4 курс / Акушерство и гинекология / Гогсадзе_Л_Г_Предгравидарная_подготовка_и_особенности_течения_беременности

41

альфа (TNF-α), трансформирующему фактору роста бета (TGF-β),

сосудисто-эндотелиальному фактору роста (VEGF, клон G153-694),

маркеру пролиферирующих клеток ядерному белку Ki-67 (Ki-67, клон PC-

10), ингибитору апоптоза Всl-2 (клон 124), индуктору апоптоза Вах (клон

D0-7), эстрогеновому рецептору (ER, клон 1D5), прогестероновому рецептору (PgR, клон PgR 636), иммуноглобулинам класса М (Ig M),

иммуноглобулинам класса G (Ig G) для выявления плазмобластов и плазматических клеток, маркеру макрофагов.

После инкубации гистологических срезов с первичными антителами

(рабочее разведение антисывороток – 1:50-100, время инкубации – 45-60

мин при температуре 37ºС), их обрабатывали вторичными биотилированными антикроличьими иммуноглобулинами.

Для последующей визуализации результата реакции связывания антигена с антителом использовали систему детекции «Ultra Vision LP Value HRP Polymer» (Lab Vision, США). Применяли фермент (пероксидазу хрена) в присутствии субстрата (перекиси водорода) и специального реактива (3,3- диаминобензидин).

Конечный продукт реакции представляет собой мелкие коричневатые гранулы в участках локализации антигена. Для таких антигенов, как Ki-67, это – ядра клеток, для других – цитоплазма и/или клеточные мембраны клеток, в определенной мере - экстрацеллюлярный матрикс.

Проводили общепринятые отрицательные и положительные контрольные процедуры на используемые реагенты и ткани при обработке параллельных срезов. Отрицательный контроль заключался в проведении реакции с исключением первичных, специфических антител (путем их замены неиммунным реактивом – бычьей сывороткой) или специфических антигенов. Положительный контроль – с использованием гистологических препаратов рака молочной железы.

42

После проведения иммунопероксидазной реакции гистологические препараты докрашивали гематоксилином, изучали и фотографировали,

используя световой микроскоп DM-LB («Leica», Германия) с цифровой фотокамерой «Olympus» (Япония).

Морфометрический метод. Результаты иммуногистохимических реакций оценивали с помощью полуколичественного морфометрического метода [172]. Вычисляли среднее число плазмобластов и плазмоцитов,

экспрессирующих IgM и IgG, число макрофагов в 10 полях зрения при увеличении микроскопа х120; процент клеток, ядра которых экспрессируют белок Ki-67 в 10 полях зрения при увеличении микроскопа х 120. Применяли балльную систему для оценки экспрессии TNF-α, TGF-β, VEGF, Вах и Bcl-2. Визуально оценивали интенсивность окраски клеток в баллах от 0 до 3 (отрицательная, слабая, умеренная и выраженная окраска)

и подсчитывали процент позитивно окрашенных клеток при каждом значении интенсивности окраски (10 полях зрения при увеличении микроскопа х 120).

Коэффициент экспрессии рассчитывали для каждого наблюдения по формуле [172]:

∑ (Б х П)

100

где Б – интенсивность окраски в баллах (от 0 до 3-х), П – процент окрашенных клеток (от 0 до 100%) при каждом значении Б.

Для оценки экспрессии рецепторов эстрогенов и прогестерона использовали количественный метод с подсчетом Histochemical score (H.S.), разработанный McCarty и соавт. (1985). Система подсчета включала интенсивность иммуногистохимической окраски, оцениваемой по 3-

бальной шкале и процент окрашенных клеток, и представляла собой сумму произведений процентов, отражающих долю клеток с различной

43

интенсивностью окраски на балл, соответствующий интенсивности реакции. Подсчет проводился в трех когортах по 100 опухолевых клеток в различных полях зрения объективом х40. Интенсивность окраски оценивалась следующим образом: 0 нет окрашивания, 1 слабое окрашивание, 2 умеренное и 3 сильное окрашивание. Формула подсчета:

H-score = ∑ Pi х i,

где Pi процент клеток, окрашенных с разной интенсивностью, i

интенсивность окрашивания, выраженная в баллах от 0 до 3.

О степени экспрессии стероидных гормонов судили по результату H- score: 0-50 отрицательная, 51-100 низкая, 101-200 умеренная и 201 и

более высокая. Данные результаты опубликовани [43].

2.4. Статистические методы исследования

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием методов параметрической и непараметрической статистики [19].

Все полученные данные вносили в специально созданную реляционную базу. Данные представлены в виде M±m, где M – среднее арифметическое, m – ошибка среднего, n объем анализируемой подгруппы, р достигнутый уровень значимости.

Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез оценивали с помощью t-test, считая статистически достоверными значения «р» менее или равными 0,05.

С целью проверки однородности изучаемых параметров проводили анализ распределения полученных величин по отношению к нормальному ожидаемому распределению с использованием критерия Колмогорова-

Смирнова.

44

При анализе качественных признаков учитывали оценку долей в совокупности с расчетом стандартной ошибки доли при помощи формулы Бернулли.

Достоверность различий определяли с помощью парного и непарного критерия (t) Стьюдента для параметрических переменных, для непараметрических порядковых вариант использовались критерии Манна-

Уитни с поправкой Йейтса.

Учитывая ограничения сравнительного метода, использовался метод расчета парных корреляций Пирсона, при отсутствии предположений о характере распределения и неправильном распределении переменных – метод расчета корреляций по Спирману.

