4 курс / Акушерство и гинекология / Ботвиньева_И_А_Иммунорегуляторные_белки_и_цитокины_при_беременности

101

расходование на связывание и утилизацию продуктов воспалительной реакции. Сопоставление содержания а2-МГ в околоплодных водах с уровнями других показателей позволило обнаружить, что наблюдаемые коррелятивные взаимосвязи заметно отличаются от аналогичных сравнений в сыворотке крови

матери и в пуповинной сыворотке.

В целом установлено, что уровни а2-МГ в околоплодных водах (табл.22) достоверно коррелируют с содержанием альбумина, как в норме, так и при антителоносительстве, вне зависимости от исхода родов. Это вполне логично, поскольку оба белка в ОВ имеют преимущественно экзогенное происхождение и являются признанными маркерами проницаемости барьеров. При этом, чем больше а2-МГ, тем выше содержание его комплексовв норме и при патологии.

Таблица 22

Выявленные коррелятивные взаимосвязи уровней а2-МГ в околоплодных водах с изученными показателями в норме и на фоне

носительства антител к Chlamydia trachomatis в зависимости от состояния новорожденного.

102

Обращает на себя внимание, что в норме содержание а2-МГ позитивно коррелирует с ЛФ, IL-10, IL-18 и негативно с INF-γ. При ПВИ сохраняется зависимость только от INF-γ, а зависимость с уровнями ЛФ, IL-10 меняется на обратную, добавляется негативная взаимосвязь с IL-1RА, IL-6, IL-8. Можно было бы предположить, что при воспалении, чем больше расход а2-МГ, тем больше цитокинов, но при признаках внутриутробного инфицирования у новорожденного его уровни в ОВ напротив значительно повышены. Видимо при развитии ПВИ происходит заметное нарушение функций а2-МГ, выраженное тем больше, чем заметнее дефицит ЛФ, и приводящее, в числе прочего, к нарушениям в регуляции синтеза цитокинов. Нельзя исключать и наличие аутоиммунных процессов, вносящих свой вклад в дисбаланс молекулярного состава околоплодных вод и способствующих в конечном итоге инфицированию плода.

Изучение зависимостей содержания лактоферрина в биологических жидкостях от уровней других показателей выявило во многом совершенно иные взаимосвязи, чем корреляции с содержанием а2-МГ. В норме уровень ЛФ в венозной сыворотке роженицы (табл.23) был связан с содержанием иммунокомплексов, что объяснимо, поскольку оба фактора быстро реагируют на любые процессы, связанные с гибелью клеток – как при воспалении, так и при физиологической пролиферации.

Таблица 23

Выявленные коррелятивные взаимосвязи уровней сывороточного ЛФ с изученными показателями в норме и на фоне носительства антител к Chla-

mydia trachomatis

103

Из всех изученных цитокинов уровень ЛФ в сыворотке был связан только с IL-8 (их синтез взаимозависим) и слабодостоверно - с иммунорегуляторным IL- 6. Обратная коррелятивная взаимосвязь с уровнями СРБ и прямая с альбумином несколько необычна и, по всей видимости, отражает активность ЛФ при беременности не в качестве острофазового белка, а именно иммуномодулятора, который некоторые авторы даже относят к белкам беременности.

При беременности на фоне антителоносительства без признаков инфицирования у ребенка взаимосвязь с СРБ, АЛБ и а2-МГ-IgG исчезает, зато появляется прямая коррелятивная взаимосвязь с INF-γ, IL-1RА и обратная – с IL-10, IL-18. Вероятно, данные изменения связаны с активацией провоспалительных и антибактериальных свойств ЛФ на фоне наличия возбудителя в циркуляции.

Наконец у антителоносительниц с ПВИ плода выявляется уже тенденция к положительной взаимосвязи уровней ЛФ и СРБ, также изменяется направленность взаимосвязей с IL-18 и INF-γ, исчезает зависимость от концентрации IL-8, что явно свидетельствует о патологических изменениях на молекулярном уровне на фоне отсутствия клинических проявлении и об изменениях в функциях сывороточного ЛФ при ПВИ по сравнению с нормой.

При исследовании зависимостей уровней ЛФ от других показателей в

104

пуповинной сыворотке (табл.24) установлено, что в норме практически не одна корреляция выявленная при анализе данных по сыворотке не повторилась. Не обнаружена связь с провоспалительными цитокинами, но зафиксирована прямая зависимость от содержания INF-γ и обратная от IL-10 и IL-18. Возможно, такие различия в тенденциях по сравнению с материнской сывороткой объясняются особенностями функционирования плацентарного барьера.

При антителоносительстве без ПВИ у новорожденного выявляется гораздо больше взаимосвязей концентраций ЛФ с альбумином, а также с иммунорегуляторным IL-6 и IL-1RА. Это свидетельствует о наличии негативных процессов, однако прямых корреляций с классическим провоспалительным TNF-α, IL-8 и СРБ нет, следовательно, в данном случае влияние возбудителя на плод не слишком активно. По сравнению с сывороткой, обнаруживается больше взаимосвязей с белками и меньше – с цитокинами.

