4 курс / Акушерство и гинекология / Ботвиньева_И_А_Иммунорегуляторные_белки_и_цитокины_при_беременности
.pdf91
Глава 6. СООТНОШЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ИЗУЧЕННЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ В РАЗЛИЧНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ
ЖИДКОСТЯХ В НОРМЕ И НА ФОНЕ НОСИТЕЛЬСТВА АНТИТЕЛ К
CHLAMYDIA TRACHOMATIS
Для уточнения роли изученных показателей, особенно иммунорегуляторных белков в развитии процессов, приводящих к рождению ребенка с признаками внутриутробного инфицирования на фоне антителоносительства к хламидийным антигенам во время беременности, необходимо изучить взаимосвязи уровней данных белков и цитокинов в различных биологических жидкостях. Для этого использовалось как обычное парное сравнение, так и коррелятивный анализ показателей.
Установлено, что содержание а2-МГ в околоплодных водах было значительно ниже (табл. 17), чем в сыворотке крови матери и пуповинной сыворотке крови плода.
Таблица 17
Достоверность различий между уровнями изученных белков в сыворотке матери, пуповинной сыворотке и околоплодных водах
Показател |
Пуповинная сыворотка крови |
Околоплодные воды |
||||
ь |
|
|
|
|
|
|
контроль |
Без ПВИ |
ПВИ |
Контроль |
Без ПВИ |
ПВИ |
|
|
|
|
|
|
|
|
а2-МГ |
р1=0,0172 |
нет |
нет |
р1=0,0001 |
р1=0,0001 |
р1=0,0001 |
|
|
|
|
р2=0,0142 |
р2=0,0002 |
р2=0,0001 |
|
|
|
|
|
|
|
ЛФ |
р1=0,0001 |
р1=0,0021 |
р1=0,0001 |
р1=0,0139 |
р1=0,0020 |
|
|
|
|
|
р2=0,0001 р2=0,0001 р2=0,0002 |
||
|
|
|
|
|
|
|
Альбумин |
нет |
нет |
нет |
р1=0,0001 |
р1=0,0001 |
нет |
|
|
|
|
р2=0,0001 |
р2=0,0001 |
|
|
|
|
|
|
|
|
СРБ |
р1=0,0008 |
р1=0,0003 |
р1=0,0004 |
Х |
Х |
Х |
Пояснения: р1-отличия от сыворотки крови матери, р2-отличия от пуповинной сыворотки плода, Х – показатель не изучался в данной биологической жидкости.
92
В норме отличия от ОВ составили 69 раз для сыворотки матери (ВС) и 77 раз для ПС. Содержание а2-МГ в венозной и пуповинной крови в соответствующих подгруппах было практически одинаково.
Напротив, содержание ЛФ (рис.13, табл.17) было выше всего в околоплодных водах (в 2 раза меньше в ВС и в 2,6 раза в ПС контрольной группы; соответственно; в 1,4 и 1,7 раза ниже в группе антителоносительниц, родивших здоровых детей; а при наличии ПВИ у новорожденного ниже в 1,5 раза в ПС, и практически столько же, сколько в ВС). Отличия его содержания в ВС от ПС в контроле и в группе женщин, родивших детей без ПВИ составило 1,2 раза, а при наличии признаков внутриутробного инфицирования – 1,6 раз.
контроль |
|
контроль |
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ПВИ |
без ПВИ |
ПВИ |
без ПВИ |
|
|
ВС |
|
|
|
ПС |
|
ОВ |
|
|
|
ВС |
|
|
|
ПС |
|
ОВ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Рис.13. Соотношение содержания ЛФ (слева, мг/л) и а2-МГ (справа, г/л) в различных биологических жидкостях в норме и при антителоносительстве.
Уровень альбумина, как и уровень а2-МГ, был значительно ниже в околоплодных водах. Отличия в контрольной группе составили 18,5 раз для сыворотки матери и 18 раз для ПС, а при рождении здорового ребенка от антителоносительницы в 22 раза и в венозной сыворотке и в ПС. Однако при рождении ребенка с признаками внутриутробного инфицирования,
93
концентрация альбумина в ОВ практически не отличалась от его уровней в сыворотке крови материи и пуповинной сыворотке.
Уровень альбумина в ВС матери и ПС плода во всех обследованных подгруппах практически не различался.
