4 курс / Акушерство и гинекология / Ботвиньева_И_А_Иммунорегуляторные_белки_и_цитокины_при_беременности

111

альбумина в околоплодных водах. Эти два белка являются «классическими» маркерами при оценке нарушения селективной или неселективной проницаемости. Поскольку подобные избыточные концентрации а2-МГ в ОВ не физиологичны, они неизбежно должны оказывать патологическое влияние на локальные процессы – от прямой либо опосредованной дисрегуляции синтеза провоспалительных цитокинов, до активации воспалительных и аутоиммунных реакций в целом.

Как локальное, так и системное повреждение молекул а2-МГ при хроническом подостром воспалении (Stief T.W., et. al., 2000) может провоцировать синтез аутоантител не только к поврежденному белку но и, вполне вероятно, к его лигандам (что отчасти объясняет выявление антител к HSP 60 и ряду других белков при хламидиозе по данным Stephens A.J., et. al., 2011). Безусловно, часть обнаруживаемых нами аутоантител класса G к а2-МГ могут быть противоуглеводными, поскольку использованный нами вариант метода их определения не включает удаления последних. Однако, при изучении уровней комплексов а2-МГ-IgG при физиологически протекающей беременности и эклампсии, отличающейся явлениями демиелинизации и достаточно активным увеличением количества аутоантител в циркуляции, показано, что содержание противоуглеводных антител к а2-МГ в норме и патологии сопоставимо и составляет в среднем 20% от общего количества антител, опрелеляемых при помощи метода, использованного в нашем исследовании (Зорина В.Н., 2001). Кроме того, при проверке тест-системы в процессе ее разработки перекрестные реакции не обнаруживались, а противоуглеводные антитела полиспецифичны. Это позволяет нам предположить, что наблюдаемая в нашем исследовании тенденция к увеличению содержания комплексов а2-МГ-IgG в ВС и ПС при статистически значимом повышении их уровней в ОВ при ПВИ у новорожденного в значительной степени связана с функциональными повреждениями молекулы а2-МГ, особенно в зоне локализации патологических

112

процессов, а не с нарушениями ее поверхностной гликозилированности. Подобные иммунокомплексы, как и сами поврежденные молекулы а2-МГ с сохраненной литической активностью и повышенным аффинитетом к TNF-α, могут способствовать развитию локального аутоиммунного воспаления, возникновению множественных микроповреждений плаценты, и, особенно с учетом локального дефицита «антибактериального» ЛФ, повышают риск внутриутробного инфицирования плода.

О наличии хронического подострого воспаления при беременности у антителоносительниц, несмотря на отсутствие выраженных клинических проявлений заболевания свидетельствуют, помимо увеличения сывороточных уровней ЛФ, повышенное содержание в крови рожениц С-реактивного белка и, при рождении ребенка с признаками внутриутробного инфицирования, дополнительное снижение сывороточного альбумина.

Уровни изученных цитокинов во всех биологических жидкостях были подвержены значительной индивидуальной вариабельности. В определенной степени данный разброс концентраций может объясняться индивидуальной отвечаемостью иммунной системы женщины на наличие антител в циркуляции

исостояние возбудителя (активная либо персистирущая форма). Кроме того, подобные вариации могут быть следствием нарушения регуляторнотранспортных функций поврежденных молекул а2-МГ, заброса избытка а2-МГ

илокального дефицита ЛФ в околоплодных водах, поскольку данные белки оказывают выраженное модулирующее воздействие на синтез цитокинов (Birk-

enmeier G., 2001, Legrand D., et al., 2005). По крайней мере, нами выявлена достоверная корреляция сывороточных уровней а2-МГ и ЛФ с TNF-α и иммуномодуляторным IL-6, влияющим на синтез других цитокинов, и зависимость уровней большинства изученных цитокинов от уровней ЛФ, а также IL-6, IL-8 и IFN-γ от а2-МГ околоплодных водах при ПВИ у новорожденного. Это может свидетельствовать о том, что повреждение и

113

накопление а2-МГ, вкупе с увеличением содержания ЛФ в циркуляции венозной крови взаимосвязаны с изменениями цитокинового профиля, но наиболее важные изменения происходят именно в зоне локализации патологических процессов, где данные иммунорегуляторные белки оказывают взаимозависимое влияние на синтез цитокинов.