Статистическая обpаботка матеpиала выполнялась с использованием стандаpтного пакета пpогpамм пpикладного статистического анализа

«Statistica 6.0 for Windows», «Microsoft Exel 97-2000», «SPSS 11.0 for Windows».

45

ГЛАВА III

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Клинико-анамнестические особенности и факторы риска хронического эндометрита

Для решения поставленных задач проведено полное клинико-

лабораторное обследование 40 пациенток с морфологически верифицированным диагнозом хронический эндометрит (основная группа)

и 30 небеременных женщин с нормальным менструальным циклом без отягощенного акушерско-гинекологического анамнеза (контрольная группа).

Все обследованные находились в репродуктивном возрасте, который не различался в группах обследованных. Возраст пациенток с хроническим эндометритом варьировался от 17 до 36 лет и составил в среднем 31,4±5,4

года, возраст здоровых женщин соответствовал пределам 18-35 лет со средними значениями 32,1±5,5 (p>0,10). Превалирующее число, 42,5±7,8%,

больных хронически эндометритом находилось в возрастной категории 30-

36 лет, значимо больше, чем в контрольной группе обследованных и минимальное 12,5±5,2% – 17-20 лет (таб. 1).

46

Оценивая семейное положение обследованных выявлено, что среди пациенток с хроническим эндометритом незамужние отмечались в 3 раза чаще 20,0±6,3% по сравнению с группой контроля 6,7±4,6% (p<0,05).

Характеристика профессиональной принадлежности не выявила каких-либо особенностей – большинство обследованных женщин относились к группе работающих, у пациенток с хроническим эндометритом отмечена тенденция к увеличению числа домохозяек (таб.

2).

Таблица 2

Распределение обследованных по профессиональному признаку

Среди профессиональных вредностей анализировались постоянные стрессогенные ситуации, интеллектуальный труд и работа с компьютером,

тяжелый физический труд, контакт с химическими и канцерогенными веществами. Согласно представленным данным, различий между группами обследованных не выявлено – среди работающих обследованных три четвертых отмечали присутствие тех или иных профессиональных вредностей (таб. 3).

Социально-бытовые условия у обследованных обеих групп расценивались как удовлетворительные, наследственный анамнез по возникновению гинекологических заболеваний в обеих группах оценивался как не отягощенный.

47

Таблица 3

Характеристика профессиональных вредностей в группах обследованных

* – статистическая значимость различий по сравнению с контролем, p<0,05.

В ходе проведенного изучения анамнестических данных у обследованных женщин тщательно анализировались соматические заболевания, которые могут оказывать влияние на процессы становления и функционирования репродуктивной системы (таб. 4).

Обнаружено, что у пациенток с хроническим эндометритом по сравнению с показателями контрольной группы в 4 раза чаще выявлялись перенесенные детские инфекции, в 3 раза – инфекционные заболевания органов мочевыводящей системы и дисбактериоз кишечника, отмечались варикозная болезнь вен нижних конечностей, патология щитовидной железы (p<0,05). Частота выявляемости таких заболеваний, как хронический гастрит, холецитсти, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, хронический бронихит значимо не отличалась в группах обследованных (p>0,05).

48

Таблица 4

Экстрагенитальные заболевания у обследованных

* – статистическая значимость различий по сравнению с контролем, p<0,05.

При изучении гинекологического анамнеза выявлено, что возраст наступления менархе не различался у обследованных с хроническим эндометритом и контрольной группы, и составил 11,8±0,2 года и 12,3±0,3

года соответственно (p>0,05).

Оценивая характер менструальной функции, у 67,5% пациенток основной группы наблюдались нарушения менструального цикла по типу перименструальных и ациклических кровянистых выделений,

альгодисменореи и олигоменореи, что значительно превышало аналогичные показатели здоровых женщин, у которых доминирующим,

49

86,7±6,2%, являлся нормопонирующий менструальный цикл, реже, 13,3±6,2%, встречались варианты анте- и постпонирующего менструального циклов (p<0,05).

Средний возраста начала половой жизни не различался в группах обследованных – 16,6±1,9 лет в основной группе и 17,5±1,4 лет в группе контроля (p>0,05). Изучение акушерского анамнеза у пациенток с хроническим эндометриом выявило увеличение частоты неблагоприятных исходов беременности по сравнению с показателями контрольной группы

(таб.5).

Таблица 5

Акушерский анамнез у обследованных женщин

* – статистическая значимость различий по сравнению с контролем, p<0,05.

Более 57,5±7,8% больных хроническим эндометритом отмечали неудачные попытки вынашивания беременности, которые у каждой четвертой заканчивались самопроизвольным прерыванием беременности на малых сроках, у каждой третьей – неразвивающейся беременностью, и в

50

трех наблюдениях – развитием трубной беременности (p<0,05). Каждая пятая пациентка с хроническим эндометритом хотя бы однократно, чаще 2

и более раз, прерывала беременность при помощи артифициального аборта

(p<0,05). Большинство здоровых женщин выносили беременность, которая закончилась срочными родами (p<0,001).

При изучении сопутствующей гинекологической патологии выявлено значительное увеличение заболеваемости среди больных хроническим эндометритом по сравнению с контрольной группой женщин

(таб. 6).

Таблица 6

Гинекологические заболевания у обследованных женщин

* – статистическая значимость различий по сравнению с контролем,

p<0,001.