К сожалению, у нас отсутствовала техническая возможность изучить содержание СРБ в околоплодных водах. Тем не менее, при сопоставлении концентрации СРБ в сыворотке крови матери и пуповинной сыворотке плода было выявлено, что содержание СРБ в ПС намного меньше (в 35 раз в контрольной группе, в 270 раз в группе рожениц, имеющих IgG антитела к Ch. trachomatis, родивших здоровых детей и в 272 раза меньше в ПС новорожденных с ПВИ).
Сопоставление содержания изученных иммунокомплексов позволило установить, что уровни а2-МГ-IgG в сыворотке крови рожениц было достоверно выше в ВС во всех исследуемых группах, чем в пуповинной крови и ОВ (табл.18).
Таблица 18
Достоверность различий между уровнями изученных иммунокомплексов в сыворотке матери, пуповинной сыворотке и околоплодных водах
Показатель |
Пуповинная сыворотка крови |
Околоплодные воды |
||||
|
|
|
|
|
|
|
контроль |
Без ПВИ |
ПВИ |
контроль |
Без ПВИ |
ПВИ |
|
|
|
|
|
|
|
|
а2-МГ-IgG |
р1=0,0001 |
р1=0,0094 |
р1=0,0137 |
р1=0,0001 |
Р1=0,0012 |
р1=0,0050 |
|
|
|
|
р2=0,0001 |
|
|
Пояснения: р1-отличия от сыворотки крови матери; р2-отличия от пуповинной сыворотки плода.
Так, в сыворотке матери в контрольной группе уровень а2-МГ-IgG был в 3,6 раза выше, чем в пуповинной сыворотке плода и в 10,8 раза выше, чем в околоплодных водах. При беременности на фоне антителоносительства и
94
рождении здоровых детей превышение составило соответственно в 4,5 раза и в 12,3 раза, а при рождении детей с ПВИ – в 3,6 раз и в 5,8 раза.
Содержание цитокинов в биожидкостях было подвержено значительной индивидуальной вариабельности. Наибольшие различия между подгруппами установлены при сравнении околоплодных вод с ВС и ПС (табл.19). Исключение составил IL-18, где концентрация в ОВ была ниже, чем в сыворотке крови женщины и плода, и TNF-α, уровень которого в группе здоровых детей, рожденных от матерей-антителоносительниц, был сопоставимым в ВС и ОВ.
Таблица 19
Достоверность различий между уровнями изученных цитокинов в сыворотке матери, пуповинной сыворотке и околоплодных водах
Цитокины |
Пуповинная сыворотка крови |
Околоплодные воды |
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
контроль |
Без ПВИ |
ПВИ |
Контроль |
Без ПВИ |
ПВИ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
TNF-α |
НЕТ |
НЕТ |
НЕТ |
р1=0,0031 |
НЕТ |
р1=0,0001 |
|
р2=0,0019 |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-6 |
р1=0,0269 |
НЕТ |
НЕТ |
р1=0,0001 |
р1=0,0010 |
р1=0,0003 |
|
р2=0,0001 |
р2=0,0042 |
р2=0,0002 |
|
||||
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-8 |
НЕТ |
НЕТ |
НЕТ |
р1=0,0037 |
р1=0,0003 |
р1=0,0001 |
|
р2=0,0001 |
р2=0,0034 |
р2=0,0001 |
|
||||
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-10 |
р1=0,0448 |
НЕТ |
НЕТ |
р1=0,0009 |
|
|
|
р2=0,0001 |
р2=0,0002 |
р2=0,0138 |
|
||||
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
INF-γ |
НЕТ |
р1=0,0150 |
р1=0,0086 |
р1=0,0010 |
р1=0,0021 |
р1=0,0096 |
|
|
|
|
|
р2=0,0036 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-18 |
р1=0,0002 |
р1=0,0001 |
р1=0,0001 |
р1=0,0001 |
р1=0,0001 |
р1=0,0019 |
|
|
|
|
|
р2=0,0047 |
р2=0,0362 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
IL-1RА |
НЕТ |
НЕТ |
НЕТ |
р1=0,0001 |
р1=0,0001 |
р1=0,0024 |
|
р2=0,0001 |
р2=0,0001 |
р2=0,0038 |
|
||||
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
Пояснения: |
р1-отличия от сыворотки крови матери |
; р2-отличия от пуповинной сыворотки |
|
||||
плода; Х – показатель не изучался в данной биологической жидкости. |
|
|
95
В случае иммунорегуляторного IL-6 его содержание в ВС контрольной группы было в 3 раза выше, чем в ПС и в 20 раз ниже, чем в ОВ. При рождении здорового ребенка на фоне антителоносительства отличия содержания в ВС от ПС были минимальными (от ОВ – в 10 раз), а при рождении ребенка с ПВИ его уровни в ВС были в 1,9 раза выше, чем в ПС и в 9 раз ниже, чем в ОВ.
