4 курс / Акушерство и гинекология / Перитонеальные_макрофаги_и_репродуктивная_система_женщин_Храмова

лизосом и гибели клеток. Особенно эффективно иммунодепрессивное действие антилизосомной сыворотки при попадании ее до введения антигена в макроорганизм [120]. При этом наблюдается снижение активности катепсинов как в лизосомах, так и в цитоплазме макрофагов.

Дальнейшие исследования позволили уточнить роль лизосом в процессинге антигенов. В частности, важная роль здесь отводится лизосомам в процессинге экзогенных антигенов с последующим соединением презентируемой части антигена с антигеном главного комплекса гистосовместимости класса А и экспрессией на поверхности антигенпредставляющей клетки. Эндогенные антигены перерабатываются в комплексе Гольджи и экспрессируются на мембране АПК вместе с антигеном главного комплекса гистосовместимости класса 1.

Некоторые антигены, в частности аллогенные трансплантационные антигены класса 1, презентируются без их процессинга [120]. Однако не исключена возможность воздействия на антиген лизосомных гидролаз, вышедших из лизосом и клеток [156].

Следовательно, состояние активности лизосом фагоцитирующих клеток определяет характер их разносторонних функциональных проявлений, что в конечном итоге важно для иммуногенеза, проявления неспецифической резистентности и других процессов в макроорганизме.

1.2.3. Лизосомные мембраны и их роль в функциональном проявлении фагоцитирующих клеток

Структура и функция клетки связаны с биологическими мембранами. В связи с этим успехи в изучении строения биологических мембран имеют несомненное значение для более полного понимания внутриклеточных процессов и функционирования всей клетки. Среди многих вариантов моделей строения биологической мембраны наибольшее предпочтение в настоящее время отдается жидкостно-мозаичной модели строения биологической мембраны (рис. 4), предложенной S. Singer и G. Nicolson [474].

Рис. 4. Жидкостно-мозаичная модель биомембраны (по S.J. Singer, 1974) [474].

Всоответствии с этой моделью основой биологической мембраны является липидный бислой, в который встроены молекулы белка, получившие название интегральных белков. Они тесно связаны

смембраной структурно и отражают ее различные функции. Фазное состояние липидного бислоя позволяет молекулам белка передвигаться в плоскости мембраны, что определяет проявление ряда мембранных феноменов, таких как образование кластеров, кэпирование. Это, в частности, необходимо для функционирования иммунокомпетентных клеток в процессах эндоцитоза, особенно его рецепториндуцированного варианта, при активации лимфоцитов и макрофагов и др. [52, 89].

Однако ряд объективных фактов, необъяснимых с позиции жид- ко-мозаичной модели, позволили создать новую модель мембраны, получившую название твердо-мозаичной [98]. Эта модель предполагает наличие в плазматической мембране твердо-упругого белкового каркаса, построенного из взаимодействующих молекул спектрина, анкирина, актина, тропомиозина и др. Липидный бислой с погруженными белками заполняет ячейки белкового каркаса и функционирует в соответствии с представлениями жидкостно-мозаичной модели мембраны. Как предполагает автор, твердый каркас плазматической мембраны с внутренней стороны связан с цитоскелетом цитоплазмы клетки, состоящим из микротрубочек и микрофиламентов, и непосредственно или опосредованно через вставочные белки – с интегральными белками плазматической мембраны.

Вотношении строения мембраны лизосом была в свое время разработана глобулярно-мицеллярная модель, согласно которой лизосомная мембрана представляет собой комбинацию построенных по пластинчатому и мицеллярному типу участков [298]. Данная модель используется, в частности, при анализе роли лизосом в адаптации и восстановлении [150]. Однако, по мнению А.А. Покровского и В.А. Тутельяна, принцип строения, представленный в жидкостно-мозаичной модели, может быть приемлем для построения лизосомной мембраны [161].