Не последнюю роль в высокой индивидуальной вариабельности уровней цитокинов может играть и различная «направленность» проявлений воспаления у разных женщин в ответ на наличие возбудителя – по «классическому» либо аутоиммунному типу. По крайней мере, по результатам наших наблюдений при беременности на фоне антителоносительства закончившейся рождением здорового ребенка воспалительные процессы, изменяющие молекулярный состав биологических жидкостей, несмотря на отсутствие клинических проявлений заболевания, не отличаются выраженностью аутоиммунных нарушений. И напротив, при рождении детей с признаками внутриутробного инфицирования и осложненным течением раннего неонатального периода, аутоиммунные процессы более заметны (накопление а2-МГ в ВС, повышение содержания иммунокомплексов а2-МГ-IgG в ОВ и пр.) и, вполне вероятно именно они способствуют более активному повреждению тканей, приводящему к увеличению проницаемости фетоплацентарного комплекса.

Обобщая вышеизложенное, можно заключить, что существует определенная предрасположенность к «вялотекущему варианту» хламидийной инфекции, приводящей ксинтезу IgG антител в низких титрах, при отсутствии клинических признаков заболевания, который не является основанием для специфического лечения при беременности. При этом у данной группы беременных рождаются ослабленные дети с признаками внутриутробного инфицирования, с осложнениями в раннем неонатальном периоде. Подобные женщины отличаются врожденными либо хроническими функциональными дефектами синтеза белковых компонентов врожденного иммунитета –

114

лактоферрина и альфа-2-макроглобулина. Локальный дефицит секреторного ЛФ, дополнительное повреждение молекул а2-МГ, их системное накопление и активация синтеза аутоантител к ним приводят к неадекватному развитию воспалительной реакции на хламидийный возбудитель, взаимозависимому нарушению синтеза цитокинов, повреждению тканей протеиназами и аутоантителами в т.ч. в комплексе с а2-МГ и, как следствие, к повреждению плода. Эти процессы, судя по всему, носят циклический характер и постепенно прогрессируют, достигая значительных изменений в белковом составе и цитокиновом профиле биожидкостей только на поздних сроках беременности.

Вследствие этого не представляется возможным использовать определение лактоферрина в I-II триместрах в прогностических целях (хотя можно предположить, что при более активных процессах и выраженых клинических проявлениях хламидийной инфекции подобные исследования могут быть более информативными). Однако определение уровней лактоферрина в сыворотке крови перед родами позволяет с достаточно высокой степенью вероятности прогнозировать последующее развитие осложнений раннего неонатального периода даже у женщин с низким титром антител в циркуляции без клинических проявлений заболевания и доказало свою эффективность в случаях, когда у новорожденного в первые сутки отсутствуют какие-либо признаки внутриутробного инфицирования.

Дополнительную информацию, еще до получения заключения гистологического исследования, может дать скрининг-тест на повышенное содержание а2-МГ, альбумина и сниженные концентрации ЛФ в околоплодных водах. Мы полагаем, что это позволит принять своевременные меры по предупреждению развития осложнений у новорожденного.

Оценка уровней цитокинов у рожениц при наличии IgG антител к Ch.trachomatis, судя по всему, представляет не столько практический, сколько теоретический интерес – они подвержены высокой индивидуальной

115

вариабельности и не годятся для диагностических и прогностических целей, хотя в целом подтверждают наличие воспалительной реакции у рожениц антителоносительниц, несмотря на отсутствие клинических проявлений заболевания.

