019, vol. 18, no. 4 |
491 |
Патоморфология кожи |
Skin pathomorphology |
surements of the thickening of the lymph node capsule, the expansion of the sinuses, and the accumulation of pigment in the cells of the re- ticulo-endothelial system and macrophages were made. Morphometry revealed an increase in the cortical-medullary index by 2.53 times as compared with the intact (non-tattooed) group (p<0.05). The number of macrophages was maximum on the 30th day, exceeding that in the intact group by 4.31 times (p<0.05). The number of degeneratively altered cells decreased, and on the 90th day the number of damaged cells was 24.63±4.95 cells/μm2, exceeding that in the group of intact rats by 1.8 times (p<0.05).
Conclusion. As a result of a complex and periodic histological, cytological and morphometric study, it has been established that when administering tattoos, pronounced changes take place both in the skin within the tattoo area and in the surrounding lymph nodes. The data from the study indicate the involvement of lymph nodes as organs of the immune system, and the formation of an immune response to the introduction of a tattoo pigment.
Keywords: skin tattoo, tattoo pigment, lymph nodes, histological examination, morphometric analysis.
Karymov O.N. — https://orcid.org/0000-0002-7048-3605
Vorobev A.A. — https://orcid.org/0000-0001-8378-0505
Kalashnikova S.A. — https://orcid.org/0000-0002-7688-9366
Polyakova L.V. — https://orcid.org/0000-0002-5349-1435
TO CITE THIS ARTICLE:
Karymov ON, Vorobev AA, Kalashnikova SA, Polyakova LV. Morphofunctional changes in the skin and lymph nodes in response to the introduction of tattoo pigment. Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology = Klinicheskaya dermatologiya i venerologiya. 2019;18(4):491-500. (In Russ.). https://doi.org/10.17116/klinderma201918041491
Внастоящее время татуировки получают все большее распространение в популяции, являясь элементом самовыражения, и/или причастности к определенной субкультуре, или статуса в иерархической лестнице. Наиболее часто для выполнения татуировок применяют синий и черный пигменты, которые
всвоем составе содержит оксид железа, углерод, измельченную древесину кампешевого дерева Haematoxylum campechianum — источника красильного вещества кампеша, или синего сандала, а также сажу, полученную в результате неполного сгорания углеводородов, которая в качестве примесей содержит полиароматические углеводороды (ПАУ) [1].
Несмотря на то что пигментные красители через кожу вводятся непосредственно в организм человека и таким образом к ним должны предъявляться требования как к фармацевтическим препаратам, пигменты не проходят обязательного сертификационного контроля перед использованием. В то же время ПАУ, неизменно входящие в состав черного красителя, обладают доказанным токсическим, мутагенным и канцерогенным действием, а также могут поглощать УФ-излучение и генерировать цитотоксический синглетный кислород, нарушающий целостность кожных покровов [1—3].
Вдоступной литературе имеются данные о накоплении пигмента в коже и возникновении патологических процессов в ответ на проведение процедуры татуажа [4—6]. Описанный нами ранее клинический случай возникновения красного плоского лишая в области татуировки свидетельствует не только о местном воздействии татуажа на кожный покров, но и о системном [7].
Выбор в качестве объекта исследования лимфатических узлов обусловлен барьерно-фильтрацион- ной и депонирующей функциями, выполняемыми в составе лимфатической дренажной системы организ-
ма. Кроме того, именно в лимфатическом узле происходит первичный контакт антигена с иммунокомпетентными клетками, что дает возможность рассматривать его как эффекторное звено иммунной системы [8—10]. В литературе есть сведения об обнаружении пигментов и продуктов их распада в лимфатических узлах, расположенных вблизи татуировки [11—13], что свидетельствует о непосредственном контакте татуировочных пигментов с иммунной системой. Однако имеющиеся сведения единичны и противоречивы, что обусловливает актуальность данного исследования.
Цель — выявить динамику морфологических изменений в коже и лимфатических узлах в ответ на введение татуировочного пигмента.