Отличительную особенность лизосомных мембран, определяющую уникальность их строения, составляют лизосомные ферменты за счет своеобразного их качественно-количественного состава. При этом, характерные только для лизосомных мембран ферменты принято считать специфическими маркерными ферментами лизосомных мембран. Для изучения лизосомных мембран в качестве маркерных ферментов принято использовать кислую фосфатазу, глюкуронидазу, лизоцим [181, 328]. Ранее применяемый с этой целью катепсин Д

внастоящее время не используется как маркер лизосомных мембран

всвязи с тем, что он теряет активность в культуральной среде [323]. Лизосомные мембраны обладают разнообразными функциями,

что обеспечивается как общими свойствами мембран, так и особенностями, присущими лизосомным мембранам. Одной из основных функций лизосомной мембраны является создание ограничивающего лизосомные ферменты барьера, что обеспечивает их «струк- турно-связанную латентность» [257]. Это важно в связи с тем, что

влизосомах происходит завершение формирования ферментов из проферментов и, соответственно, все ферментные системы находятся в активной, изолированной от субстратов форме [131]. При этом, латентность ферментов обеспечивается не столько их механическим отграничением лизосомной мембраной, сколько химической природой самой лизосомной мембраны за счет связывания аминогрупп гидролаз кислыми группами липопротеинового матрикса. Кроме того,

всовременных исследованиях выявлены специальные ингибиторы лизосомных ферментов, являющиеся низкомолекулярными белками, которые находятся в лизосомных мембранах [317]. Показана ингибирующая способность гликолипидов для ряда лизосомных ферменто- В-арилсульфатазы, кислой фосфатазы и др. [256].

Другая важная функция лизосомных мембран – их проницаемость для низкомолекулярных и макромолекулярных веществ, что описано в ряде обзорных работ [15, 16, 17, 197]. Среди проникающих через лизосомную мембрану веществ важное место занимают субстраты лизосомных ферментов, продукты их расщепления и сами лизосомные ферменты. Огромное значение в проявлении этой функции придается мембранным гликопротеидам, которые выполняют роль рецепторов для лизосомных гидролаз [230]. Они нужны для проникновения лизосомных гидролаз в лизосомы после их синтеза и секреции клеткой путем обратного захвата при взаимодействии находящегося на мембране рецептора с «маркером узнавания» фермента, в качестве которого выступает маннозо-6-фосфат [131].

Существует гипотеза, согласно которой так называемые «маркеры узнавания» чаще всего необходимы не столько для проникновения, сколько для удержания ферментов в лизосомах за счет их заякоривания. Заслуга открытия данного механизма принадлежит Г. Блобелю, за что

в1999 году он получил Нобелевскую премию [192]. В отношении фермента – β-глюкуронидазы, в частности, изучен якорный белок эгазин. О степени прикрепления ферментов к лизосомным мембранам говорит А.А. Покровский с соавт. [161]. Это свойство больше всего связано

с еще одной важной функцией – стабильностью лизосомных мембран. Общепринятым подходом к изучению этой функции является биохимический метод оценки отношения вышедшего из лизосом маркерного фермента (неседиминтируемый) к общему количеству фермента (неседиментируемый плюс седиментируемый, доступный для определения после разрушения лизосом воздействием детергента Тритона Х-100). А.С. Шароновым в 1989 г. [228] разработан и применен в экспериментальных и клинических исследованиях метод определения стабильности лизосомных мембран на клеточном уровне при культивировании фагоцитирующих клеток с оценкой соотношения секретированного и общего лизоцима (получают после 3-5-кратного замораживанияоттаивания клеток), являющегося маркерным ферментом лизосом.