Увеличение концентраций иммунокомплексов а2-МГ-IgG, появление антител к HSP 60 в венозной крови у трети беременных при наличии IgG антител к Ch.trachomatis и особенно увеличение количества данных комплексов параллельно с общим содержанием а2-МГ в ОВ подтверждает ранее высказываемые предположения о том, что повреждающее воздействие на трофобласт и плаценту оказывает не только «классическая» реакция факторов врожденного иммунитета, приводящая к локальному гиперсинтезу цитокинов, повышению сывороточного содержания СРБ, ЛФ, снижению уровней альбумина, но и аутоиммунные процессы, активнее всего выраженные именно при рождении детей с признаками внутриутробного инфицирования у женщин со средними и низкими титрами антител к Ch. trachomatis без клинических проявлений заболевания в течение беременности.

116

ВЫВОДЫ

1.В сыворотке рожениц - носительниц антител к Chlamydia trachomatis без клинических проявлений заболевания повышено содержание ЛФ и СРБ. При рождении детей с признаками внутриутробного инфицирования в 1,5 раза увеличены концентрации ЛФ, статистически значимо повышено содержание а2-МГ, TNF-α, IL-6, IL-8 и снижено - альбумина, обнаружена тенденция к накоплению иммунокомплекса а2-МГ-IgG и IgG антител HSP 60 к Ch. trachomatis у 30-40% рожениц, что свидетельствует о наличии воспаления и активации аутоиммунных реакций.

2.Выявлена прогностическая ценность определения уровня лактоферрина в венозной сыворотке крови рожениц с антителами к Ch. trachomatis для прогнозирования проявлений внутриутробного инфицирования у новорожденного. Уровни ЛФ во втором триместре беременности не зависят от состояния новорожденного.

препаратов а2-МГ и ЛФ с антигенами Chlamydia trachomatis в эксперименте in vitro подтверждающее их антибактериальную активность.

4.В пуповинной сыворотке новорожденных от носительниц антител к Chlamydia trachomatis значимо повышены уровни иммуномодуляторного лактоферрина, а также IL-6, IL-8, IL-10, вне зависимости от течения раннего неонатального периода.

117

5.При носительстве антител к Chlamydia trachomatis и рождении детей с признаками внутриутробного инфицирования, в околоплодных водах рожениц в 3 раза повышено содержание а2-МГ, в 14 раз - альбумина, в 2, 5

раза – а2-МГ-IgG, TNF-α, IL-8, IL-18, на 30% снижены уровни ЛФ и INF-γ,

что свидетельствует о нарушении проницаемости фетоплацентарного барьера и нарушениях локального синтеза компонентов врожденного иммунитета.

6.Проведенный ретроспективно коррелятивный анализ полученных данных позволил обнаружить ряд зависимостей в синтезе а2-МГ и ЛФ с синтезом некоторых цитокинов в зависимости от состояния новорожденного, особенно выраженных в содержимом околоплодных вод, что подтверждает участие данных иммуномодуляторных белков в развитии проявлений внутриутробного инфицирования.

118

Практические рекомендации

Полученные данные по участию иммунорегуляторных ЛФ и а2-МГ в процессах, приводящих к повреждению фетоплацентарного барьера и плода у носительниц антител к Chlamydia trachomatis, могут быть использованы в качестве лекционного материала для студентов биологических и медицинских ВУЗов.

Разработанные способы прогнозирования состояния плода при беременности, осложненной многоводием и наличием в крови антител класса G к Chlamydia trachomatis, без клинических проявлений (Патент №2431844 зарегистрирован 20.10.2011г.; Патент №2461006 зарегистрирован 10.09.2012г), включающие определение уровней ЛФ в ВС, а также альбумина и а2-МГ в ОВ, позволяющие прогнозировать состояние новорожденного (появление признаков инфицирования в раннем неонатальном периоде) могут быть использованы в клинической практике.

Определение сниженных уровней ЛФ в ОВ свидетельствует о повышенном риске манифестации клинических проявлений инфицирования у новорожденного в раннем неонатальном периоде.

119

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Анохин В.А., Хасанова Г.Р. проблемы и новые направления в диагностике инфекционных заболеваний у детей // Рос.педиатр.журнал. - 2000.- №4.-

С.32-38.