При ПВИ содержание ЛФ в ПС коррелирует с TNF-α, IL-6, а также с IL-10 и INF-γ. Обнаружена прямая взаимосвязь с СРБ и тенденция с IL-8 Очевидно, что при развитии процессов, приводящих к рождению ребенка с признаками внутриутробного инфицирования ЛФ функционирует в первую очередь как реактант воспаления и реализует свои регуляторно-транспортные функции именно в этом качестве.

Таблица 24

Выявленные коррелятивные взаимосвязи уровней ЛФ в пуповинной сыворотке с изученными показателями в норме и на фоне носительства антител к Chlamydia trachomatis в зависимости от состояния новорожденного.

Любопытно, что по сравнению с кровью матери, в ПС уровни ЛФ в большей степени взаимосвязаны с концентрациями цитокинов. Следовательно, воспалительные процессы в тканях, происходящие при инфицировании плода, в значительной степени локализованы, что и объясняет отсутствие выраженных клинических проявлений.

Лактоферрин в околоплодных водах также ведет себя во многом по другому по сравнению с сывороточным пулом (табл.25). В значительной степени это может быть связано с тем, что ЛФ, как и цитокины, синтезируется преимущественно локально и мы обнаружили его дефицит в ОВ при избытке в ВС.

Таблица 25

Коррелятивные взаимосвязи уровней ЛФ в околоплодных водах с изученными показателями в норме и на фоне носительства антител к

Ch.trachomatis.

По крайней мере, в ОВ его уровни и в норме и при антителоносительстве взаимосвязаны с содержанием TNF-α, IL-6, IL-8, IL-10. Однако обращает на себя внимание, что при ПВИ корреляция с IL-6, IL-8, IL-10 недостаточно значима, появляется не выявляемая в норме взаимосвязь с INF-γ и IL-1RА, исчезает обнаруживаемая в норме и на фоне антителоносительства без ПВИ корреляция с IL-18, прямая зависимость от содержания АЛБ в норме меняется на обратную.

Все это свидетельствует как о значительных изменениях функций ЛФ при развитии ПВИ, так и о дисбалансе всей системы иммуномодуляторных белков в целом. Заброс а2-МГ в ОВ из венозной крови, происходящий при нарушении проницаемости фетоплацентарного комплекса на фоне локального дефицита ЛФ может приводить к связыванию свободных цитокинов, к изменению регуляторно-транспортных взаимосвязей и, при повреждении продуктами воспаления, к развитию аутоиммунных процессов.

107

ОБСУЖДЕНИЕ

Полученные результаты, вкупе с полученными ранее результатами других авторов, позволяют нам выдвинуть ряд предположений об участии иммунорегуляторных лактоферрина и альфа-2-макроглобулина в развитии процессов, приводящих к рождению ослабленного ребенка с признаками внутриутробного инфицирования у женщин, имеющих антитела к Chlamydia tr. без клинических проявлений заболевания.

Известно, что содержание ЛФ повышается при беременности. Показано, что локально синтезируемый эпителиальными клетками и нейтрофилами ЛФ активно участвует в механизмах оплодотворения, его повышенные уровни ассоциированы с инфертильностью (Маркина Л.А. и др., 2008). Лактоферрин постакросомального региона сперматозоидов дозозависимо ингибирует взаимодействие гамет, предположительно в целях предотвращения полиспермии (Zumoffen C.M., et. al.,2013). Наши результаты еще раз подтверждают, что синтез этого белка активируется при физиологически протекающей беременности и его уровень в венозной крови растет пропорционально сроку.

Однако, помимо иммуномодуляторной роли при беременности, ЛФ является достаточно чувствительным реактантом острой фазы воспаления (Legrand D., et al., 2005). Согласно проведенным ранее исследованиям, ЛФ может быть использован в качестве «маркера готовности» к проведению вспомогательных репродуктивных технологий у пациенток с трубноперитонеальным фактором бесплодия (Маркина Л.А., и др., 2008), в том числе и в тех случаях, когда у женщины отсутствуют клинические проявления перенесенных ранее воспалительных заболеваний. Причиной тому, вероятно, являются его выраженные антибактериальные и противовирусные, а также антиоксидантные свойства. Общеизвестно, что при физиологически протекающей беременности происходит супрессия адаптивного иммунитета,

108

сопровождающаяся активацией врожденного иммунитета. Специфическое иммунное равновесие в организме беременной женщины позволяет ограждать от иммунной агрессии генетически чужеродный плод, сохраняя при этом защиту от инфекционных агентов (Макаров О.В., и др., 2011). Таким образом, при функциональной депрессии адаптивного звена иммунного ответа, особенно важное значение в защите от распространения инфекционного патогена приобретают факторы врожденного иммунитета. Показано, что активация Tollподобных рецепторов (TLR) липополисахаридами патогена влияет на миграцию и функционирование иммунных клеток, активирует секрецию цитокинов и хемокинов клетками трофобласта (Darville T, et.al. 2003, Макаров О.В. и др., 2008).