Исследования стабильности лизосомных мембран, проведенные в различные годы разными авторами, показали ее подверженность влиянию разнообразных факторов физической, химической и биологической природы, что в конечном итоге приводит к стабилизации или лабилизации лизосомных мембран [96, 113, 185].Установлено, что через внутриклеточные мессенджеры, открытые Е. Сазерлендом (ЦАМФ) в 1957 г. и Д. Ашманом с соавт. (ЦГМФ) в 1960 г. [61], происходит проявление лизосомомебранотропного действия: вещества, активирующие ЦАМФ, например, адреналин и другие адреномиметики, ряд гормонов (глюкокортикоиды, ЛГ и другие), приводят к стабилизации лизосомных мембран, а активирующие ЦГМФ (ацетилхолин и холиномиметики, эстрадиол и другие) – к лабилизации [56, 101, 285].

1.3.Роль клеточных и гуморальных механизмов

виммунологии репродукции

Знания современной иммунологии оказались полезными в разных областях медицины, в том числе в акушерстве и гинекологии. Обобщая результаты исследований в этой области науки, В.И. Говалло назвал свой труд «Иммунология репродукции», тем самым подчеркнув значимость данного направления исследований [53]. Как считается в настоящее время, главной функцией иммунной системы в формировании приобретенного иммунитета организма является не столько противоинфекционная защита, сколько функция, обеспечивающая антигенный гомеостаз внутренней среды организма в плане контроля и регуляции процессов регенерации и репарации [162]. Поэтому система приобретенного иммунитета не только занимает позицию од-

ной из трех интегральных систем организма наряду с нервной и эндокринной системами, но и объясняет существование аутореактивных клонов иммунокомпетентных клеток (ИКК) и аутоантител. Это важно учитывать в изучении иммунологии репродукции.

Анализ литературных данных в этой области знаний позволяет судить о перспективности и значимости иммунологических исследований при функционировании репродуктивной системы организма человека.

Так, одно из первых иммунологических исследований в акушерстве было связано с изучением резус-конфликтной беременности. Как пишет Р.В. Петров, проблема гемолитической болезни, представляющей угрозу новорожденным, решена лишь у 15% женщин [153]. Работы в этом направлении не теряют своей актуальности. В частности, дано патогенетическое обоснование ведущего принципа лечения иммуноконфликтной беременности путем регуляции материнского иммунного ответа для предотвращения и снижения сенсибилизации матери [45].

Интерес представляют колебания иммунных параметров в течение менструального цикла [71, 213]. Результаты комплексного исследования клеточных и гуморальных механизмов иммунной системы при нормальном менструальном цикле, описанные З.М. Дубоссарской с соавт. [64], показывают, что в различные дни менструального цикла наблюдается подъем уровня IgA и IgG (на 13-15-й день), снижение абсолютного и относительного числа Т- и В-лимфоцитов, количества Т-супрессоров и aктивности С3-компонента комплемента (на 20-24-й день). Количество ЦИК и функциональная активность Т-лимфоцитов, оцениваемая в РБТЛ на ФГА, активность С4-компонента комплемента в динамике менструального цикла не изменяются. Причем, колебание иммунологических показателей сопряжено с изменением гормонального статуса женщин. В частности, количественные вариации Т- и В-лимфоцитов зависят от изменения уровня стероидных, кортикостероидных и гонадотропных гормонов. Уровень IgА взаимосвязан с количеством тестостерона, a IgM – с количеством эстрадиола.

У девочек-подростков 12-18 лет с нарушением менструального цикла (НМЦ) исследованы гормоны (пролактин, кортизол, эстрадиол, прогестерон, ФСГ, ЛГ) и показатели иммунной системы I и II уровня [97]. Установлено диагностическое значение уровня пролактина, соотношения ЛГ/ФСГ, содержания IgM, IgG, ЦИК, CD4 и CD8 для раннего выявления НМЦ: снижение IgG, СД4- и СД8-лимфоцитов, повышение – ЦИК, IgМ, соотношения ЛГ/ФСГ и гиперпролактине-

мия свидетельствуют о нарушении менструального цикла девочек. С.А. Заморина с соавт. [80] при исследовании фагоцитарной активности моноцитов периферической крови женщин в разные фазы менструального цикла (фолликулярную и лютеиновую), при дополнительном воздействии in vitro хорионического гонадотропина (ХГ), выявила эффект угнетения поглотительной способности моноцитов под воздействием ХГ в фолликулярную фазу и стимулирующий эффект в лютеиновую фазу цикла [2].