Материал и методы
Исследование выполнено в соответствии с приказом Минздрава СССР №755 от 12.08.1977 и Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в других научных целях (Страсбург, 18 марта 1986 г.) [14, 15]. В качестве экспериментальных животных были использованы 15 нелинейных половозрелых крыссамцов массой 280—320 г (n=15). Под общим обезболиванием после обработки операционного поля крысам выполнялся татуаж посредством внутримышечного введения золетила (8,0 мг/кг) в сочетании с подкожным введением атропина сульфата 0,1% раствор (0,01 мл/100 г) с использованием роторной та- ту-машинки Long Time Liner. Выбор роторных машинок является принципиальным, так как в отличие от высокотравматичных индукционных аппаратов, применяемых для выполнения классических татуировок, роторные машинки обеспечивают щадящий режим работы и меньшую глубину проникновения в
492 |
Клиническая дерматология и венерология 2019, т. 18, № 4 |
Патоморфология кожи Skin pathomorphology
ткань (0,5 мм против 1,5—2 мм у индукционных). |
нативного центра (dmax, dmin). Цитоструктуру лимфа- |
Широкая линейка цветовых пигментов, применяе- |
тических узлов исследовали с использованием мас- |
мых в настоящее время при татуаже, требует деталь- |
ляной иммерсии и морфометрической сетки |
ного исследования местной и системной реакции ор- |
(с шагом 10 мкм), которую вмонтировали в окуляр |
ганизма в каждом конкретном случае, в зависимости |
микроскопа (ув. 10×90) с подсчетом малых лимфо- |
от цвета и состава красителя. В связи с этим на пер- |
цитов, средних лимфоцитов, ретикулярных клеток, |
вом этапе нашего экспериментального исследования |
макрофагов, нейтрофилов и дегенеративно изменен- |
мы выбрали пигмент черного цвета, который был |
ных клеток, подвергшихся некрозу и/или апоптозу. |
введен крысам внутрикожно в область спины на пло- |
Микрофотографии сделаны с использованием |
щади 20 см2, что составило 1/7 от общей площади те- |
микроскопа Leiсa DM 100 с цифровой фотокамерой. |
ла животного (рис. 1). Группа контроля была пред- |
Статистическая обработка проводилась непосред- |
ставлена интактными животными (n=5). |
ственно из общей матрицы данных Exсel 7.0 |
Выведение животных из эксперимента проводи- |
(«Microsoft», США) с привлечением возможностей |
ли на 7-е, 30-е и 90-е сутки после процедуры. Осу- |
программы Statgraph 5.1 («Microsoft», США). Вычис- |
ществлен забор 60 фрагментов кожи с татуировкой и |
ляли средние величины количественных показате- |
45 близлежащих (подмышечных) лимфатических уз- |
лей и стандартные ошибки (M±m), достоверность |
лов, в качестве контроля использовали 20 фрагмен- |
различий выборок оценивали по критерию Стьюден- |
тов кожи и 15 регионарных лимфатических узлов ин- |
та (t), и соответствующему ему показателю достовер- |
тактных животных. Материал фиксировали в 10% |
ности (р). Статистически значимыми различия счи- |
растворе нейтрального формалина в течение 24 ч, за- |
тали при р<0,05. |
тем проводили по спиртам восходящей концентра- |
|
ции: 70—80—96—100° и хлороформу, заливали в па- |
Результаты и обсуждение |
рафин, изготовляли гистологические срезы, окраши- |
|
вали их гематоксилином и эозином и по Ван-Гизону |
При гистологическом исследовании кожа ин- |
[16]. |
тактных крыс имела типичное строение, эпидермис |
Морфометрический анализ лимфатических уз- |
был представлен роговым слоем из кератиноцитов, |
лов и подсчет клеточных структур был выполнен с |
зернистого слоя, состоящего из нескольких слоев |
использованием световой микроскопии в соответ- |
клеток, шиповатого слоя с неровными клетками, |
ствии со сложившимися принципами количествен- |
уплощенными по направлению к наружному слою, |
ных морфологических исследований [17, 18]. С по- |
и базальным слоем, клетки которого плотно приле- |
мощью программы Видеотест Морфо определяли |
гали к базальной мембране (рис. 2, а). Дерма была |
объемные доли (ОД) капсулы и трабекул, коркового |
представлена сосочковым и сетчатым слоями, сетча- |
вещества, мозгового вещества, корково-медулляр- |
тый слой дермы — плотной неоформленной соеди- |
ный индекс, процент первичных лимфатических |
нительной тканью с преобладанием коллагеновых |
узелков, процент вторичных лимфатических узелков, |
волокон (рис. 2, б). |
фолликулярный индекс, больший и меньший диаме- |
При гистологическом исследовании образцов ко- |
тры лимфатического узелка (Dmax, Dmin) и его герми- |
жи экспериментальных животных на всех сроках |
а/a |
б/b |
|
|
Рис. 1. Татуировка черным пигментом: выполнение татуировки крысе (а); площадь татуировки 20 см2 (б).
Fig. 1. Black pigment tattooing: rat tattooing (a); tattoo area 20 cm2 (b).
Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2019, vol. 18, no. 4 |
493 |
Патоморфология кожи |
Skin pathomorphology |
а/a |
б/b |
|
|
Рис. 2. Кожа интактной крысы (ув. 400): типичное гистологическое строение эпидермиса и дермы, окраска гематоксилином и эозином; окраска по Ван-Гизону (б).
Fig. 2. Skin of intact rat (uv. 400): typical histological structure of epidermis and dermis, coloring with hematoxylin and eosin; coloring with Van Gizon (b).