Концентрация TNF-α в крови рожениц и в пуповинной сыворотке плода достоверно не различалась. При сравнении данных установлено, что наибольшая концентрация провоспалительного цитокина TNF-α была в ОВ в контрольной группе и в группе детей с ПВИ. Так, содержание TNF-α в норме определялось ниже в ВС в 9,5 раз, а в ПС в 7 раз. При рождении детей с ПВИ уровень TNF-α в ОВ значительно превышал уровень данного цитокина в сыворотке матери и пуповинной сыворотке плода (соответственно в 4,1 раза и в
3,9 раза).
Содержание хемокина IL-8 в норме было выше (в 1,7 раза) в ВС, чем в ПС и не различалось практически в группе женщин с антителами к Ch. trachomatis. В околоплодных водах напротив, концентрация IL-8 была существенно выше во всех исследованных группах. Так, в контрольной группе содержание IL-8 в ОВ относительно ВС было выше в 3,3 раза, а в ПС – в 5,7 раз. В группе детей, родившихся с признаками внутриутробного инфицирования, различия составили соответственно 3,8 раза и 5,5 раз, а в группе здоровых детей, матери которых имели IgG-антитела к Ch. trachomatis, - 3,1 раза и 2,3 раза.
При сравнительном изучении содержания IL-10 наименьшее содержание наблюдалось в ПС, а наибольшее в ОВ. Так, различия ПС-ОВ в подгруппе детей с ПВИ составили 2,4 раза, а в группе здоровых детей от антителоносительниц – 1,9 раз. Значения IL-10 в контрольной группе в ОВ также достоверно отличались от его содержания в ВС и ПС (выше в 3,7 раза и
7,1 раз).
96
Содержание INF-γ также было наибольшим в ОВ, причем максимальные значения получены в контрольной группе. В ВС и ПС его уровни были ниже в 6,2 раза и в 4,1 раза в норме, как и в подгруппах женщин, имеющих IgG антитела к Ch. trachomatis при рождении ребенка с благоприятным и неблагоприятным течением раннего перинатального периода (меньше, чем в ВС в 4 раза и 2,8 раза). При сравнении содержания INF-γ в ВС и ПС, более низкая концентрация была в ВС подгрупп женщин-антителоносительниц, как при рождении здорового ребенка (в 2,7 раза), так и ребенка с ПВИ (в 3,2 раза).
При сравнении содержания IL-18 в биологических жидкостях установлено, что значительно более высокая концентрация определялась в ВС во всех исследованных группах: как в контрольной (выше в 2,7 раза), так и в подгруппе женщин, имеющих IgG антитела к Ch. trachomatis, родивших здоровых детей (больше в 2,4 раза), и женщин, родивших детей с клиническими признаками внутриутробного инфицирования (выше в 2,5 раза) относительно ПС. Уровень IL-18 в ОВ был практически сопоставим с уровнем данного цитокина в ПС, за исключением группы здоровых детей от матерейантителоносительниц, в которой он был ниже в 1,8 раз. Соответственно уровни IL-18 в ОВ были ниже, чем в ВС в контрольной группе, группах здоровых детей и детей с ПВИ матерей-антителоносительниц (соответственно в 5 раз, 4 раза и 2 раза).
Наиболее высокая концентрация IL-1RА определялась в ОВ: по сравнению с ВС в 9,2 раза выше, а с ПС - в 8,5 раз.
Различия с уровнями данного цитокина в ОВ в подгруппе антителоносительниц, где родились дети с ПВИ, составили 11,1 раз и 4,5 раза для ВС и ПС соответственно, а среди родивших здоровых детей - 6,5 раза и 4,5 раза. Содержание IL-1RА в ПС и в ВС всех групп достоверно не различалось.
Для того, чтобы определить, является ли совокупность выявленных нами изменений направленным взаимосвязанным процессом мы воспользовались
97
методом парного межгруппового исследования коррелятивных взаимосвязей между изученными показателями, а именно взаимосвязей уровней иммуномодуляторных а2-МГ и ЛФ с содержанием ряда цитокинов и классических острофазовых белков в различных биологических жидкостях
(табл.20).