При исследовании иммунного статуса здоровых девочек и девушек

ввозрасте от 13 до 18 лет с первичной олигоопсоменореей (ООМ) выявлено нарушение в иммунном статусе, заключающееся в снижении Т-лимфоцитов и IgA.

Исследование гуморальных (IgА, IgМ, IgG, ЦИК, общий комплемент) и клеточных (CD/4+, CD/8+, CD-4/CD-8) иммунологических параметров у женщин фертильного возраста и в пременопаузе позволило Н.В. Изможеровой с соавт. утверждать о более напряженных процессах противоинфекционной защиты у женщин в пременопаузе [79].

Впроцессе подготовки эндометрия к имплантации эмбриона происходит сложный каскад событий. Существенную роль в этом играет апоптоз специализированных клеток эндометрия и лейкоцитов, формирующих локальную иммунную защиту эндометрия [143].

Также доказано, что апоптоз в специфических популяциях клеток эндометрия развивается в течение всего менструального цикла, определяя количественный и качественный состав клеточных субпопуляций и являясь гормонозависимым процессом [241, 293].

Установлено, что в дифференцированных клетках эндометрия и преимплантационных эмбрионах запрограммированная гибель клеток опосредована CD/8+ субпопуляцией Т-лимфоцитов (Т-киллеры) через рецепториндуцированный механизм взаимодействия Fas-рецеп- тора клеток-мишеней и Fas-лиганда эффекторных Т-лимфоцитов [158, 169, 289]. Погибшие в процессе апоптоза клетки удаляются путем фагоцитоза тканевыми макрофагами, постоянно присутствующими в эндометрии в течение всего менструального цикла, привлекаемые регулирующим хемотаксис моноцитов белком МСР-1, образующимся под контролем эстрадиола [114, 311].

Всоответствии с методическим уровнем развития иммунологии

вразные годы проводилось широкое изучение роли иммунных механизмов при физиологической и патологической беременности [182]. Отсюда известно, что при физиологической беременности уровень

сывороточного лизоцима и комплемента существенно не изменяется, в то же время С3 и С4 фракции комплемента, пропердин и β-лизины в течение беременности непрерывно возрастают [131, 221].

При беременности изменения иммунорегуляторных клеток чаще касаются Т-супрессоров, которые в процессе беременности снижаются [118, 223]. В то же время наблюдается некоторое возрастание Т-хелперов к периоду завершения беременности. Выявленные изменения иммунорегуляторных клеток расцениваются как необходимые для нормального протекания беременности и родоразрешения.

Во время беременности происходит сенсибилизация матери к антигенам плода, но при этом появляются и блокирующие антитела в отношении клеточно-опосредованных реакций [73, 187,193]. Последнее обстоятельство способствует нормальному протеканию беременности.

Ворганизме беременной женщины и роженицы появляются антитела различных классов иммуноглубулинов человека IgG, IgM, sIgA с каталитической активностью, получившие название абзимов. Они обладают свойствами нуклеаз, протеаз, фосфатаз и появляются в крови беременных женщин и молоке здоровых рожениц без каких-либо аутоиммунных нарушений. Эти антитела играют положительную роль в защите плода и родившегося ребенка от вредных факторов внешней среды [40].

Выявлено повышение функциональной активности нейтрофилов крови беременных женщин, оцениваемой по экспрессии CD49e и мРНК IL-8 и синтезу IL-8, в конце периода гестации в 38-40 недель в сравнении с данными показателями у женщин в 35-36 недель гестации, что связано с участием фагоцитов в ремоделировании ткани шейки матки при подготовке организма к родам [62].