2.Антонова С.С. Особенности течения беременности, родов и состояния новорождённых при различных формах хронического урогенитального хламидиоза. Автореферат дисс. канд. мед. наук, Томск, 2005

3.Бахарева И.В. Прогностическое значение исследования амниотической жидкости у беременных с высоким риском развития внутриутробной инфекции // Росс. Мед. Журнал.-2009.- №4.- С.31-36.

4.Болотских В.М., Селютин А.В., Сельков С.А. Прогностическое значение определения интерлейкинов - 6,8 и фактора некроза опухоли-α в сыворотке крови и околоплодных водах у пациенток с преждевременнм излитием вод //

Ак. и гин. – 2012. - №3.- С.32-36.

5.Вееке Б. под редакцией Аксельсона Н., Крелля Й., Вееке Б. Руководство по количественному иммуноэлектрофорезу: Методы и применение. М., Мир., 1977, 41-73.

6.Виноградова И.В. Эпидемиология, диагностические критерии и течение

хламидийной инфекции у новорождённых детей. Автореферат дисс. канд. мед. наук, Москва, 2004

7.Ганковская Л.В., Ковальчук Л.В., Бахарева И.В., Грищук А.Ю., Долгина Е.Н., Ганковская О.А., Макаров О.В. Цитокины у беременных с вирусной инфекцией // Росс.мед. журнал. - 2008.- №6.- С.22-24.

8.Евсюкова И.И. Хламидийная инфекция у новорожденных // Педиатрия. - 1997.- №3.- С.77-80.

9.Евсюкова И.И., Королева Л.И., Савичева А.М., Фоменко Б.А. Особенности клинического состояния и персистенция Chlamydia trachomatis у детей,

120

перенесших внутриутробную хламидийную инфекцию // Рос.вестн.

перинатол. - 2000.- №1.- С.14-17.

10.Зорин Н.А. Высокочувствительные варианты количественного иммуноэлектрофореза//Лабораторное дело – 1983 - №10 – с.40-43.

11.Зорин Н.А., Левченко В.Г., Зорина Р.М., Зорина В.Н. Роль макроглобулинов

врепродуктивной функции (Обзор литературы)// Акушерство и гинекология

-2005 – №4 – с.7-9

12.Зорина В.Н., Зорина Р.М., Левченко В.Г., Воронина Е.А, Зорин Н.А. Концентрация комплексов макроглобулин – IgG, как возможный критерий для прогнозирования гестоза и оценки степени его тяжести// Клиническая и лабораторная диагностика – 2001 - №8 – С.48-49.

13.Зорина В.Н. Комплексы альфа-2-макроглобулина с иммуноглобулином G и другими белками крови человека в норме и при патологии// Автореф. Канд. дис. Москва, 2001, 20 с.

14.Зорина В.Н., Зорин Н.А Белковые компоненты врожденного иммунитета в защите от патогенной инвазии (Обзор)// ЖМЭИ-2013 - №3 – с. 111-117 15.Казанцев А.П., Попова Н.И. Внутриутробные инфекционные заболевания

детей и их профилактика. – М.: Медицина, 1980. – С. 187-188.

16.Кулаков В.И., Сухих Г.Т., Кан И.Е., Верясов В.Н., Орджоникидзе Н.В. Содержание цитокинов в амниотической жидкости, пуповинной крови и сыворотке крови женщин с внутриутробной инфекцией //Ак. и гин. - 2005. -

№5.- С.14-17.

17.Кухтинова Н.В., Кротов С.А., Кротова В.А. Рецидивирующие и хронические формы хламидофилеза у детей: современные стандарты диагностики, клинические особенности, схемы семейной реабилитации // Информационнометодическое пособие. Кольцово, 2004. С.15-17.

18.Ломова Н.А., Кан Н.Е., Донников А.Е., Зубков В.В., Тютюнник В.Л., Сухих Г.Т. Клинические и молекулярно-генетические предикторы реализации