Уже из первой представленной таблицы очевидно, что активность синтеза а2-МГ и других взаимодействующих с ним прямо или косвенно показателей в подгруппах кардинально различаются. Так, в норме обнаруживается отрицательная взаимосвязь а2-МГ (как негативного реактанта воспаления) с ЛФ (позитивным реактантом). Таблица
20
Выявленные коррелятивные взаимосвязи уровней сывороточного а2МГ с изученными показателями в норме и на фоне носительства антител к
Chlamydia trachomatis в зависимости от состояния новорожденного.
|
Подгруппа |
ЛФ |
а2-МГ-IgG |
АЛБ |
СРБ |
TNF-α |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Контр |
r= - 0,4245 |
нет |
r= 0,43626 |
нет |
нет |
|
|
р=0,0033 |
р=0,0414 |
|||||
|
|
|
|
|
|||
|
Без ПВИ |
r= 0,3075 |
r= 0,7903 |
нет |
нет |
r= 0,4212 |
|
|
р=0,0298 |
р=0,0344 |
р=0,0509 |
||||
|
|
|
|
||||
|
ПВИ |
нет |
нет |
нет |
r= - 0,7411 |
r= 0,5687 |
|
|
р=0,0058 |
р=0,0172 |
|||||
|
|
|
|
|
|||
|
Подгруппа |
IL-6 |
IL-8 |
IL-10 |
IFN-γ |
IL-18 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
а2-МГ |
Контр |
нет |
нет |
нет |
нет |
нет |
|
|
|
|
|
|
|
||
Без ПВИ |
нет |
r= - 0,3688 |
r= 0,4220 |
нет |
r= - 0,4579 |
||
|
|||||||
|
р=0,0412 |
р=0,0284 |
р=0,0280 |
||||
|
|
|
|
||||
|
ПВИ |
r= 0,4729 |
r= 0,4834 |
нет |
нет |
нет |
|
|
p=0,0409 |
р=0,0227 |
|||||
|
|
|
|
|
|||
|
Подгруппа |
IL-1РА |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Контр |
нет |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Без ПВИ |
r= 0,7195 |
|
|
|
|
|
|
Р=0,0083 |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
||
|
ПВИ |
нет |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
98
Пояснения: r – коэффициент корреляции; р – достоверность, курсивом отмечены недостаточно значимые различия.
Отсутствие взаимосвязей с уровнями иммунокомплексов несколько выбивается из общей картины, но может быть объяснено небольшим количеством исследований по сравнению с другими показателями. Напротив, отсутствие взаимосвязей с содержанием цитокинов в крови при физиологической беременности вполне логично, поскольку их избыток в общей циркуляции сам по себе не норма и, при отсутствии выраженной патологии, не следует каким-то определенным тенденциям.
При антителоносительстве без развития ПВИ у новорожденного, взаимосвязи несколько меняются. В частности, зависимость между а2-МГ и альбумином исчезает, а в случае ЛФ и вовсе меняется на обратную. В то же время обнаруживается не выявляемая в норме взаимосвязь между уровнями а2МГ и ряда цитокинов – IL-10 и IL-1RА (прямая), IL-8, IL-18 (обратная) и TNF-α (тенденция к прямой, приближающаяся к достоверной), а также взаимосвязь между общими концентрациями а2-МГ и содержанием его иммунокомплекса с
IgG.
Подобные взаимосвязи свидетельствуют о том, что в организме происходит ряд патологических изменений на молекулярном уровне (рассогласование синтеза некоторых регуляторных белков, активация таких функций а2-МГ, как транспорт и регуляция синтеза цитокинов, повреждение молекул а2-МГ и формирование аутоантител к ним, задержка части поврежденного а2-МГ в циркуляции тем большая, чем выраженнее повышение ЛФ - высокочувствительного маркера воспаления) даже в том случае, когда клинические проявления при беременности отсутствуют. Однако ряд зависимостей сохраняется, некоторые негативные процессы корректируется изменениями цитокинового профиля и развивающиеся патологические процессы (в большей степени воспалительные, чем аутоиммунные, судя по
99
изменениям) не оказывают выраженного негативного влияния на плаценту и плод, сохраняя их неповрежденными и защищенными от патогенной инвазии.