эксперимента установлено, что в эпидермисе в обла- |
нием пигмента из сосочкового слоя дермы в сетча- |
сти тату сохранялись все слои. Эпидермис был пред- |
тый слой. Так, наблюдались единичные мелкие гра- |
ставлен базальным слоем, в клетках которого опре- |
нулы пигмента в сосочковом слое дермы, которые |
делялось умеренное количество митозов, шиповатым |
располагались диффузно. Выявлялись вакуольная |
слоем, слоем зернистых клеток, содержащих значи- |
дистрофия клеток эпидермиса непосредственно |
тельное количество эозинофильных гранул, распо- |
вблизи скоплений татуировочного пигмента, массив- |
лагающихся на границе с роговым слоем, где керати- |
ное накопление черного пигмента в сосочковом слое |
ноциты образовывали чешуйки. Однако на 7-е сутки |
дермы, в зоне татуировки определялись участки ги- |
после выполнения татуировки отмечалось неравно- |
перкератоза (рис. 3, в). |
мерное распределение пигмента непосредственно |
Волокна сосочкового слоя дермы располагались |
под эпидермисом — как отдельными гранулами, так |
достаточно плотно друг к другу, были утолщены и |
и «пылевидным» распределением в сосочковом слое |
при окраске гематоксилином и эозином были пред- |
дермы. Волокна данного слоя были представлены |
ставлены гомогенными эозиновыми массами, что |
рыхлой соединительной тканью с признаками отека |
может свидетельствовать об очаговом развитии гиа- |
(рис. 3, а). |
линоза (рис. 3, г). |
Накопление красящего пигмента наблюдалось в |
На 90-е сутки основные морфологические изме- |
поверхностных слоях кожи, в частности в сосочко- |
нения наблюдались со стороны собственно дермы. |
вом слое дермы, преимущественно периваскулярно. |
Пигментный краситель накапливался преимуще- |
Сосуды дермы были неравномерного кровенаполне- |
ственно в сосочковом слое дермы, достигая в неко- |
ния, отмечалось краевое стояние лейкоцитов в сосу- |
торых случаях концевых отделов сальных желез. Ско- |
дах, что свидетельствовало о развитии воспалитель- |
пления пигмента наблюдались между придатками |
ной реакции в ответ на микроповреждения дермы. |
кожи, где присутствовало большое количество ма- |
Прилежание эпидермиса к сосочковому слою дермы |
крофагов, в цитоплазме которых выявлялись грану- |
было различным в зависимости от выраженности оте- |
лы черного цвета. При этом основная масса красите- |
ка кожи, в отдельных участках были отмечены «пу- |
ля располагалась свободно среди волокон соедини- |
стоты» между базальным слоем эпидермиса и соб- |
тельной ткани, визуализировались единичные лим- |
ственно дермой. В более глубоких слоях дермы |
фоциты, отмечалось обилие кровеносных сосудов |
(в сетчатом слое) отмечалась очаговая лейкоцитар- |
умеренного кровенаполнения (рис. 3, д). |
ная инфильтрация, представленная в основном ней- |
Наблюдалось накопление пылевидных частиц в |
трофилами с единичными эозинофилами и лимфо- |
клетках эпидермиса преимущественно базальных |
цитами (рис. 3, б). |
слоев, что свидетельствовало об активации клеток |
По мере увеличения сроков после выполнения |
Лангерганса, также относящихся к системе монону- |
татуировки (на 30-е сутки) явления отека и острого |
клеарных фагоцитов. Кроме того, выявлялись от- |
воспаления уменьшались наряду с перераспределе- |
дельные клетки волосяных фолликулов, содержащие |
494 |
Клиническая дерматология и венерология 2019, т. 18, № 4 |
Патоморфология кожи |
Skin pathomorphology |
а/a |
г/d |
б/b |
д/e |
в/с |
е/f |
Рис. 3. Кожа крысы опытной группы на 7-е сутки после выполнения татуажа.
Накопление красящего пигмента периваскулярно, неравномерное распределение пигмента, отек (а); накопление пигмента в сосочковом слое дермы, краевое стояние лейкоцитов в сосудах (б); вакуольная дистрофия клеток эпидермиса, накопление черного пигмента в сосочковом слое дермы, участки гиперкератоза (30-е сутки) (в); волокна сосочкового слоя дермы с очаговым гиалинозом (г); кожа крысы опытной группы на 90-е сутки, вакуольная дистрофия клеток эпидермиса, массивное накопление черного пигмента в сосочковом слое дермы, гиперкератоз (окраска гематоксилином и эозином; ув. 400) (д); очаговое скопление черного пигмента среди коллагеновых волокон рыхлой волокнистой соединительной ткани сосочкового слоя кожи крыс (окраска по Ван-Гизону, ув. 200) (е).
Fig. 3. Rat skin of the experimental group on the 7th day after tattooing.
Perivascular pigment accumulation, uneven pigment distribution, edema (a); pigment accumulation in the papillary layer of the dermis, leukocyte marginal position in vessels (b); vacuum dystrophy of epidermis cells, black pigment accumulation in the papillary layer of the dermis, areas of hyperkeratosis (30 days) (c); papillary dermal fibers with focal hyalinosis (d); rat skin of the experimental group on the 90th day, vacuum dystrophy of epidermal cells, massive accumulation of black pigment in the papillary dermal layer of hyperkeratosis (coloring with hematoxylin and eosin; st. 400) (e); focal accumulation of black pigment among collagen fibers of loose fibrous connective tissue of papillary layer of rat skin (coloring according to Van Gizon, uv. 200) (f).
Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2019, vol. 18, no. 4 |
495 |
Патоморфология кожи |
Skin pathomorphology |
Рис. 4. Лимфатический узел интактной крысы. Герминативные центры с центробластами, центроцитами, плазматическими клетками (окраска гематоксилином и эозином; ув. 400).
Fig. 4. Lymphatic node of intact rat. Germinative centers with centroblasts, centrocytes, plasma cells (staining with hematoxylin and eosin; uv. 400).
Рис. 5. Регионарный лимфатический узел крысы на 90-е сутки после выполнения татуировки: увеличение лимфатического уза в размерах, черный цвет за счет накопления татуировочного пигмента.
Fig. 5. Regional lymph node of the rat on the 90th day after the tattoo: increase of the lymph node in size, black color due to the accumulation of tattoo pigment.
гранулы черного цвета, что, вероятно, обусловлено способом введения краски и попаданием ее в полость волосяного фолликула. Наряду с обильным накоплением пигмента в сосочковом слое отмечались вакуолизация клеток базального слоя с пикнотическими ядрами, участки гиперкератоза, что влияет на способность эпидермиса к регенерации. Митозы клеток базального слоя были единичны.
Волокна соединительной ткани были резко утолщены, представлены гомогенными эозиновыми массами (гиалиноз), с последующим формированием келоида. Сосуды были обычного кровенаполнения.
При окраске по Ван-Гизону наибольшее количество пигмента отмечено среди волокон рыхлой волокнистой ткани, в то время как среди коллагеновых волокон плотной неоформленной соединительной ткани выявлялись единичные гранулы (рис. 3, е).
Регионарные лимфатические узлы интактных животных снаружи были покрыты тонкой соединительнотканной капсулой, с незначительным количеством клеточных элементов и четко визуализируемым корковым и мозговым веществом. Корковое вещество представлено лимфоидными фолликулами, образованными скоплением лимфоцитов. Определяются герминативные центры, включающие крупные клетки — центробласты, зрелые центроциты, а также плазматические клетки и единичные макрофаги
(рис. 4).
Паракортикальная зона содержала лимфоциты, клетки ретикулума, единичные островки плазмоцитов, расположенные между лимфоидными фолликулами. В мозговом веществе определялись трабекулы, плазматические клетки, лимфоциты и макрофаги. Синусы, представленные коллагеновыми волокнами с незначительным количеством клеток рыхлой соединительной ткани, были не расширены.
Регионарные лимфатические узлы животных с татуировкой макроскопически отличались от таковых в группе интактных крыс. Выделенные подмышечные лимфатические узлы на всех сроках эксперимента были увеличены в размерах и имели черный цвет, обусловленный накопленным в них черным татуировочным пигментом (рис. 5).
При микроскопическом изучении регионарных лимфатических узлов у крыс опытной группы на всех сроках эксперимента определялись утолщение капсулы, расширение синусов. При гистологическом исследовании ткани лимфатических узлов было установлено, что основное накопление пигмента происходило по ходу синусов. Так, лимфатический узел был покрыт соединительнотканной капсулой, от которой внутрь отходили трабекулы. В подлежащей ткани располагался краевой синус, вокруг которого наблюдалось накопление пигмента черного цвета. В дальнейшем через промежуточные синусы отток лимфы проходил в синусы мозгового вещества, по ходу которых также наблюдалось накопление пигмента.
Граница между корковым и мозговым веществом просматривалась недостаточно четко за счет выраженной диффузной инфильтрации пигментом черного цвета. Однако в корковом веществе определялись фолликулы с нечетко выраженным герминативным центром. По клеточному составу в фолликулах определялись лимфоциты, плазмоциты и единичные макрофаги. В зародышевом центре присутствовало незначительное количество пигмента, расположенного по периферии. В мозговой части узла определялись тяжи клеток и синусоиды, среди которых про-
496 |
Клиническая дерматология и венерология 2019, т. 18, № 4 |
Патоморфология кожи |
Skin pathomorphology |
Рис. 6. Очаговое и диффузное распределение черного пигмента в цитоплазме клеток ретикулоэндотелиальной системы лимфатического узла крысы (окраска гематоксилином и эозином; ув. 100).
Fig. 6. Focal and diffuse distribution of black pigment in cytoplasm of cells of the reticulo-endothelial system of the lymph node of the rat (coloring with hematoxylin and eosin; uv. 100).