Вконце периода гестации происходит также повышение активности естественных киллеров, восстановление нормального уровня которых наступает после родов [186].

Вэкспериментальных исследованиях in vitro И.В. Некрасова и С.В. Ширшев восполнили малоизученность вопроса иммунорегуляторного значения одного из основных гормонов беременности – эстриола. Авторами установлено, что эстриол снижает процент CD3 – CD16 + (NK) клеток, угнетает фагоцитоз, повышает уровень IL-10 [133].

Изучая механизмы контроля апоптоза нейтрофилов репродуктивными гормонами (хорионический гонадотропин, эстрадиол, прогестерон), С.В. Ширшев и Е.М. Куклина установили, что исследованные гормоны в комбинации, соответствующей III триместру беременности, способны угнетать апоптоз нейтрофилов. Это является важнейшим фактором выживания таких клеток в III триместре [233].

На течение беременности женщины может влиять часто развивающийся аутоиммунный механизм, одним из проявлений которого является антифосфолипидный синдром (АФС). При АФС образуются антифосфолипидные антитела, с появлением которых происходит нарушение развития эмбриона и плода, развивается гестоз, невынашивание беременности [189]. Выявлено, что антифосфолипидные антитела относятся к IgM и IgG, и с резким их повышением связаны развитие гестоза и репродуктивные неудачи [35, 36, 229].

Иммунологическую реактивность у женщин с физиологической и патологической беременностью изучали П.Г. Жученко с соавт., используя тесты оценки Т-лимфоцитов, иммуноглобулинов А, М, G и специфических антител к антигенам околоплодных вод. Ими было выявлено снижение абсолютного и относительного количества Т-клеток и IgG и увеличение IgM у женщин с поздним гестозом по сравнению с данными показателями у женщин с физиологической беременностью. Снижение иммунологической реактивности при позднем гестозе, по мнению авторов, способствует проявлению изосенсибилизации [68, 116].

Т.А. Старостина с соавт. [228] изучила уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), антинуклеарных антител и ревматоидного фактора, IgA, M, G в околоплодной жидкости при физиологической и осложненной гестозом беременности и влияние околоплодной жидкости на параметры клеточного иммунитета. Установлено, что уровень ЦИК, независимо от варианта течения беременности, выявляется в околоплодной жидкости в низкой концентрации. Антинуклеарные факторы и IgA с IgM в исследуемом биологическом субстрате не выявляются. IgG у беременных с гестозом в околоплодной жидкости ниже, чем при физиологической беременности, а ревматоидный фактор – выше. Околоплодная жидкость стимулирующе влияет на индекс миграции лейкоцитов и количество Е-РОК. Причем результаты оценки клеточных реакций согласуются с ранее полученными данными [186,273].

Комплексное исследование уровня иммуноглобулинов трех основных классов и ЦИК в сыворотке крови матери, пуповинной крови новорожденного при физиологической и патологической беременности позволило прийти к выводу о различиях гуморального иммунитета при физиологической беременности и гестозе. У беременных женщин перед родами, как отмечают В.П. Климевич и Т.М. Обухова, снижается активность комплемента. После родов у родильниц происходит подъем С2 и С3 компонентов комплемента [94].

Интересна динамика иммуноглобулинов классов А, М, G и Е по триместрам у женщин с физиологической беременностью и гестозом: снижение всех четырех классов иммуноглобулинов во II триместре при физиологической беременности; IgA и IgЕ после снижения во II триместре несколько возрастают в III триместре. Напротив, содержание IgM при гестозе по сравнению с физиологической беременностью в III триместре резко возрастает[86].

Э.К. Айламазян с соавт. отметили снижение IgG, значительное повышение IgЕ и ЦИК у женщин с поздним гестозом по сравнению с уровнем этих параметров у женщин с физиологической беременностью. Выявленные изменения они связывают, в определенной степени, с повышением проницаемости плацентарного барьера. Указывается на несомненное участие иммунологических механизмов в развитии позднего гестоза [3].Также установлено, что у женщин с поздним гестозом происходит снижение функциональной активности лимфоцитов на ФГА [294], повышение количества Т- и В-лимфоцитов [271, 277].