Совсем другие тенденции наблюдаются в подгруппе женщинантителоносительниц, родивших детей с признаками внутриутробного инфицирования. Происходит тотальное рассогласование синтеза а2-МГ и других регуляторно-транспортных белков. Выявляется обратная взаимосвязь с СРБ и четкая прямая взаимосвязь с содержанием провоспалительных цитокинов, но исчезает зависимость с противовоспалительным IL-10, а также с IL-18 обнаруживаемая при антителоносительстве без ПВИ у ребенка. Очевидно, что подобные корреляции свидетельствуют как о большей активности негативных процессов и дисбалансе синтеза регуляторных и транспортных соединений, происходящих в организме беременной антителоносительницы при развитии ПВИ, так и об активном участии а2-МГ в данных патогенетических механизмах.
Изучение взаимосвязей концентрации иммунорегуляторного а2-МГ с другими показателями в пуповинной сыворотке (ПС, табл.21) продемонстрировало в чем-то сходные, а в чем-то кардинально противоположные корреляции.
Таблица 21
Выявленные коррелятивные взаимосвязи уровней а2-МГ в пуповинной сыворотке с изученными показателями в норме и на фоне носительства
антител к Chlamydia trachomatis в зависимости от состояния новорожденного.
а2-МГ |
Подгруппа |
ЛФ |
АЛБ |
а2-МГ-IgG |
TNF-α |
IL-6 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Контр |
нет |
нет |
r= - 0,5425 |
Нет |
r= 0,5017 |
|
р=0,0847 |
р=0,0339 |
||||
|
|
|
|
|
||
|
Без ПВИ |
нет |
нет |
нет |
r= - 0,5932 |
r= - 0,4263 |
|
Р=0,0420 |
р=0,0266 |
||||
|
|
|
|
|
||
|
ПВИ |
r= - 0,3938 |
r= 0,6146 |
нет |
r= - 0,6271 |
нет |
|
р=0,0175 |
р=0,0148 |
Р=0,0513 |
|||
|
|
|
|
|||
|
Подгруппа |
IL-8 |
IL-10 |
IFN-γ |
IL-18 |
IL-1РА |
|
|
|
|
|
|
|
100
|
контр |
r= 0,5900 |
нет |
нет |
нет |
нет |
|
|
р=0,0100 |
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Без ПВИ |
r= - 0,3770 |
нет |
r= - 0,3793 |
нет |
r= - 0,6155 |
|
|
р=0,0400 |
р=0,0511 |
р=0,0251 |
|
|||
|
|
|
|
|
|||
|
ПВИ |
r= 0,4727 |
нет |
r= - 0,5336 |
нет |
нет |
|
|
р=0,0353 |
р=0,0333 |
|
||||
|
|
|
|
|
|
||
Пояснения |
: r – коэффициент корреляции; р – достоверность; курсив - недостаточно |
||||||
значимые различия. |
|
|
|
|
|
|
Так в норме зависимости, выявляемые в крови матери отсутствовали, но выявлялась прямая взаимосвязь между концентрацией а2-МГ и IL-6, IL-8, и обратная с уровнями иммунокомплексов. В ПС антителоносительниц, родивших здорового ребенка, как и в венозной крови перед родами, уровни а2МГ негативно коррелировали с IL-8. Другие взаимосвязи также утрачивались, но обнаруживалась достоверная обратная корреляция с содержанием TNF-α, IL- 6, IFN-γ, IL-1RА. Судя по этим данным, при антителоносительстве с последующим рождением здорового ребенка, а2-МГ в ПС ведет себя и как поздний реактант классического воспаления и как компонент аутоиммунного – чем больше выражен «классический» воспалительный процесс, тем активнее синтезируются цитокины и тем быстрее расходуется а2-МГ, чем активнее аутоиммунный – тем дольше а2-МГ задерживается в циркуляции и тем хуже он способствует активации синтеза цитокинов.
При анализе коррелятивных взаимосвязей содержания а2-МГ в ПС ребенка с ПВИ, сходные с венозной кровью зависимости выявляются только для IL-8. В отличие от ПС здоровых детей контрольной группы, обнаруживается достоверная негативная корреляция а2-МГ с содержанием ЛФ, TNF-α, INF-γ и позитивная – с альбумином, исчезает выявляемая в норме взаимосвязь с IL-6 и иммунокомплексами. Это свидетельствует о том, что при развитии ПВИ воспалительные процессы выражены сильнее. Однако, судя по тому, что средний уровень а2-МГ в ПС этой подгруппы не отличается от контрольных показателей, здесь достаточно активны и аутоиммунные процессы, способствующие задержке части а2-МГ в циркуляции, что маскирует его