исходило накопление пигмента. Морфологические изменения ткани лимфатического узла проявлялись в первую очередь накоплением пигмента в клетках ретикулоэндотелиальной системы, расположенных как очаговыми скоплениями, так и диффузно. На 7-е сутки после татуировки цитоархитектоника органа сохранялась, однако были отмечены выраженное утолщение капсулы лимфатического узла, расширение субкапсулярных и мозговых синусов, сопровождающиеся гистиоцитарной реакцией. Обнаруживалось увеличение мантийной зоны за счет лимфоидных фолликулов, количество которых возрастало параллельно с увеличением их размеров. В перикор-
тикальной зоне отмечено увеличение количества гистиоцитов и плазмоцитов, что косвенно свидетельствует об активации гуморального звена иммунитета. По всему узлу определялись крупные клетки, по-видимому, макрофаги, нагруженные татуировочным пигментом, с явлениями незавершенного фагоцитоза. Определялись единичные участки некроза в перинодулярной области с выраженной лейкоцитарной инфильтрацией, свидетельствующие о развитии воспаления. На 30-е сутки эксперимента общая картина морфологических изменений в лимфатическом узле сохранялась, вокруг некротизированных участков формировалась грануляционная ткань различной степени зрелости, определялось значительное количество свободно расположенных гранул татуировочного пигмента.
К окончанию эксперимента (90-е сутки) определялись макрофаги, накапливающие пигмент черного цвета, которые располагались как в корковом веществе лимфатического узла, так и в его мозговой части. Кроме того, часть клеток, расположенных рядом с синусоидами, содержала единичные гранулы черного цвета (рис. 6).
Обращало на себя внимание умеренное обеднение клеточными элементами ткани лимфатического узла. Несмотря на отсутствие выраженного воспаления, присутствовали реактивные изменения, которые выражались в увеличении близлежащих к пигменту лимфоидных фолликулов. Со стороны микроциркуляторного русла выявлен умеренный гиалиноз сосудов.
Результаты морфометрического исследования лимфатических узлов представлены в табл. 1.
Независимо от срока эксперимента выявлено достоверное увеличение объемной доли капсул и трабекул, максимально на 30-е сутки (в 2,21 раза), по сравнению с группой интактных животных (p<0,05).
Таблица 1. Морфометрические показатели регионарных лимфатических узлов у крыс исследуемых групп в зависимости от срока эксперимента (M±m)
Table 1. Morphometric parameters of regional lymph nodes in rats of the studied groups depending on the experiment period (M±m)
|
Показатель |
Интактные |
|
Сроки эксперимента |
|
|
животные |
7-е сут |
30 -е сут |
90-е сут |
|
|
|
||||
ОД капсулы и трабекул, % |
11,98±0,73 |
19,42±1,19* |
26,51±1,81*# |
24,11±1,09* |
|
ОД коркового вещества, % |
39,15±1,98 |
45,71±1,09* |
49,17±1,01* |
48,23±1,17* |
|
ОД мозгового вещества, % |
48,87±1,09 |
34,87±3,17* |
24,32±2,71*# |
27,66±2,13* |
|
Корково-медуллярный индекс |
0,80±0,03 |
1,31±0,04* |
2,02±0,05*# |
1,74±0,04*# |
|
Первичные лимфатические узелки, % |
49,01±1,75 |
68,93±2,03* |
57,17±0,89*# |
65,31±2,11* |
|
Вторичные лимфатические узелки, % |
50,99±4,87 |
31,07±5,11* |
42,83±3,09# |
34,69±1,09* |
|
Фолликулярный индекс |
0,96±0,09 |
2,21±0,09* |
1,33±0,11*# |
1,89±0,11* |
|
Dmax |
лимфатического узелка, мкм |
403,57±15,20 |
489,31±19,11* |
433,15±11,09*# |
371,13±14,17*# |
Dmin |
лимфатического узелка, мкм |
361,19±12,09 |
397,61±17,09 |
401,45±17,35* |
315,26±18,10*# |
dmax |
герминативного центра, мкм |
315,75±21,08 |
448,25±31,25* |
395,13±31,25*# |
267,54±23,11*# |
dmin |
герминативного центра, мкм |
189,09±11,09 |
293,11±14,09* |
254,33±15,13*# |
161,07±17,87*# |
Примечание. Здесь и в табл. 2: * — достоверные различия с группой интактных животных (p<0,05), # — достоверные различия по сравнению с предыдущим сроком (p<0,05).
Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2019, vol. 18, no. 4 |
497 |
Патоморфология кожи |
Skin pathomorphology |
Таблица 2. Клеточный состав лимфоидной ткани подмышечных лимфатических узлов у крыс исследуемых групп в зависимости от срока эксперимента, абс./100 мкм2 (M±m)
Table 2. Cell composition of lymphoid tissue of axillary lymph nodes in rats of the studied groups depending on the experiment duration, abs./100 mkm2 (M±m)
Показатель |
Интактные |
|
Сроки эксперимента |
|
|
животные |
7-е сут |
30-е сут |
90-е сут |
||
|
|||||
Большие лимфоциты |
83,17±13,25 |
231,75±21,83* |
165,15±17,31*# |
79,21±15,38# |
|
Малые лимфоциты |
2117,51±31,37 |
987,85±27,16* |
1128,45±37,50*# |
2089,23±35,18# |
|
Средние лимфоциты |
259,21±11,05 |
411,55±13,81* |
327,45±13,85*# |
219,11±12,71# |
|
Макрофаги |
61,75±4,71 |
85,25±8,31 |
265,87±11,09*# |
231,85±17,93* |
|
Нейтрофилы |
1,21±0,30 |
17,75±3,91* |
8,11±1,85*# |
7,53±1,97* |
|
Дегенеративно измененные клетки |
13,65±0,91 |
110,27±15,30* |
82,41±9,33*# |
24,63±4,95* |
Выявлено умеренное уменьшение объемной доли |
и было максимальным на 30-е сутки после выполне- |
мозгового вещества, минимальные значения кото- |
ния татуажа, превышая таковой показатель в интакт- |
рой установлены на 30-е сутки эксперимента (в 2,1 |
ной группе в 4,31 раза (p<0,05). К окончанию экспе- |
раза меньше, чем в интактной группе). |
римента (90-е сутки) по-прежнему число макрофа- |
Увеличение корково-медуллярного индекса у |
гов было достоверно больше, чем у крыс без |
крыс исследуемых групп произошло за счет расши- |
татуировки, при этом до 1/3 из них содержали грану- |
рения коркового слоя лимфатического узла (на 30-е |
лы татуировочного пигмента. |
сутки в 1,26 раза), что согласуется с результатами ги- |
Количество нейтрофилов было максимальным |
стологического исследования (p<0,05). Количество |
на 7-е сутки, в этот же срок обнаружено самое боль- |
первичных лимфатических узелков возросло в 1,41 |
шое число клеток с признаками дегенеративных из- |
раза и было максимальным на ранних сроках экспе- |
менений, подвергшихся некрозу и/или апоптозу. По |
римента (7-е сутки) параллельно с увеличением их |
мере продолжительности эксперимента на 30-е сут- |
диаметра по сравнению с животными без татуиров- |
ки количество нейтрофилов снижалось, однако и по |
ки (в 1,21 раза; p<0,05). |
окончании эксперимента их число превышало дан- |
Кроме этого, у крыс опытной группы отмечено |
ный показатель в интактной группе в 6,22 раза |
достоверное увеличение максимального и минималь- |
(p<0,05), что свидетельствует о продолжающемся |
ного диаметров герминативного центра, при этом |
воспалительном процессе. Число дегенеративно из- |
наибольшие значения данных показателей опреде- |
мененных клеток также уменьшалось, что, по- |
лялись на 7-е и 30-е сутки после процедуры татуажа |
видимому, связано с их утилизацией посредством |
(p<0,05). На поздних сроках эксперимента (90-е сут- |
апоптоза, и на 90-е сутки количество поврежденных |
ки), напротив, диаметры лимфатических узелков и |
клеток составило 24,63±4,95 клетки/мкм2, превышая |
герминативных центров уменьшались, что свиде- |
таковой показатель в группе интактных крыс в 1,8 |
тельствовало о вовлеченности регионарных лимфа- |
раза (p<0,05). Полученные данные при подсчете аб- |
тических узлов в патологический процесс, что согла- |
солютного количества клеток в ткани лимфатическо- |
суется с данными литературы [9, 19]. |
го узла полностью согласуются с данными морфоме- |
Результаты, полученные при цитоморфометрии |
трического исследования лимфатического узла по |
ткани лимфатических узлов у крыс исследуемых |
срокам и направленности выявленных изменений. |
групп, представлены в табл. 2. |
|
Представленные данные свидетельствуют об ак- |
Заключение |
тивном ответе клеточного звена иммунитета на пре- |
|
зентированный антиген в виде татуировочного пиг- |
Таким образом, в исследовании установлено, что |
мента. На ранних сроках эксперимента (7-е сутки) |
процедура татуировки сопровождается накоплением |
происходило увеличение числа активных лимфоци- |
пигментного красителя не только в коже, но и в ре- |
тов в 2,78 раза по сравнению с группой интактных |
гионарных лимфатических узлах, что связано с рас- |
животных (p<0,05). Зарегистрированное максималь- |
пространением пигмента лимфогенным путем и сви- |
ное количество больших лимфоцитов (231,75±21,83 |
детельствует о системном воздействии. |
клетки/мкм2) умеренное количество средних на фо- |
Впервые показаны морфофункциональные изме- |
не уменьшения в ткани лимфатического узла малых |
нения в коже и лимфатических узлах в ответ на введе- |
лимфоцитов (до 987,85±27,16 клетки/мкм2) пред- |
ние татуировочного пигмента в динамике. Установле- |