Исследование показателей иммунитета у беременных женщин, входящих в группу повышенного риска развития позднего гестоза, позволило К.В. Воронину с соавт. [132] сделать интересное наблюдение: при оценке комплекса иммунологических тестов (R-белок, IgА, М, G, HCT, естественные антитела к эритроцитам барана) наиболее важную роль в качестве диагностического критерия претоксикоза играет R-белок, представляющий собой продукты катаболизма клеточных рецепторов различных, в том числе иммунокомпетентных, клеток организма. В группах риска развития позднего гестоза (юные и пожилые первородящие, женщины с пиелонефритом, вегето-сосудистой дистонией) показатель R-белка значительно превышает показатели контроля здоровых небеременных и беременных женщин.

Иммунохимические критерии диагностики развития позднего гестоза применяли Н.В. Стрижова с соавт. [187], которые оценивали систему растворимых антигенов лейкоцитов (PAJI), отражающую разные функциональные проявления этих клеток: при позднем гестозе происходит повышение внутриклеточного содержания РAJI-5 и PAJI-8 и секреции PAJI-2, и снижение внутриклеточного PAJI-6.

Многие исследователи обратили внимание на роль естественных киллеров в развитии физиологической и патологической беременности [182, 229, 254, 268, 486].

Отмечено, что в процессе развития физиологической беременности, особенно во II триместре, уровень естественных киллеров за-

метно снижается. Напротив, поздний гестоз сопровождается высокой активностью NК-клеток, что предполагает повреждение фето-плацен- тарного барьера.

О повышении активности естественных киллеров пишут И.М. Грязнова с соавт. [65]. Причем, авторы оценивают два критерия активности естественных киллеров – цитолитическую активность и интерферонпродуцирующую способность. Исследование активности естественных киллеров в совокупности с оценкой количества активных Т-лимфоцитов позволило прийти к заключению о срыве механизмов иммунологической толерантности с активацией клеточно-опосре- дованных иммунных реакций в процессе беременности у женщин с поздним гестозом.

Изучив ряд показателей иммунной системы при различных формах гестоза, В.И. Щербаков и И.М. Поздняков [221, 231] расценили данный вид акушерской патологии как иммунологический феномен, в патогенезе которого участвуют Т-система иммунитета, фагоцитирующие клетки, циркулирующие иммунные комплексы.

Во время беременности происходит сенсибилизация матери к антигенам плода, но при этом появляются и блокирующие антитела в отношении клеточно-опосредованных реакций [79, 187,193]. Последнее обстоятельство способствует нормальному протеканию беременности.

Невынашивание и перенашивание беременности также тесно сопряжено с состоянием факторов иммунной системы.

Согласно современным представлениям о развитии самопроизвольного прерывания беременности, в его основе могут лежать иммуногенетические факторы [81], иммунологический конфликт в виде неадекватного иммунного ответа матери на фето-плацентарный комплекс, аутоиммунные процессы и иммунодефицитные состояния [4, 261].

Как показали исследования, при привычном невынашивании беременности, по сравнению с физиологической беременностью, имеет место значительное снижение активности лимфоцитов в реакции бласттрансформации на ФГА. Абсолютное и относительное количество В-лимфоцитов снижается только в I триместре у женщин, страдающих привычным невынашиванием беременности [66].

Кроме того, при невынашивании беременности происходит дисбаланс ряда гормонов гипофиза (пролактина, ФСГ, ЛГ), связанный с повышением уровня IL-4, IL-6, TNFa и снижением концентрации IL-10 [58].

У женщин с невынашиванием беременности, одной из основных причин которой является инфицирование урогенитального тракта