Однако подобное иммуномодулирующее воздействие на синтез цитокинов оказывает и лактоферрин (Legrand D., et al., 2005). Кроме того, он способен оказывать непосредственное ингибирующее влияние на жизнедеятельность патогенов (Зорина В.Н., Зорин Н.А., 2013). Несмотря на отсутствие клинических проявлений заболевания, при контакте хламидии с фагоцитами должна происходить дегрануляция нейтрофилов, включающая высвобождение депонированного ЛФ и активных форм кислорода (Legrand D., et al., 2005), а также развитие так называемой реакции «кислородного взрыва». Кроме того, при распознавании патогена фагоцитами под влиянием NFκB активируются гены, кодирующие синтез провоспалительных белков, в т.ч. ЛФ, что неизбежно приведет к увеличению его уровней в общей циркуляции.

В этой связи можно было бы предположить, что выявленное нами повышение уровней лактоферрина в крови беременных антителоносительниц к хламидийным антигенам, а также в пуповинной сыворотке плода, является благоприятным фактором, способствующим подавлению активности Chlamydia trachomatis. Тем более, учитывая выявленное нами дозозависимое связывание а2-МГ и ЛФ с антигенами хламидии, которое безусловно способствует

109

распознаванию и элиминации патогена, не говоря уже про прямую антибактериальную активность данных белков.

Однако анализ содержания данного белка в околоплодных водах женщин, имеющих в крови антитела, без клинических признаков инфекции, по крайней мере отчасти опровергает данное предположение, поскольку, несмотря на избыток ЛФ в общей циркуляции, наблюдается его достоверный дефицит в зоне микроокружения плода. Подобный врожденный либо функциональный дефект локального синтеза не только способствует заражению матери Chlamydia trachomatis, но и значительно повышает риск инфицирования плода. К тому же недостаточно активное развитие локальной реакции факторов врожденного иммунитета на патоген приводит к тому, что у подобных женщин воспалительная реакция протекает недостаточно остро, хронизируется и, не проявляясь клинически, все же провоцирует «продолженный вялотекущий гиперсинтез» провоспалительных белков и цитокинов, который «растаскивается» по всему организму с током крови, нанося еще больший вред организму матери и плода.

В числе прочего, это негативное воздействие отражается на функционировании иммунорегуляторного альфа-2-макроглобулина. Данный белок, как и ЛФ, достаточно активно участвует в развитии беременности (Зорин Н.А. и др., 2005) и также является реактантом воспалительной реакции, но, в отличие от ЛФ, менее чувствительным, более поздним и негативным. Однако при аутоиммунных процессах хроническое подострое воспаление приводит к тому, что молекулы а2-МГ постоянно подвергаются повреждающему воздействию высвобождаемых при реакции кислородного взрыва окислительных агентов (Stief T.W., et. al., 2000) и накапливаются в циркуляции. Подобные поврежденные молекулы обладают измененным сродством к транспортируемым ими цитокинам, сниженным сродством к рецепторам (Wu S.M. et. al., 1998 Chiabrando, G.A.,2002), отличаются нарушенными регуляторно-

110

транспортными функциями и иммуногенностью (Зорина В.Н., и др. 2001). В частности, данные молекулы обладают сниженным сродством к рецепторам клеток АПК, что, при их накапливании, затрудняет развитие «полноформатного» иммунного ответа с выраженной воспалительной реакцией, у них значительно повышен аффинитет к TNF-α, что затрудняет его «адресную» доставку и приводит к дисрегуляции синтеза по типу обратной связи. Кроме того, протеиназы в составе комплекса с поврежденным а2-МГ сохраняют свою литическую активность (Kolodziej S.J. et. al., 1998) и при осаждении комплексов на ткани могут активно их повреждать (Moore A.R., et. al., 1999), нарушая проницаемость.

Согласно полученным в рамках данного исследования результатам, намивыявлено повышение уровней а2-МГ в сыворотке крови рожениц при наличии антител к Chlamudia trachomatis без клинических проявлений заболевания и рождении детей с признаками внутриутробного инфицирования. Это может объясняться превалированием одного из двух разнонаправленных процессов – накоплением дефектных молекул, способствующих развитию аутоиммунных процессов, в циркуляции над расходом молекул а2-МГ на утилизацию протеиназ при вялотекущем воспалении. Отсутствие значимых изменений в пуповинной сыворотке плода при антителоносительстве может быть следствием того, что при низких титрах антител и, соответственно, относительно низкой активности развития патологических процессов не происходит тотальное повреждение защитных функций плаценты, что и позволяет некоторым антителоносительницам рожать здоровых детей.

Тем не менее, при ПВИ отмечается выраженное повышение уровней а2МГ в околоплодных водах, что в значительной степени является следствием «заброса» данного белка из тока венозной крови при увеличении проницаемости фетоплацентарного барьера, поскольку локальный синтез а2-МГ минимален. Об этом свидетельствует параллельное увеличение содержания