ставляется вполне логичным, так как при первичном |
но, что на ранних сроках после процедуры татуажа из- |
взаимодействии с антигеном в виде татуировочного |
менения в коже и ткани лимфатических узлов харак- |
пигмента происходит активная трансформация ма- |
теризуются явлениями острого воспаления, сопрово- |
лых неактивных лимфоцитов в большие лимфоциты. |
ждающимися гибелью клеток в результате некроза и |
Количество макрофагов увеличивалось на 7-е сутки |
лейкоцитарной инфильтрацией. Параллельно с этим |
498 |
Клиническая дерматология и венерология 2019, т. 18, № 4 |
Патоморфология кожи Skin pathomorphology
выявлены признаки заинтересованности клеточного |
мозгового слоя лимфатических узлов в течение всего |
звена иммунитета, выражающиеся в увеличении коли- |
эксперимента косвенно свидетельствовало об умень- |
чества и активации лимфоцитов и макрофагов. В отда- |
шении количества плазматических клеток, продуциру- |
ленные сроки после выполнения татуировки морфо- |
ющих иммуноглобулины, а следовательно, об угнете- |
функциональные изменения со стороны кожи прояв- |
нии гуморального звена иммунитета. |
лялись в виде накопления пылевидных частиц в |
Итак, в результате комплексного гистологиче- |
клетках эпидермиса (преимущественно базальных сло- |
ского, цитологического, морфометрического иссле- |
ев), что свидетельствовало об активации клеток Лан- |
дований в динамике показано, что при выполнении |
герганса, также относящихся к системе мононуклеар- |
татуировок происходят выраженные изменения как |
ных фагоцитов, и в виде формирования участков ги- |
со стороны кожи непосредственно в зоне татуажа, |
перкератоза в зоне татуировки. Со стороны регио- |
так и со стороны регионарных лимфатических узлов. |
нарных лимфатических узлов сохранялись явления гра- |
Полученные данные свидетельствуют о вовлечении |
нулематозного воспаления вокруг инородных тел (гра- |
лимфатических узлов как органов иммунной систе- |
нулы пигмента), количество нейтрофилов по- |
мы и формировании иммунного ответа на введение |
прежнему было увеличенным, определялось значитель- |
татуировочного пигмента и не противоречат имею- |
ное число макрофагов, в том числе нагруженных тату- |
щимся в литературе сведениям о заинтересованно- |
ировочным пигментом, на фоне умеренного снижения |
сти лимфатических узлов как эффекторного органа |
активных лимфоцитов. Уменьшение объемной доли |
иммунной системы при выполнении татуажа [9, 20]. |
Участие авторов:
Концепция и дизайн исследования — О.Н. Карымов, А.А. Воробьев, С.А. Калашникова
Сбор и обработка материала — О.Н. Карымов, С.А. Калашникова, Л.В. Полякова
Статистическая обработка данных — Л.В. Полякова Написание текста — О.Н. Карымов, С.А. Калашникова Редактирование — А.А. Воробьев
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Authors’ contributions:
The concept and design of the study — O.N. Karymov, A.A. Vorobev, S.A. Kalashnikova
Collecting and interpreting the data — O.N. Karymov, S.A. Kalashnikova, L.V. Polyakova
Statistical analysis — L.V. Polyakova
Drafting the manuscript — O.N. Karymov, S.A. Kalashnikova
Revising the manuscript — A.A. Vorobev
The authors declare no conflict of interest.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENСЕS
1.Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. М.: Медицина. 2002:240.
Avtandilov GG. Osnovy kolichestvennoj patologicheskoj anatomii. M.: Medicina. 2002:240. (In Russ.).
2.Бородин Ю.И. Регионарный лимфатический дренаж и лимфодетоксикация. Морфология: научно-теоретический мед. журн. 2005;127(4):2528.
Borodin YuI. Regional lymphatic drainage and lymphodetoxication. Morphology: scientific-theoretical honey. Journals. 2005;127:4:25-28. (In Russ.).
3.Бородин Ю.И. Лимфатический регион: лимфатический дренаж и лимфодетоксикация: проблемы лимфангиологии / Под ред. Ю.И. Бородина, В.И. Коненкова, А.Ф. Повещенко. Новосибирск: Манускрипт, 2010:26-33. Borodin YuI. Limfaticheskij region: limfaticheskij drenazh i limfodetoksikaciya: problemy limfangiologii / Pod red. YuI Borodina, VI Konenkova, AF Poveshchenko. Novosibirsk: Manuskript, 2010:26-33. (In Russ.).
4.Волков В.П. К вопросу о морфометрической оценке функциональной иммуноморфологии лимфоузлов: обзор литературы и новый алгоритм.
Universum: Медицина и фармакология: электрон. научн. журн. 2015;7-8(19). Volkov VP. On the question of the morphometric assessment of the functional immunomorphology of the lymph nodes: a review of the literature and a new algorithm. Universum: Medicine and Pharmacology: Electron. scientific journals. 2015;7-8(19). (In Russ.). http://7universum.com/ru/med/archive/item/2549
5.Гордова В.С., Дьячкова И.М. Антигенпрезентирующие клетки лимфоидных органов. Вестник Чувашского университета.
Gordova VS., Dyachkova IM. Antigen presenting cells of lymphoid organs.
Bulletin of the Chuvash University. 2014;2:217-224. (In Russ.).
6.Гущин Я.А. Влияние фиксирующих жидкостей на микроскопическую структуру органов мелких лабораторных грызунов / Я.А. Гущин, А.А. Мужикян. Международный вестник ветеринарии. 2014;3:88-95.
Gushchin YaA. The effect of fixing liquids on the microscopic structure of the organs of small laboratory rodents / YaA Gushchin, AA Muzhikyan. International Journal of Veterinary Medicine. 2014;3:88-95. (In Russ.).
7.Карымов О.Н. Клинический случай образования келоидного рубца на месте татуировки / О.Н. Карымов, С.А. Калашникова. Волгоградский научно-медицинский журнал. 2017;1:59-61.
Karymov ON. Clinical case of keloid scar formation at the tattoo site / ОN Karymov, SA Kalashnikova. Volgograd Medical Journal. 2017;1:59-61. (In Russ.).
8.Карымов О.Н. Клинический случай возникновения красного плоского лишая на месте татуировки / О.Н. Карымов, С.А. Калашникова, И.О. Пылаева, В.В. Писарева. Волгоградский научно-медицинский журнал. 2017;3(55):55-57.
Karymov ON. Clinical case of the occurrence of lichen planus on the tattoo site / ON Karymov, SA Kalashnikova, IO Pylaeva, VV Pisareva. Volgograd Scientific Medical Journal. 2017;3(55):55-57. (In Russ.).
9.Райт Д. Морфологическая диагностика патологий лимфатических узлов. М. 2008:176.
Rajt D. Morfologicheskaya diagnostika patologij limfaticheskih uzlov. M. 2008:176. (In Russ.).
10.Рыбакова А.В. Методы эвтаназии лабораторных животных в соответствии с европейской директивой 2010/63 /А.В. Рыбакова, М.Н. Макарова. Международный вестник ветеринарии. 2015;2:96-107.
Rybakova AV. Methods of euthanasia of laboratory animals in accordance with European Directive 2010/63 / АV Rybakova, MN Makarova. International Journal of Veterinary Medicine. 2015;2:96-107. (In Russ.).
11.Рыбакова А.В. Санитарный контроль экспериментальных клиник (вивариев) в соответствии с локальными и международными требованиями / А.В. Рыбакова, М.Н. Макарова. Международный вестник ветеринарии. 2015;4:81-89.
Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology 2019, vol. 18, no. 4 |
499 |
Патоморфология кожи |
Skin pathomorphology |
Rybakova AV. Sanitary control of experimental clinics (vivariums) in accordance with local and international requirements / AV Rybakova, MN Makarova. International Journal of Veterinary Medicine. 2015;4:81-89. (In Russ.).
12.Baumler W. Q-switch laser and tattoo pigments: first results of the chemical and photophysical analysis of 41 compounds / W Baumler, ET Eibler, U Hohenleutner, J Sens, M Landthaler. Laser Surg. 2000;26:13-21.
13.Jaeger C. Manifestation einer nickelallergie als kontaktdermatitis and permanent -make-up / C Jaeger, U Jappe. J. Dtsch. Dermatol. Ges. 2005;3:527-529.
14.Karymov ON. Reaction of the lymphatic system to tattooing / ON Karymov, SA Kalashnikova, LV Polyakova. Morhpology. 2018;3:58.
15.Kaur RR. Cutaneous allergic reactions to tattoo ink / RR Kaur, W Kirby, H Maibach. Journal of Cosmetic. Dermatology. 2009;8:295-300.
16.Kurle S. Accumulation of tattoo in sentinel lymph nodes /S Kurle, KW Schulte, B Homey. Hautarzt. 2009;60:781-783.
17.Lechner K. Black tattoo inks are a sourse of problematic substance such as dibutyl phthalate / K Lechner, F Santarelli, R Vasold, B Konig, M Landthaler, W Baumer. Contact Dermatitis. 2011;65:231-238.
18.Regensburger J. Tatto inks contain polycyclic aromatic hydrocarbons that additionaly generate deleterious singlet oxygen // J Regensburger, K Lechner, T Maisch, R Vasold, F Santarelli, E Engel, A Gollmer, B Konig, M Landthaler, W Baumer. Exp.Dermatol. 2010;19:275-281.
19.Wenzel SM. Adverse reactions after tattooing: review of the literature and comparison to results of a survey / SM Wenzel, I Rittmann, M Landthaler, W Baumer. Dermatology. 2013;226:138-147.
20.Zirkin HJ. A tattoo localized lymphadenopathy: a case report / HJ Zirkin, I Avinoach, P Edelwitz. Cutis. 2001;67:471-472.
Поступила в редакцию 19.03.19
Received 19.03.19
Принята к печати 06.07.19
Accepted 06.07.19
500 |
Клиническая дерматология и венерология 2019, т. 18, № 4 |